缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的调节作用

目的 观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)的活性与靶基因表达的变化,探讨其对体外培养的心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia- reoxygenation,H/R)损伤的调节作用.方法 取SD新生大鼠(1～3日龄)分离培养心肌细胞;在培养的第3天将心肌细胞随机分为3组(每组重复6 次):正常对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、甲基乙二酰基甘氨酸组(DMOG+H/R组);建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂DMOG进行干预;观察各组心肌细胞的搏动频率;应用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清中的肌钙蛋白I(cTnI)含量;采用RT-PCR法检测各组HIF-1α及下游因子血红素氧合酶-1(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)mRNA水平.结果 与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组心肌细胞的搏动频率均明显减少(P﹤0.01),而DMOG+ H/R组心肌细胞的搏动频率又较H/R组明显升高(P﹤0.01);与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的cTnI含量明显增高(P﹤0.01),且HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平亦明显增高(P﹤0.01或P﹤0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平明显增高,而cTnI含量则明显降低(P﹤0.05).结论 HIF-1的稳定表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用.     

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染乳鼠心肌细胞,并建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧H/R模型,测定各组心肌细胞的存活率、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量、caspase-3活性及超氧化物歧化酶(SOD)活力,此外用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率,Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响.结果 与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞存活率和SOD活性降低(P<0.05);PPI1活化型突变体转染组细胞的LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率则降低,细胞存活率和SOD活性升高,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有统计学意义(P<0.05).Western blot表明该组细胞P53、Bax 表达下调,pAkt表达上调.结论 PPI1活化型突变体对H/R造成的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与稳定心肌细胞膜、减轻氧自由基损伤及减少细胞凋亡有关.     

川芎嗪对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究川芎嗪对培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 将原代培养的SD乳鼠心肌细胞按随机数字表法分为5组,分别为正常组、H/R损伤模型组和H/R+川芎嗪给药组(川芎嗪浓度分别为50、100、150 μg·mL-1),每组10孔.测定各组心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 与H/R损伤模型组相比,川芎嗪给药组可明显提高SOD活性,降低MDA含量、LDH活性,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 川芎嗪对体外培养心肌细胞模拟H/R损伤模型有明显的保护作用,其保护机制可能与川芎嗪抑制自由基生成或清除自由基有关.     

氢气预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的:探讨氢气对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制。方法:原代培养的SD乳鼠心肌细胞,随机分3组即对照组、缺氧/复氧组、氢气预处理组。对照组常规培养;缺氧/复氧组预先在100%N2环境中培养60min,复氧30min;氢气预处理组预先在2%H2+98%N2环境中培养60min,复氧30min。采用TUNEL法、MDA试剂盒法和MTT法分别检测乳鼠心肌细胞细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量和细胞活力。结果:氢气预处理能够降低乳鼠心肌细胞的凋亡率(P<0.05),减少MDA的生成(P<0.05),增强细胞活力(P<0.05)。结论:氢气预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,可能机制是抗脂质过氧化抑制细胞凋亡提高细胞活力。     

一氧化氮对心肌细胞缺氧复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的：研究一氧化氮对培养鼠心肌细胞缺氧复氧所致脂质过氧化损伤的保护作用，探讨心肌缺血修复机制。方法：采用细胞缺氧复氧损伤模型，培养细胞随机分为4组：A组正常对照组(培养3h)；B组单纯缺氧／复氧(A／R缺氧2h复氧1h)；C组缺氧预处理组(缺氧20min后复氧20min，然后缺氧复氧)；D组一氧化氮预处理组[加入S-亚硝基-已酰青酶胺(s-nitroso-n-acety1-penicil—lamine，SNAP)使其终浓度为1mmol／L，预处理40min后A／R。与复氧后测定培养液中肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase，LDH)活性变化及细胞内丙二醛含量和细胞存活率。结果：与正常组比，单纯缺氧／复氧组CK[(941．35&;#177;152．53)nkat／L]、LDH[(7416．48&;#177;984．20)nkat／L]、丙二醛[(1．35&;#177;0．26)μmol／g]，水平显著升高(P&;lt;0．01)，细胞存活率(54．68&;#177;6．00)％显著降低(P&;lt;0．01)。1mmol／L SNAP预处理组[细胞存活率为(74．55&;#177;4．11)．CK为(582．45&;#177;140．86)nkat／L，LDH为(5766．15&;#177;941．69)nkat／L，丙二醛为(0．89&;#177;0．16)μmol／g]和缺氧预处理组[细胞存活率为(74．69&;#177;6．14)．CK为(547．94&;#177;125．52)nkat／L，LDH为(5882．34&;#177;844．67)nkat/L，丙二醛为(0．85&;#177;0．12)μmol／g]上述变化明显减轻(P&;lt;0．01)。结论：一氧化氮可抑制脂质过氧化反应，减轻自由基对心肌细胞的损伤，对细胞缺氧复氧损伤具有与缺血预处理相似的保护作用。     

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸（UA）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5～64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组（1μmol/L）、UA中剂量组（4μmol/L）、UA高剂量组（16μmol/L）和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组（16μmol/L UA+100 nmol/L BBP）,检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素（IL）-1β、IL-6、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加（P<0.05）;与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增...     

