中国东北地区HCV RNA阳性血清RT—PCR产物的RFLP分型

为了解东北地区ＨＣＶ感染的基因型，对东北地区４５例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清的ＰＣＶ产物用ＲＦＬＰ分析进行基因分型，结果：ＨＣＶⅡ型占８２．２％，Ⅲ型占１５．６％，Ⅱ／Ⅲ混合型占２．２％型。与国内其它地区ＨＣＶ基因型构成比无显著性差异。证明东北地区ＨＣＶ感染也以Ⅱ型为主。     

人载脂蛋白E的PCR－RFLP基因分型

采用两对引物进行套式聚合酶链式反应（ＰＣＲ），扩增人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）基因第４号外显子的２３３ｂｐ特异性片段。用限制性核酸内切酶ｎｈａｌ酶解ＰＣＲ产物。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后进行ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型。此方法简便、灵敏，结果可靠。分析了１００名正常人ａｐｏＥ的基因型，其等位基因ｅ２，ｅ３，ｅ４频率分别为０．０５，０．８８和０．０７。     

巢氏PCR—RFLP和多重PCR检测HBV基因型、基因亚型方法的比较

目的:建立HBV基因型和亚型的分型方法,并分析相关的两种方法特异性和敏感性。方法:采用型特异性引物的巢氏PCR-RFLP和六种主要的HBV型特异性引物和亚型特异性引物的多重PCR方法,分别检测了100例患者标本。结果:两法不一致率为50%(27/54)。型特异性引物巢氏PCR-RFLP法检测出B基因型41例(41%),C基因型25例(25%),B C基因型34例(34%),B j亚型3例(7.3%),Ba亚型为38例(92.7%),Cs亚型为21例(84%),Ce亚型为3例(12%),1例C型未分出亚型(4%)。多重PCR法检出B型18例(33.3%),C型7例(13%),B C混和型5例(9.3%),B2亚型2例(11%),C1亚型2例(28.5%)。巢氏PCR-RFLP法型检出率100%亚型检出率98.5%,多重PCR法型检出率55.6%,亚型检出率仅为16%,前者高于后者(P<0.05)。结论:巢氏PCR-RFLP鉴定HBV基因型、基因亚型较多重PCR敏感性高,重复性好,但耗时长,费用高。     

江苏淮阴地区单采浆献血员员丙型肝炎病毒分型及发病情况

目的了解江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒(HCV)感染后发病情况和病毒基因分型.方法应用ELISA法及RT-nestedPCR法检测67例单采浆献血员感染HCV后抗-HCV和HCVRNA,并用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)进行病毒基因分型.结果67例单采浆献血员,在感染HCV后,急性丙型肝炎发病率为17.9%(12/67),最终发展成慢性丙型肝炎者49.3%(33/67),HCV慢性持续感染68.8%(46/67).HCV基因分型1b/Ⅱ型占95.5%(64/67),2a/Ⅲ型1.5%(1/67),1b/2a混合型3.0%(2/67).结论淮阴地区单采浆献血员HCV感染以1b/Ⅱ型为优势株,慢性化比例高.     

江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒分型及发病情况

目的：了解江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒（HCV）感染后发病情况和病毒基因分型,方法：应用ELISA法及RT－nested PCR法检测67例单采浆献血员感染HCV后抗－HCV和HCV RNA,并用限制性片段长度多态性分析法（RFLP）进行病毒基因分型,结果：67例单采浆献血员,在感染HCV后,急性丙型肝炎发病率为17．9％（12／67）,最终发展成慢性丙型肝炎者49．3％（33／67）,HCV慢性持续感染68．8％（46／67）,HCV基因分型：1b/ Ⅱ型占95．5％（64／67）,2a／Ⅲ型1．5％（1／67）,1b/2a混合型3．0％（2／67）。结论：淮阴地区单采浆献血员HCV感染以1b/Ⅱ型为优势株,慢性化比例高。     

