细胞凋亡与心肌缺血——再灌注损伤的关系

自1972年澳大利亚昆士兰大学的Kerr和Curry等首次提出细胞凋亡以来，凋亡一直是近年来医学研究热点。目前，细胞凋亡用以表示人体正常细胞死亡及维持形态上动态平衡过程的概念已为人们所接受，并且因其与感染、肿瘤和免疫心血管疾病等有密切关系而备受瞩目。随着分子心血管病学的研     

栀子苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用

目的 探讨栀子苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 采用结扎左冠状动脉方法制备心肌缺血再灌注损伤动物模型,实验设假手术组、缺血再灌注组、栀子苷(25、50、100 mg/kg)组和阳性对照组;采用试剂盒法检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Ca²⁺-ATPase水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测心肌细胞p53、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 与缺血再灌注组比较,栀子苷50、100 mg/kg组大鼠血清LDH[分别为(4598.6±638.7)、(4386.9±549.8)U/L]及心肌组织MDA含量[分别为(2.12±0.47)、(1.63±0.29)nmol/mgpro]明显降低,心肌组织SOD活性[分别为(41.48±3.86)、(43.47±3.88)NU/mgpro]和Ca²⁺-ATPase水平[分别为(0.71±0.11)、(0.72±0.130)mol/mg.h]明显增加(P<0.05);TUNEL结果显示,栀子苷50、100 mg/kg组大鼠缺血区心肌细胞凋亡率[分别为(12.3±1.8)%、(11.2±1.6)%]明显降低(P<0.05);Western blot结果显示,栀子苷50、100 mg/kg组大鼠心肌组织p53蛋白表达[分别为(1.71±0.35)、(1.62±0.5)]、Bax蛋白表达[分别为(0.95±0.24)、(0.89±0.19)]明显降低,心肌组织Bcl-2蛋白表达[分别为(0.71±0.11)、(0.78±0.170)]明显增加(P<0.05)。结论 栀子苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定程度保护作用,其机制可能与栀子苷降低氧化应激反应,抑制P⁵³蛋白水平,上调Bcl-2/Bax比率,减少细胞凋亡有关。     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的研究白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步阐明其机制。方法建立心肌缺血再灌注损伤模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图变化,测定乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,确定心肌损伤程度。心肌细胞凋亡的检测采用逆转录聚合酶链反应检测bcl-2和bax mRNA的表达;Western blot检测bcl-2和bax蛋白表达。结果白藜芦醇能降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低LDH和MDA水平,升高SOD水平,抑制bax而增强bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关。     

维生素E对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(MIR)时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和自由基代谢的变化及维生素E对其的影响。方法通过腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,造模成功后4w进行MIR处理。糖尿病大鼠30只分为假手术对照(sham)组,MIR组和维生素E(VE)治疗组。免疫组织化学法检测心肌ICAM-1蛋白表达。检测血清、心肌组织SOD、GSH-Px活性、MDA含量和活性及心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶、Ca++-ATP酶活性。结果与sham组相比,MIR组心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶、Ca++-ATP酶活性明显下降;血清、心肌MDA明显升高,血清、心肌SOD和GSH-Px活性明显降低用,心肌ICAM-1蛋白表达明显升高;用VE4w后与MIR组比,心肌线粒体Na+,K+-ATP酶、Mg++-ATP酶活性明显升高;血清、心肌MDA降低,血清、心肌SOD和GSH-Px活性升高,心肌ICAM-1蛋白表达降低。结论维生素E可通过减轻脂质过氧化和自由基损伤,下调ICAM-1蛋白表达,拮抗糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤。     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 研究白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步阐明其机制.方法 建立心肌缺血再灌注损伤模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图变化,测定乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,确定心肌损伤程度.心肌细胞凋亡的检测采用逆转录聚合酶链反应检测bcl-2和bax mRNA的表达;Western blot检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 白藜芦醇能降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低LDH和 MDA水平,升高SOD水平,抑制bax而增强bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡.结论 白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关.     

丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤与抑制细胞凋亡的关系

目的 观察丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤与抑制细胞凋亡的关系.方法 建立大鼠在体缺血再灌注模型,健康成年雄性大鼠24只,随机分为三组:假手术组(只穿线,不结扎;Sham)、缺血再灌注组(缺血30分钟,再灌注120分钟;I/R)组,以及丙泊酚预处理组(B组).于再灌120分钟末提取心肌组织蛋白,采用Caspase-3活性分光光度法检测试剂盒检测其活性,采用氯化三苯基四氮唑染色法计算心肌梗死面积.结果 Caspase-3:与Sham组相比,I/R组Caspase-3活性增加了40%(P<0.05);和I/R组相比,B组减低了30%(P<0.05).TTC染色:Sham组缺血与梗死面积均为0;与I/R组(48±2.40)相比B组(27±1.84)的缺血面积显著降低(P<0.05),同时与I/R组(47±2.84)相比,B组(32±2.46)的梗死面积明显减少(P<0.05).结论 丙泊酚预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与抑制细胞调亡有关.     