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。     

促红细胞生成素对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EP0）对心肌细胞缺氧／复氧（HR）损伤的保护作用及其机制。方法对乳鼠心肌细胞进行原代分离培养,并缺氧2h,复氧1h,建立HR损伤模型。心肌细胞随机分为四组：正常细胞培养组（空白组）,HR组,HR＋EPO 10U／ml组（EPO组）,HR＋EPO10U／ml＋U0126 10μmol／L组（U0126组）。全自动生化分析仪检测各组细胞培养液LDH活性;MTT法检测心肌细胞活性;TUNEL法：流式细胞仪Annexin—V—FITC法检测凋亡心肌细胞;Westem—blot法测定各组心肌细胞ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白含量。结果EPO显著降低心肌细胞HR损伤后LDH的漏出,增强细胞的活性,减少细胞的凋亡比例,提高ERK。蛋白磷酸化水平;而经过U0126（MAPK的阻滞剂）的处理,心肌细胞LDH外溢量增加,细胞活性显著下降,凋亡细胞的比例明显增加,且ERK1/2蛋白磷酸化水平显著降低。结论EPO对心肌细胞HR损伤有一定的保护作用,其机制与ERK1/2信号通路的激活及抑制心肌细胞凋亡有关。     

胰岛素对新生大鼠缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对缺氧/复氧所诱导心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法通过给原代培养乳鼠心室肌细胞行缺氧2h/复氧4h,建立缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation)心肌细胞损伤模型。于复氧期开始随机给予0.9%生理盐水(VC组)、胰岛素(INS组)、LY294002(LY组)、胰岛素 LY294002(INS LY组)干预。于复氧4h后,利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA)含量,原位末端标记法(TUNEL)和DNA梯带法(DNALadder)标测细胞凋亡,免疫印迹法(Westernblotting)检测磷酸化Akt表达,并比较各组间差异。结果与VC组相比,INS组中LDH活性、MDA含量、凋亡指数(AI)显著降低(P<0.01),磷酸化Akt表达明显增加(P<0.01);但上述指标变化可被LY294002(PI3K抑制剂)所抑制。结论在复氧早期给予胰岛素干预可显著地减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制与PI3K/Akt所介导的抗细胞凋亡作用有关。     

阿魏酸钠预处理保护成年大鼠心肌细胞缺氧复氧的损伤

背景:阿魏酸钠预处理能对心肌细胞产生保护作用并已在大鼠体外心脏和乳鼠心肌细胞水平得以证实,尚缺乏在成年大鼠心肌细胞水平上的研究。目的:探讨阿魏酸钠预处理对成年大鼠缺氧复氧心肌细胞的保护作用及其K+ATP通道机制。方法:用Langendorff系统灌流心脏,以胶原酶消化法分离纯化成年大鼠心肌细胞并给予模拟缺氧复氧液以及干预因素阿魏酸钠、K+ATP通道阻断剂格列本脲处理,随机分为6组:正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组、格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组。结果与结论:①心肌细胞存活率:缺氧复氧组与对照组比较,细胞存活率明显降低(P<0.01);缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组与缺氧复氧组比较,细胞存活率明显增高(P<0.01);格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组与缺氧复氧组相比,差异无显著性意义,但明显高于缺氧预适应+缺氧复氧组(P<0.01)。②乳酸脱氢酶活性:各组间乳酸脱氢酶活性比较结果与心肌细胞存活率比较结果吻合。③透射电镜观察:缺氧复氧组心肌细胞线粒体明显肿胀,嵴消失或变形,细胞膜结构破坏,有核边聚现象;缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组心肌细胞超微结构改变轻微,线粒体排列规则、大小均匀,嵴及内外膜清晰完整,核膜完整,较缺氧复氧组损伤明显减轻;格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组心肌细胞超微结构改变与缺氧复氧组相似。结果可见阿魏酸钠预处理对成年大鼠心肌细胞具有药理性心肌缺血预适应保护作用且该作用可能与K+ATP通道有关。     