HCV NS5 b 套式 PCR在酶切基因分型研究中的应用

目的 :探讨HCVNS5b区酶切分型技术在临床上的应用。方法 :选用了HpaⅡ、Cfr10Ⅰ、AluⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ、ApaⅠ、AvaⅡ、TaqⅠ、BstNⅠ、Sau 3AⅠ、StuⅠ、BalⅠ、SmaⅠ等 13种限制性内切酶 ,对已知2 3例 1b型和 17例 2a型样品进行酶切分析和验证。结果 :40例NS5b分型结果表明 2 3例 1b型中有AluⅠ特异切点 ,无 1a的BalⅠ切点和 2b的MboⅠ切点 ,17例 2a型中无A1uⅠ切点和 1a的BalⅠ及 2b的MboⅠ切点。StuⅠ可用于 1b型中基因变异诊断。结论 :HCVNS5b分型结果提示应用该分型技术 ,不仅达到了基因分型效果 ,而且还可检测基因变异 ,证实了我国存在着 1b和 1b混合感染状态     

PCR与RFLP相结合检测全血中真菌感染的研究

目的建立从临床可疑真菌感染的全血标本中检测常见真菌基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测方法。方法采用PCR-RFLP检测方法检测临床可疑真菌感染的全血标本。提取DNA,用真菌的通用引物ITS1-ITS4扩增真菌ITS1-5.8SrDNA-ITS2区域,并对扩增产物进行MspI酶切分析鉴定,检测是否有真菌感染,并将真菌定位到种。应用此方法鉴定了100例临床可疑真菌感染全血标本,并与传统血培养方法进行对比。结果 100例疑似标本的真菌培养阳性率为26%,而经PCR扩增阳性率为31%。结论 PCR-RFLP检测全血中真菌基因具有快速、敏感性、特异性,有助于临床真菌感染的快速诊断,有一定的临床应用前景。     

丙型肝炎病毒基因NS_5区酶切分型研究

目的 :了解丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型及其与临床的关系。方法 :用逆转录套式聚合酶链反应 (RT PCR)和限制性片断长度多态性 (RFLP)分析的方法 ,对 78例HCV感染患者进行HCVNS5区基因分型。结果 :HCV 1b型感染 71例 (91% ) ,HCV 2a型 7例 (9% ) ,未发现其它基因型 ;丙型肝炎患者有无输血史、是否重叠HBV感染 ,其基因分型构成比均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;1b型HCV血清ALT异常者 (6 3.4% )明显多于 2a型(14.3 % ) (P <0 .0 5 )。结论 :本组HCV感染的基因型多数为 1b型 ,少数为 2a型 ,1b型更易致肝细胞损伤 ,并可能与活动性肝病有关     

PCR与RFLP相结合检测全血中真菌感染的研究

目的 建立从临床可疑真菌感染的全血标本中检测常见真菌基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测方法.方法 采用PCR-RFLP检测方法检测临床可疑真菌感染的全血标本.提取DNA,用真菌的通用引物ITS1-ITS4扩增真菌ITS1-5.8SrDNA-ITS2区域,并对扩增产物进行MspI酶切分析鉴定,检测是否有真菌感染,并将真菌定位到种.应用此方法鉴定了100例临床可疑真菌感染全血标本,并与传统血培养方法进行对比.结果 100例疑似标本的真菌培养阳性率为26%,而经PCR扩增阳性率为31%.结论 PCR-RFLP检测全血中真菌基因具有快速、敏感性、特异性,有助于临床真菌感染的快速诊断,有一定的临床应用前景.     