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注血管紧张素变化

目的探讨菊苣多糖对链脲菌素糖尿病大鼠心肌缺血再灌注血管紧张素影响。方法应用链脲菌素复制大鼠糖尿病模型,12周后,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉下气管插管安装呼吸机,开胸结扎冠状动脉左室降支60 min后松开结扎线再灌注60 min;标Ⅱ导联全程记录心电图,并于再灌注60 min取血、心脏;检测肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)。结果糖尿病模型对照组血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ值分别为5.98 U/mL、10.03 U/mL、790.4 ng/L、1 773.7 ng/L,而菊苣多糖干预组血清CK、LDH、AngⅠ、AngⅡ值分别为1.39 U/mL、7.35 U/mL、443.9 ng/L、 1 552.2 ng/L,均低于糖尿病模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论菊苣多糖通过抑制AngⅠ、AngⅡ的产生对链脲菌素糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA的表达变化

目的探讨亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA的表达变化及其与损伤神经细胞凋亡的关系。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，大脑中动脉阻塞2h，再灌注损伤12h，用流式细胞仪(FCM)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测假手术组、对照组和亚低温组的DNA断裂百分率和Caspase-3mRNA表达水平。结果亚低温组和假手术组DNA断裂百分率和Caspase-3mRNA表达水平均明显低于对照组。结论亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3mRNA表达水平明显降低可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关。     

原花青素对氧化应激致大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的观察原花青素(proanthocyanidin,PC)对氧化应激(oxidative stress)致大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支(LAD)30min,复灌3h的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,对照组、剂量组分别给予生理盐水、PC,阳性对照组给予银杏叶片(48mg/kg),观察PC对大鼠心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及心肌酶学的影响。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的心肌梗死面积明显增大、心肌细胞凋亡指数与心肌酶学各指标均发生显著变化,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,阳性对照组、PC剂量组降低了心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的心梗面积、心肌细胞凋亡、减少心肌细胞磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)释放、心肌组织黄嘌呤氧化酶(XO)活性及血清丙二醛(MDA)含量,提高了血清一氧化氮(NO)水平、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及谷胱甘肽(GSH)含量,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并存在剂量反应关系。结论 PC对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠具有抗氧化应激作用,能够减少心肌细胞凋亡,从而减少心肌梗死面积,并存在剂量反应关系。     

镁对防止心肌缺血再灌注损伤的作用

镁是接近微量的常量元素，同样是许多酶的激动剂，并与生命活动的三大代谢、氧化磷酸代离于转运、神经冲动的产生和传递及肌肉收缩有关，在体外循环时，我们在机内预充液及停跳液里常规补充镁离子，这对心脏内外环境的稳定、心肌结构的完整及心脏的正常功能起着重要的生理作用。     

布托啡诺预给药对下肢缺血再灌注诱发心肌损伤的保护作用

目的观察布托啡诺预给药对下肢缺血再灌注诱发心肌损伤的保护作用。方法选择下肢远端骨折患者40例,ASA分级I或Ⅱ级,按随机数字表法分为布托啡诺组和对照组,每组20例。所有患者均选择硬膜外麻醉,布托啡诺组在上止血带前15rain静脉注射布托啡诺注射液0．04mg／kg,对照组以0．9％氯化钠代替。两组分别于上止血带前（rrn）,第2次松止血带后5min（T1）、2h（T2）、6h（T3）、12h（T4）及24h（T5）颈内静脉采血5ml,检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和丙二醛（MDA）水平。结果与L比较,对照组CK—MB水平T2-T5明显升高,cTnI、MDA、TNF．d水平T1～T5明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）,布托啡诺组CK-MB水平T3,T4明显升高,TNF-α水平T1～T3明显升高,cTnI水平T1～T5明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与对照组比较,布托啡诺组CK—MB水平T1～T5降低[（20．2±5．0）U／L比（35．3±6．8）U／L、（32．3±3．7）U／L比（48．6±8．5）U／L、（29．5±5．4）U／L比（51．5±8．0）U／L、（22．2±4．8）U／L比（33．7±6．7）U／L],eTnI、TNF-α水平T1～T5明显降低[（0．158±0．016）μg／L比（0．278±0．021）μg/L、（0．169±0．036）μg／L比（0．332±0．062）μg／L、（0．3574-0．049）μg/L比（0．623±0．083）μg／L、（0．178±0．045）μg/L比（0．383±0．059）μg,L、（0．138±0．016）μg／L比（0．263±0．023）μg/L;（1．63±0．13）μg,L比（2．12±0．08）μg/L、（1．69±0．08）μg／L比（2．28±0．09）μg／L、（1．63±0．09）μg／L比（2．25±0．07）μg／L、（1．23±0．14）μg／L比（1．93±0．12）μg／L、（1．13±0．15）μg／L比（1．79±0．07）μg／L],MDA水平Tl～T4明显降低[（4．82±0．53）nmol]L比（6．68±0．67）nmol／L、（4．99±0．61）nmo]／     

