共查询到19条相似文献,搜索用时 77 毫秒
1.
目的构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并检测其在恶性胶质瘤细胞SHG-44中的表达。方法构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas,并用脂质体介导转染入SHG-44细胞,通过RT-PCR及western blot检测细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。结果构建了survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SWas,并成功导入SHG-44细胞中,且有效表达,使SHG-44细胞中survivin mRNA和蛋白表达水平均降低。结论Survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-sVVas可以降低SHG-44细胞survivin基因的表达。 相似文献
2.
目的:采用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制基因survivin对白血病细胞增殖的影响.方法:1.细胞抑制率实验分5组:111nmol/L反义寡核苷酸组、333nmol/L反义寡核苷酸组、555nmol/L反义寡核苷酸组、777nmol/L反义寡核苷酸组、空白组.转染后24、48、72h收集细胞进行检测:用台盼蓝染色进行活细胞计数,计算细胞抑制率.2.细胞周期及survivin蛋白表达实验分4组:555 nmol/L寡核苷酸组、544nmol/L无义组、脂质体组、空白组,转染后24、48h流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测survivin蛋白水平.结果:不同浓度的反义寡核苷酸对K562细胞的细胞抑制率均高于空白组(P<0.05),并随反义寡核苷酸的浓度增大抑制率增加;随作用时间延长,抑制作用越明显,抑制率与浓度及时间呈正相关;555nmol/L反义寡核苷酸作用后,K562细胞被阻滞在G0/G1期,细胞周期进程受到明显阻滞,而无义、脂质体、空白组细胞周期进程无明显变化(P<0.05);反义寡核苷酸作用48h后survivin蛋白表达水平明显降低,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05).结论:survivin反义寡核苷酸能抑制K562细胞的增殖. 相似文献
3.
目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸对大鼠胶质瘤生长的抑制作用。方法所有大鼠均在立体定向导引下右尾状核区接种1.0×10^6胶质瘤细胞。治疗组接种C6胶质瘤细胞后24h内用PCNA反义寡核苷酸原位穿刺注射进行治疗,对照组只注射Hank’s液,每周1次,连续4周;观察两组大鼠肿瘤的一般情况与生存期。4周后断颈处死大鼠,完整地取下肿瘤,测量肿瘤体积,计算其抑瘤率。结果PCNA—ASODN治疗组大鼠胶质瘤的生长明显受到抑制,抑瘤率为64.5%。结论PCNA反义寡核苷酸对胶质瘤的生长具有抑制作用,通过反义技术可抑制靶基因的表达,从而抑制胶质瘤细胞的增殖。 相似文献
4.
目的:探讨surv iv in反义核酸对阿霉素诱导胰腺癌细胞系PANC-1细胞凋亡的影响。方法:将已构建成功的surv iv in反义核酸真核表达载体pcDNA 3-SVV as电转染胰腺癌细胞系PANC-1,并筛选转染成功的阳性克隆;台盼蓝拒染法观察surv iv in反义核酸与阿霉素联合应用对PANC-1细胞生存的影响;细胞计数和M TT试验测定转染细胞对阿霉素敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况。结果:转染surv iv in反义核酸的PANC-1/SVV as细胞增殖明显受抑,与PANC-1/neo细胞、PANC-1细胞进行比较,具有显著性差异(P<0.05);M TT实验显示,阿霉素对PANC-1/SVV as、PANC-1/neo、PANC-1细胞的IC50值分别为0.285±0.012μm o l/L、1.528±0.317μm o l/L和1.540±0.253μm o l/L。统计分析证明差异具有显著性(P<0.01);经琼脂糖凝胶电泳,PANC-1/SVV as细胞可见到DNA梯形条带,而PANC-1/neo、PANC-1细胞未见到。结论:surv iv in反义核酸可促进阿霉素诱导PANC-1细胞凋亡,为胰腺癌的基因治疗研究提供了实验依据。 相似文献
5.