促红细胞生成素对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的抗凋亡作用及机制研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨蛋白激酶C(PKC)和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)与EPO在抗凋亡信号通路中的相互关系.方法 分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,并分为对照组、缺氧/复氧组、EPO组和PKC抑制剂白屈菜红碱组,建立缺氧/复氧模型;用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜扫描观察细胞黄素蛋白自体荧光强度变化,监测钾通道开放情况.结果 缺氧/复氧组心肌细胞凋亡率明显高于对照组[(42.56±8.00)%比(17.88±2.00)%,P<0.053,黄素蛋白自体荧光强度值与对照组比较差异无统计学意义[(0.278±0.170)×10-2比(0.149±0.050)×10-2,P>0.05];EPO组心肌细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组[(22.73±5.00)%比(42.56±8.00)%,P<0.05],黄素蛋白自体荧光强度值则较缺氧/复氧组明显增强[(2.201±1.090)×10-2比(0.278±0.170)×10-2,P<0.01];白屈菜红碱对EPO抗凋亡和增强黄素蛋白自体荧光强度有阻断作用[细胞凋亡率:(46.72±17.00)%比(22.73±5.00)%,荧光强度:(0.986±0.320)×10-2比(2.201±1.090)×10-2,P<0.01和P<0.05].结论 通过激活PKC继而开放mitoKATP通道可能是EPO抗缺氧/复氧心肌细胞凋亡的信号通路之一.     

慢性阻塞性肺疾病患者血清HIF-1α、OPN水平与继发肺动脉高压的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清低氧诱导因子1α(HIF-1α)、骨桥素(OPN)水平与继发肺动脉高压(PH)的关系。方法回顾性选取2016年6月至2018年6月北京市海淀医院收治的COPD继发PH患者100例,依据肺动脉收缩压(PASP)分为轻度组(PASP为31~40 mmHg,n=48)、中度组(PASP为41~70 mmHg,n=32)、重度组(PASP>70 mmHg,n=20),同期选取单纯COPD(无继发PH)患者50例。检测所有患者的血清HIF-1α、OPN水平和肺通气功能[动脉血氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2)]。结果COPD继发PH患者PASP [(56.24±6.82)mmHg]、PaCO2 [(54.18±6.72) mmHg]和血清HIF-1α[(265.42±30.21) pg/ml]、OPN [(160.95±19.71)μg/L]水平明显高于单纯COPD患者[(20.46±2.49) mmHg、(45.04±4.88) mmHg、(182.12±25.12) pg/ml、OPN(102.12±15.42)μg/L]但PaO2 [(62.45±7.82) mmHg]明显低于单纯COPD患者[(75.04±7.86)mmHg],差异均具有统计学意义(P<0.05);重度组患者PASP[(81.42±8.59) mmHg]、PaCO2 [(64.01±6.82) mmHg]和血清HIF-1α[(319.41±33.42)pg/ml]、OPN [(200.52±23.04)μg/L]水平明显高于中度组[(55.79±5.62) mmHg、(54.99±5.72) mmHg、(264.27±27.62) pg/ml、OPN(159.72±17.97)μg/L]但PaO2 [(51.04±5.67) mmHg]明显低于中度组[(61.05±6.32) mmHg];中度组患者PASP、PaCO2和血清HIF-1α、OPN水平明显高于轻度组[(36.24±3.81) mmHg、(50.02±5.12) mmHg、(230.11±25.72) pg/ml、OPN(135.42±15.27)μg/L],但PaO2明显低于轻度组[(67.52±6.91) mmHg],差异均具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示血清HIF-1α、OPN水平与PASP呈明显正相关(r=0.812 <0.001;r=0.803,P<0.001)。结论COPD患者血清HIF-1α、OPN水平与继发PH有关血清HIF-1α、OPN水平可作为评估COPD继发PH及其病情的重要指标。     

氟伐他汀对缺氧复氧处理的猪颈总动脉内皮细胞氧化还原功能及ICAM-1表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂在缺血再灌注过程中的内皮保护作用。方法培养猪颈动脉血管内皮细胞(PCAEC),以0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L的氟伐他汀(来适可)共生长44 h,经缺氧1 h复氧3 h处理,以血清免疫学及细胞免疫化学方法测定MTT、GSH-PX、MDA、SOD、ICAM-1的值,观察氟伐他汀对缺氧复氧(H/RI)处理的猪颈总动脉内皮细胞氧化还原功能及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的影响。结果0.5μmol/L氟伐他汀干预的H/RI后细胞活力与单纯H/RI组有明显差别(P=0.01);H/RI可明显降低培养细胞的SOD活性,产生MDA较氟伐他汀组及正常对照组间有明显升高(P=0.001),正常对照组及氟伐他汀组与H/RI组间GSH-PX对照有明显差别(P=0.002);ICAM-1细胞免疫化学染色各组间均有显著差别(P=0.018)。结论适当浓度的氟伐他汀对缺氧复氧的内皮细胞功能具有保护作用。     