PCR与RFLP相结合对临床标本真菌鉴定的研究

探讨快速、准确检测临床常用标本真菌分离、鉴定方法。方法PCR与RFLP相结合,应用9种临床重要真菌的通用引物,对常用临床标本(痰、BALF、胸水、尿、血)224份进行分离、鉴定,并对19例进行痰与非痰标本结果一致性、敏感性比较。 结果224份标本共检出真菌83株,阳性率37.03％,其中白色念珠菌35株(42.3％),假热带念珠菌30株(36.1％),热带念珠菌10株(12％),光滑念珠菌8株(9.6％)。19例痰与非痰标本47次检测,一致性、敏感性良好。结论PCR结合RFLP对真菌检测具有敏感、快速的特点,值得临床推广应用。     

宁夏回族乙肝病毒基因型分布研究

目的 研究宁夏回族乙肝病毒(HBV)基因型分布情况.方法 选择宁夏回族HBVDNA阳性慢性乙肝病人共120例,其中病毒携带者(ASC)17例,慢性肝炎(CH)34例,肝硬化(LC)58例,肝细胞癌(HCC)11例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测HBV基因型.结果 120例患者中B型12例(10%),C型101例(84.2%),D型5例(4.2%),C、D混合型2例(1.6%).结论 宁夏回族乙肝病毒基因型分布为C型、B型和D型,基因型C为优势基因型并与严重肝病发生有关.     

西安和郑州地区丙型肝炎患者的HCV基因分型

目的 了解西安和郑州地区丙型肝炎病毒（HCV）感染的基因型，比较了两地基因型分布的差异。方法 采用限制性长度多态性分析（RFLP）法对采自西安地区的46份和郑州地区的40份HCVRNA阳性标本进行HCV基因型分型研究。结果 西安地区46份标本中，25份（54．3％）为1b型病毒，17份（37．0％）为2a型病毒，4份（8．7％）为1b/2a混合型病毒；郑州地区40份标本中，19份（47．5％）为1b型，13份（32．5％）为2a型，3份（7．5％）为1a型，4份（10．0％）为1b/2a混合型病毒，1份（2．5％）为1a/1b混合型病毒。结论 两地的优势株均为HCV1b型，其次为2a型，郑州地区有1a型菌株的发现。     

陕西地区乙型肝炎患者血清中病毒的基因分型

目的 了解陕西地区乙肝病毒（HBV）基因分型情况。方法 用套式PCR方法从100份HBsAg阳性的乙型肝炎患者血清中扩增585bp的基因，用限制性内切酶BsrⅠ，StyⅠ,DpnⅠ和HpaⅡ平行酶切鉴别HBV A－F基因型。结果 所有标本用内引物P1和P2均扩增获得的585bp的靶基因，继之用上述限制性内切酶消化鉴定，证明100份血清标本中HBV可分为B型36份（36％），C型56份（56％），D型8份（8％）。结论 陕西地区HBV分型以B，C型为主，D型较少，未发现A，E，F型。结果同时表明PCR－RFLP方法灵敏性高，特异性强，且酶切图谱简明单一，易于识别，适用于HBV基因型的流行病学调查和临床实验研究。     

胃癌高系家族成员胃蛋白酶原C基因多态性及其诊断意义的探讨

采用限制性酶切片段长度多态性分析法，检测在胃癌高发区庄河检出的１９例胃癌高系家族成员胃蛋白酶原Ｃ基因多态性，发现三种常见片段及一种稀有片段。对其中４例携带稀有片段的受检者进行了胃镜追踪观察，２．５年后发现１例早期胃癌。本文对此作了初步探讨。     

湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体的基因型分布

目的：了解湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体分离株的基因型（血清型）分布情况。方法：应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析，对湘南部分地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体病人的62份阳性标本进行了基因分型。结果：沙眼衣原体基因型中，E型25份，D型14份，F型9份，G型7份，J型4份；有3份不典型基因型，未进一步分型。结论：湘南地区泌尿生殖道沙眼衣原体感染的基因型别以E型为主，其次为D型、F型、G型、J型。     