目的:探讨在体外c-myc反义核酸是否可通过阻断人脑胶质瘤细胞中c-myc基因的表达而抑制细胞增殖并诱导分化.方法:人工合成与c-mycmRNA起始码及其后四个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸(简称反义核酸)片段,用它处理培养的BT325细胞,观察它对细胞增殖的影响.同时用免疫细胞化学方法检测细胞中Myc蛋白的水平以及能反映胶质瘤细胞分化的S-100和GFAP两种蛋白的水平,分析这些指标的变化.结果:发现4umol/L的c-myc反义核酸明显抑制BT325细胞的增殖和Myc蛋白的合成,且后者发生在加入反义核酸后1h,并持续24h以上,而细胞增殖受抑制要到第5日才明显.从第2日到第5日细胞中S-100和GFAP染色明显加深,反映细胞有分化趋势.用同样长度的无关序列寡聚脱氧核苷酸作对照,则未见上述变化,表明c-myc反义核酸的作用是序列特异性的.结论:c-myc反义核酸可特异地抑制BT325细胞中Myc蛋白的合成和细胞增殖,并能诱导其分化. 相似文献
6.
目的:探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对MG63细胞的抑制作用机制及对化疗敏感性的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染MG63细胞后,用单四唑(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及W estern blot法分别检测survivin mRNA及蛋白质的表达。结果:MG63细胞转染ASODN后生长明显受抑制,且呈时间和剂量依赖性;Lip-ASODN组细胞72 h总凋亡率为(81.12±3.2)%,Lip-SODN组为(27.09±2.1)%,空脂质体组为(26.87±1.6)%。三组比较,Lip-ASODN组差异具有显著性意义(P<0.05),survivin mRNA及蛋白质的表达水平明显下降。survivin ASODN和多柔比星(ADM)联合处理组的细胞抑制率在72 h达(91.6±3.4)%,明显高于单用survivin ASODN的(41.2±4.6)%(P<0.05)和ADM的(60.8±4.2)%(P<0.05)。结论:survivin ASODN能够抑制骨肉瘤细胞系MG 63的增殖、诱导其凋亡,并能增加其对化疗药物的敏感性,可能是因surviving ASODN能下调survivin mRNA和蛋白质的表达而起作用。 相似文献
7.
目的:观察脑胶质瘤患者脑组织生存素(survivin)的表达及其反义寡核苷酸(survivin ASODN)对脑胶质瘤U251细胞生长和凋亡的影响。方法:RT-PCR法检测脑胶质瘤患者脑组织survivin mRNA表达,脂质体介导下,分别以100、300、500 nmol/Lsurvivin ASODN作用于脑胶质瘤U251细胞48 h后,观察细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:脑胶质瘤患者脑组织有survivin mRNA表达,阳性率为76.7%。不同浓度survivin ASODN转染48 h后,细胞生长抑制率分别为(52.24±6.59)%、(36.14±4.01)%和(24.14±5.57)%,凋亡指数分别为(19.46±3.85)%、(38.6±1.85)%和(55.34±3.16)%,与对照组及不同浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:脑胶质瘤患者脑组织有survivin mRNA表达,survivin ASODN以剂量依赖方式抑制脑胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞凋亡。 相似文献
8.
C—myc反义寡聚脱氧核苷酸抑制人脑胶质瘤细胞系BT325Myc蛋… 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨在体外c-myc反义核酸是否可通过阻断人脑胶质瘤细胞中c-myc基因的表达而抑制细胞增殖并诱导分化,方法:人工合成与c-mycmRNA起始码及其后四个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸(简称反义核酸)片段,用它处理培养的BT325细胞,观察它以细胞增殖的影响,同时用免疫细胞化学方法检测细胞中Myc蛋白的水平以及能反映胶质瘤细胞分化的S-100和GFAP两种蛋白的水平,分析这些指标的变化,结果:发现4μ 相似文献
9.