蛋白质非酶糖化在丙酮醛促进心肌细胞缺氧／复氧损伤敏感性增加中的作用

目的：观察蛋白质非酶糖化是否会增加心肌缺氧/复氧损伤的敏感性。方法常规培养H9C2细胞,分别给予PBS（对照组）、丙酮醛（200μmol/L）、丙酮醛（200μmol/L）＋氨基胍（100μmol/L）孵育6 d后接受缺氧/复氧处理,以MTT法测定心肌细胞存活率,微量酶活性测试法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放变化,比色法检测丙二醛（MDA）含量,并通过免疫组织化学检测心肌细胞终末糖化晚期产物（AGEs）表达。结果缺氧/复氧降低细胞存活率,增加心肌细胞MDA含量和LDH释放;而丙酮醛处理6 d的心肌细胞的AGEs含量明显增加,并对缺氧/复氧损伤的敏感性增加,与PBS孵育细胞经缺氧/复氧处理后相比, MDA含量和LDH释放显著上升,存活率明显下降（P＜0.01）;MGO引起的上述变化可以被糖化抑制剂氨基胍部分阻断（P＜0.05）。结论蛋白质非酶糖化是糖代谢中间产物丙酮醛增加心肌细胞对缺氧/复氧损伤敏感性的重要机制。     

高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制

目的:探讨高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制。方法:选取3—4周龄SD雄性大鼠,采用全骨髓贴壁法培养至P3代,随机分为正常组A(细胞置于常规培养箱内培养)、缺氧/复氧组B(置于95%N2、5%CO_2密闭培养箱中培养9h,复氧6h)、缺氧/复氧+高压氧组C(90%O_2,2.5ATA、90min)、缺氧/复氧+高压氧+YC-1组D,实验组其余时间处理和正常组相同。A、B、C、D组均于处理结束12h后行CCK-8比色法、流式细胞仪检测细胞存活率及凋亡率。Western blot检测HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平。结果:(1)与A组相比,缺氧/复氧后B、C、D组细胞存活率明显降低,差异具有显著性意义(P0.05),给予高压氧后C组存活率比B组升高,D组存活率较C组降低(P0.05)。(2)实验组B、C相比,C组中HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平升高(P0.05)。(3)实验组C、D组相比,给予YC-1阻断剂后HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达减少(P0.05)。结论:高压氧能够提高缺氧环境下骨髓间充质干细胞存活率,其机制可能与调控HIF-1α介导的Wnt通路有关。     

Exogenous NAD+ supplementation protects H9c2 cardiac myoblasts against hypoxia/reoxygenation injury via Sirt1‐p53 pathway

Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD⁺) not only transfers electrons in mitochondrial respiration, but also acts as an indispensable cosubstrate for Sirt1, the class III histone/nonhistone deacetylase. However, NAD⁺ is depleted in myocardial ischemia/reperfusion (IR) injury. The objective of this study was to investigate the role of exogenous NAD⁺ supplementation in hypoxia/reoxygenation (HR)‐stressed H9c2 cardiac myoblasts. Firstly, the effects of distinct treating time points and doses of NAD⁺ supplementation on the viability of HR‐stressed H9c2 cells were detected. Secondly, intracellular NAD⁺ levels in HR‐stressed H9c2 cells at various extracellular NAD⁺ concentrations were determined. Thirdly, the role of NAD⁺ supplementation in HR‐induced cell apoptosis and its relevance to Sirtuin 1‐p53 pathway were investigated. Exogenous NAD⁺ supplementation elevated intracellular NAD⁺ level and reduced HR‐induced cell death in both time‐ and concentration‐dependent manners. It appeared that NAD⁺ supplementation exerted the greatest protection when extracellular concentration ranged from 500 to 1000 μm and when NAD⁺ was added immediately after reoxygenation began. NAD⁺ replenishment restored Sirt1 activity, reduced the acetylation level of p53 (Lys373 & 382), and attenuated cell apoptosis in HR‐stressed H9c2 cells, whereas inhibition of Sirt1 activity alleviated the effects of NAD⁺ replenishment. These results indicated that exogenous NAD⁺ supplementation attenuated HR‐induced cell apoptosis, which was at least partly mediated by restoring Sirt1 activity and subsequently inhibiting p53 activity via deacetylating p53 at lysine 373 and 382.     

腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h最为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.