PCR-RFLP与多引物对PCR乙肝病毒基因分型方法的比较

目的　PCR RFLP与多引物对PCR的乙肝病毒基因分型方法学比较。方法　自行设计利用限制性内切酶MboⅠ、BsTNⅠ、BsmAⅠ、HpaⅡ酶切S基因片段鉴定HBV基因型 (A～F)的PCR RFLP方法。分别利用该方法和多引物对PCR对贵州地区 14 9份HBsAg、HBVDNA阳性血清进行病毒基因分型。结果　 14 9份乙肝患者血清中PCR -RFLP方法成功分型 12 8份 (85 .91% ) ,多引物对PCR方法成功分型 10 8份 (72 .4 8% )。两种方法均能成功分型的标本 10 7份 ,其中B型 5 2份 ,C型 5 5份 ;两种方法分型结果完全一致。结论　本PCR RFLP基因分型方法与多引物对PCR方法的分型结果一致 ,但PCR RFLP方法的成功率及敏感度较高 ,图谱简单易读 ,适用于大样本筛检及临床应用     

太原地区HBV宫内传播的基因型分布及传播特征

目的　了解太原地区乙型肝炎病毒 (HBV)感染孕妇及新生儿HBV基因型分布及宫内传播特征。方法　采集HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血 ,无菌分离血清采用巢式聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (nPCR RFLP)方法鉴定HBV基因型。结果　 16 2例HBsAg阳性孕妇中 ,HBVDNA阳性 6 3例 ,其中B基因型 5例 (7.9% ) ,C基因型 5 0例 (79.4 % ) ,未能分型 8例 (12 .7% ) ;16 4例 (2对双胎 )新生儿中HBVDNA阳性 2 4例 ,其中B基因型 1例 (4.2 % ) ,C基因型 2 1例 (87.5 % ) ,B、C混合型 1例 (4.2 % ) ,未能分型 1例 (4.2 % )。新生儿HBV基因型与母亲基本一致。结论　太原地区HBV感染的孕妇及新生儿中 ,C基因型占绝对优势 ,宫内传播过程中HBV基因型基本保持不变。     

HCV HVR1准种在不同基因型丙型肝炎患者中的分布

目的:通过研究丙型肝炎病毒高变区1(HCV HVR1)准种复杂性与基因型之间的关系,探讨不同基因型HCV致病性差异的机制.方法:采用C区型特异性引物PCR法进行HCV基因分型,采用单链构象多态性聚合酶链反应法(SSCP法)检测HCV HVR1准种.结果:68例丙型肝炎患者中,Ⅱ型49例(72%),Ⅲ型13例(19%),Ⅱ、Ⅲ混合型6例(9%).Ⅱ型和Ⅱ、Ⅲ混合型HCV感染患者的HCV HVR1准种复杂性(SSCP条带数)明显高于Ⅲ型感染的患者,且与疾病严重程度关系密切.结论:HCV HVR1准种复杂性的差异可能是导致不同基因型HCV致病性差异的因素之一.     

乙型肝炎病毒感染者C基因突变株的检测及意义

目的 :了解乙型肝炎病毒 (HBV)感染者前C/C区基因变异热点的突变情况及其意义。方法 :采用巢式PCR方法和限制性片段长度多态性 (RFLP)技术检测 117例HBV感染者血清HBV前C区终 2 8和C区L97突变株。结果 :急性乙型肝炎、慢性HBV携带者、慢性乙型肝炎、活动性肝硬化、原发性肝癌、重型乙型肝炎患者终 2 8检出率分别为 15 .3% (2 / 13)、9 1% (1/ 11)、2 5 0 % (9/ 36 )、75 0 % (12 / 16 )、5 0 0 % (5 / 10 )、4 8.3% (15 / 31) ;L97突变株检出率分别为 2 3 1% (3/ 13)、2 7.3% (3/ 11)、5 0 0 % (18/ 36 )、6 8.8% (11/ 16 )、70 0 % (7/ 10 )、71 0 % (2 2 / 31)。HBV感染者终2 8和L97突变株并存 32例。L97点突变和终 2 8点突变之间存在关联性 (χ2 =9.2 5 ,P <0 .0 1)。结论 :急性乙型肝炎和无症状HBV携带者突变株检出率明显低于活动性肝硬化、原发性肝癌、重型肝炎。C基因的热点变异与病情的严重性相关。C区易变区的突变病毒前C区终止密码形成的机会明显增加