目的 研究反义PCNA基因片断对胶质瘤细胞株U251的细胞增殖的抑制作用。方法 用脂质体介导寡核苷酸转染培养的U251胶质瘤细胞,以MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学方法分别检测相关基因和蛋白的表达,通过流式细胞仪检测细胞周期和TUNEL法检测细胞凋亡。结果 不同浓度的反义寡核苷酸对肿瘤细胞的增殖活性均有抑制作用,且有一定的剂量依赖性。PCNA反义寡核苷酸能够诱导胶质瘤细胞凋亡,且与反义寡核苷酸浓度和作用时间有关。结论 反义PCNA寡核苷酸片断能有效地抑制胶质瘤细胞的体外增殖,且能够诱导胶质瘤细胞的凋亡。 相似文献
10.
目的 观察垂体瘤转化基因(pituitary tumortr ansforming gene,PTTG)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对恶性胶质瘤增殖的抑制作用.方法 将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核.按照不同的PTTG反义寡核苷酸浓度在选定的时间点立体定向原位注射于肿瘤区域.3周后处死大鼠,取标本做GFAP、PTTG、PCNA免疫组化染色.结果 不同浓度的PTTG-ASODN对C6胶质瘤模型的增殖抑制呈时间、浓度依赖性,而且高浓度,早期应用,反复应用PTTG-ASODN抑制胶质瘤模型肿瘤增殖的效果明显.结论 PTTG-ASODN可以抑制胶质瘤的增殖,有望成为胶质瘤基因治疗的一种新策略. 相似文献
11.
目的:利用蛋白质组学研究技术分离、鉴定人脑恶性胶质瘤SHG-44细胞经人参皂甙Rh2(G-Rh2)作用后差异表达蛋白,探讨G-Rh2抗胶质瘤作用机制。方法:提取32 μmol?L-1 G-Rh2处理72 h后的SHG-44细胞及空白对照组细胞总蛋白;通过双向凝胶电泳分离蛋白质
,选取2D图谱中差异表达≥1.5倍且P<0.05的蛋白质斑点,使用基质辅助激光解析离子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行肽指纹图谱(PMF)鉴定。结果:与空白对照组比较,SHG
-44细胞经G-Rh2作用后,双向电泳发现了20个差异蛋白质点,其中16个蛋白质点表达下调,4蛋白质点上调。质谱分析了前5个差异显著的下调蛋白质点,分别为丝切蛋白1(cofilin 1)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)、过氧化物氧化还原酶1(peroxiredoxin 1,Prx 1)、热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)。结论:差异表达的蛋白质可能参与了G-Rh2对人脑恶性胶质瘤的抗肿瘤作用。 相似文献
,选取2D图谱中差异表达≥1.5倍且P<0.05的蛋白质斑点,使用基质辅助激光解析离子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行肽指纹图谱(PMF)鉴定。结果:与空白对照组比较,SHG
-44细胞经G-Rh2作用后,双向电泳发现了20个差异蛋白质点,其中16个蛋白质点表达下调,4蛋白质点上调。质谱分析了前5个差异显著的下调蛋白质点,分别为丝切蛋白1(cofilin 1)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)、过氧化物氧化还原酶1(peroxiredoxin 1,Prx 1)、热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)。结论:差异表达的蛋白质可能参与了G-Rh2对人脑恶性胶质瘤的抗肿瘤作用。 相似文献
12.
目的 在人胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中检测到芳香化酶细胞色素P450(AROM)表达的基础上探讨AROM对胶质瘤细胞生长增殖及分化的作用。方法 通过构建反义AROM真核表达载体,转染SHG-44细胞,利用流式细胞仪、MTT法、免疫荧光染色及激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)等技术观察封闭AROM基因表达后细胞生长曲线、细胞周期及中间丝蛋白GFAP和Vimentin表达的变化。结果 成功构建了反义AROM真核表达载体PCI/as-AROM并使AROM的表达封闭达50%以上。SHG-44细胞在转 染了PCI/as-AROM和空载体PCI-neo后,生长曲线、细胞周期无明显变化,但GFAP免疫荧光强度减弱而Vimentin免疫荧光强度增强。结论 反光AROM可能对SHG-44细胞增殖无明显影响但对神经胶质瘤细胞的分化有一定的抑制作用。 相似文献
13.
脑胶质瘤SHG-44细胞动力学特征的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨脑胶质瘤潜在倍增时间 (Tpot)实验条件。方法 采用荷脑瘤动物模型 ,溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR)掺入法测定Tpot。结果 所建立的Wistar脑胶质瘤大鼠模型实用、可靠。在体潜在倍增时间、有效倍增时间 (Teff)分别为 8.15天和 18.4 6天。BudR掺入率、细胞标记指数 (LI)均在BudR掺入后 8h达最高 ,>6Gy辐射其潜在倍增时间明显缩短。结论 在体、离体BudR掺入标记率存在明显差异。辐射吸收剂量 >12Gy,其实际倍增时间、潜在倍增时间、有效倍增时间降至最低点。提示脑胶质瘤放疗过程中存在细胞加速再增殖 ,宜连续治疗 相似文献
14.
人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法:利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果:除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白),而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG-44细胞中表达较强,而GFAP在CHG-5细胞中表达较强。丙酮、75%酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝(尤其是Vimentin)染色极弱。结论:CHG-5分化程度较SHG-44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。 相似文献
15.
16.
Survivinisakindofinhibitorofapoptosispro teins (IAP)withparticularstructureandcharacter .Itisexpressedinmanytumorsinsteadofnormaltis sue.Forthisuniqueexpressionspecificity ,survivinhavebeenahotpointofinvestigationfortumordiag nosisandtreatment.Onthebaseof… 相似文献
17.
短发夹RNA靶向抑制suvivin基因对人胶质瘤U251细胞凋亡和细胞周期的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的: 构建表达靶向抑制survivin基因的表达短发夹结构 (shRNA)的RNA干扰载体,导入人胶质瘤细胞U251中,研究靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导以及细胞周期阻滞作用. 方法: 在survivin全长序列中选取设计3条含19个核苷酸(19nt)靶序列两条反向重复序列,中间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,分步酶切连接,构建出含有3条shRNA模板且能独立编码shRNA的重组干扰载体pGenesil-1/survivin; 采用Metafectene转染试剂将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251;采用荧光定量PCR以及Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Annexin-V/PI双色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞. 结果:实时荧光定量PCR以及Western blotting检测显示,survivin基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;流式细胞仪检测分析显示,survivin基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞. 结论: 靶向survivin基因的重组siRNA干扰载体pGenesi-l/survivin介导的RNAi显著靶向抑制了survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达, 并明显地诱导了U251细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞. 相似文献
18.
目的 克隆小鼠survivin cDNA,构建survivin反义RNA的慢病毒载体.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从肾癌786-0细胞中扩增出survivin cDNA,反向克隆到慢病毒载体转移质粒pLO134中.结果 RT-PCR扩增出约370 bp片段,经酶切鉴定显示survivin反义RNA慢病毒载体(survivin pLO134)构建成功.结论 survivin反义RNA与已发表的的序列相同,我们已成功地把survivin反义RNA克隆到慢病毒载体转移质粒pLO134中. 相似文献
19.
丁酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44增殖分化的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究丁酸钠对培养人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和分化诱导。方法 以2mmol/L丁酸钠处理SHG-44细胞,用MTT比色、核仁组成区银染观察细胞增殖抑制,用流式细胞术、电镜观察超微结构、免疫组织化学染色、凝集试验鉴定细胞分化。结果 SHG-44细胞经丁酸钠处理后:①细胞增殖受到明显抑制,并具有时间、剂量依赖性;②细胞周期受阻,S期细胞比例减少;③电镜观察发现细胞核变规则,异染色质增多,胞浆中线粒体、粗面内质网等细胞器增多并趋于正常;④胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达增强,改型蛋白(Vimentin)表达减弱;⑤细胞凝集度明显变低。结论 丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖,2mmol/L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生明显分化。 相似文献