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3表达和神经元凋亡的影响

目的探讨原花青素（PC）对脑缺血再灌注损伤大鼠Caspase-3表达和神经元凋亡的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。各组于缺血90min再灌注24h用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质Caspase-3蛋白表达,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,并进行TTC染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化。结果缺血再灌注组与假手术组比较,Caspase-3表达增加,凋亡细胞明显增加;PC治疗组与缺血再灌注组比较均显著减少Caspase-3表达,减少凋亡细胞,高、低剂量组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。PC治疗组脑组织缺血损伤病理学改变均明显轻于缺血再灌注组,PC高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。PC治疗组脑梗死体积均较缺血再灌注组减小,且高、低剂量组之间差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与通过减少Caspase-3表达,抗凋亡有关。     

多ADP-核糖聚合酶在大鼠心脏缺血／再灌注损伤中的作用

目的探讨多ADP-核糖聚合酶[Poly（ADP-ribose）polymerase,PARP]在大鼠心脏缺血／再灌注（ischemiaandreperfusion,I／R）损伤中的作用。方法将48只大鼠按随机数字法分为I／R组、I／R＋DPQ（PARP抑制剂）组、I／R＋DMSO（二甲基亚枫）组和对照组,建立大鼠心脏I／R模型,检测各组大鼠心肌中PARP的表达、心功能和心肌细胞凋亡的变化。结果在大鼠心脏I／R损伤中PARP表达增加,应用DPQ后,PARP表达显著减少（5．04±1．25VS2．334-0．65,t=1．35,P〈0．05）;抑制PARP的活性能使大鼠心脏左心室内压（LVDP）、室内压最大上升速率（＋dp／dt）和室内压最大下降速率（-dp／dt）显著增加,改善心脏功能。抑制PARP的活性能使大鼠心肌细胞凋亡率从（34±6．2）％显著降低至（23±3．8）％（t=2．25,P〈0．05）。结论在大鼠心脏I／R过程中,PARP的表达明显增加,并加重心脏损伤。应用药物抑制PARP的表达可以减少心脏损伤,具有心脏保护作用。     

亚临床甲状腺功能减退与2型糖尿病患者无症状心肌缺血的关系研究

目的 探讨亚临床甲状腺功能减退与2型糖尿病患者无症状心肌缺血之间的关系.方法 回顾性分析399例成功行冠状动脉CT血管成像检查无心肌缺血症状的、无已知甲状腺疾病的2型糖尿病患者的临床资料,根据是否合并亚临床甲状腺功能减退分为亚临床甲状腺功能减退组(17例)与甲状腺功能正常组(382例),分析两组患者的临床资料、实验室检查结果及冠状动脉CT血管成像检查结果.结果 2型糖尿病患者中亚临床甲状腺功能减退的发生率为4.3％(17/399),亚临床甲状腺功能减退组中男性比例及吸烟比例均低于甲状腺功能正常组,差异有统计学意义(3/17比194/382,P=0.007;2/17比136/382,P=0.043).亚临床甲状腺功能减退组无症状心肌缺血发生5例,甲状腺功能正常组为130例,两组比较差异无统计学意义(P=0.694).两组年龄、糖尿病病程、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇比较差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 亚临床甲状腺功能减退不是2型糖尿病患者无症状心肌缺血的危险因素.     

脑缺血再灌注损伤后TNF-α表达的变化及葛根素的干预作用

目的 研究大鼠缺血性脑损伤后缺血区脑组织TNF-α表达的变化规律,探讨葛根素对缺血性脑损伤的神经保护机制.方法 90只雄性SD大鼠,用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为手术+葛根素组,手术组,假手术组.每组在6、12、24、48和72 h观察,手术+葛根素组大鼠手术+葛根素组大鼠应用葛根素干预治疗,假手术组和手术组大鼠给予同等容量生理盐水.用免疫组化法观察各时间点TNF-α因子的表达.结果 与假手术组相比,手术组和手术+葛根素组脑缺血再灌注后缺血区脑组织TNF-α蛋白的表达均显著增加(P＜0.01);手术+葛根素组脑缺血再灌注后不同时间点TNF-α的表达均较手术组显著下降.(P＜0.01,P＜0.05).结论 葛根素对脑缺血再灌注后TNF-α的表达有下调作用.     

葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的观察葡萄糖酸镁对离体大鼠心肌缺血／再灌注（I／R）细胞凋亡的保护作用及可能机制。方法选用48只雄性SD大鼠随机等分为3组：对照组,I／R组,葡萄糖酸镁组。实验1：每组取8只大鼠,对照组用改良的K—H液持续灌注110min;I／R组用改良的K—H液灌流20min后,停灌30min,再灌注60min;葡萄糖酸镁组改良的K—H液中加入葡萄糖酸镁2．4mmol／L,余同I／R组。检测心肌灌流液中肌酸激酶（CK）,乳酸脱氢酶（LDH）含量,心肌组织中Ca^2＋和一氧化氮（NO）含量。实验2：每组其余8只大鼠,实验过程类似实验1,不同点再灌时间120min。实验结束检测心肌细胞凋亡指数。观察实验l、2再灌注20min内心律失常发生情况。结果与I／R组比较,葡萄糖酸镁组心律失常发生率显著下降（P〈0．01）;再灌流出液中CK、LDH含量明显降低（P〈0．01）;心肌组织Ca^2＋和NO含量及细胞凋亡指数明显降低（P〈0．01）。结论葡萄糖酸镁可通过增加NO含量减轻钙超载从而减少凋亡。     

氟伐他汀预防兔心肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究不同剂量氟伐他汀的短期预处理对兔心缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法大耳白兔35只随机分为5组(n=7):⑴假手术对照组(Sham组),⑵缺血再灌注组(IR组),⑶氟伐他汀干预组(F组)分为氟伐他汀小剂量F1(2mg/kg)、中剂量F2(5 mg/kg)、大剂量F3(20 mg/kg)3组。实验中持续监测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内收缩压最大上升速率和下降速率(±dp/dtm ax)的变化,再灌注结束后用伊文氏蓝和TTC染色法确定缺血和梗死心肌范围,进行心肌组织一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的测定。结果F组中的F2组和F3组中心功能各项指标较IR组明显改善;心肌组织NO水平较IR组显著增高;心肌梗死面积较IR组明显减小,F1组无明显变化。结论适当剂量的氟伐他汀短期预处理对兔心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用,其机制之一可能与NO有关。     

香草乙酮对大鼠心肌再灌注损伤的保护作用

目的为明确烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶在心肌再灌注损伤中的作用,并探索治疗再灌注损伤的新途径,使用香草乙酮(apocynin)这一特异的NADPH氧化酶抑制剂对心肌再灌注损伤进行干预,并对其效果和机制进行了观察分析。方法使用在体大鼠心脏缺血再灌注模型,给予30 min左前降支结扎造成缺血,随后松扎进行3 h再灌注。Apocynin干预组于再灌注前10 min给予不同剂量的apocynin,观察其剂量与心脏保护效应关系,并测定心功能、梗死面积、心肌细胞凋亡、NADPH氧化酶活性和自由基生成等指标。结果再灌注后心肌NADPH氧化酶活性明显升高,自由基生成也显著增加。给予apocynin可剂量依赖性地减轻心肌再灌注引起的细胞凋亡和自由基生成,apocynin 10 mg/kg剂量可以改善再灌注后的心脏功能,缩小梗死面积,减少心肌凋亡的发生,抑制NADPH氧化酶的活化,从而减少超氧阴离子和过氧化亚硝酸盐自由基的生成及其损伤,但对一氧化氮的生成无明显影响。结论NADPH氧化酶在心肌再灌注损伤中发挥重要作用,apocynin可以对再灌注大鼠心肌发挥保护作用,这种保护与其抑制NADPH氧化酶的活性,减少其介导的超氧阴离子和过氧化亚硝酸盐自由基生成有关。     

硒对家兔心肌缺血再灌注损伤膜磷脂保护作用

目的观察硒对家兔心肌缺血再灌注损伤(IRI)膜磷脂的保护作用。方法 24只家兔,雌雄各半,随机分成假手术组、缺血再灌注组、硒组,分别检测心肌组织中总磷脂(PL)、总胆固醇(Ch)、磷脂酰乙醇胺(PE)、心磷脂(CL)含量。结果缺血再灌注组与假手术组比较,缺血再灌注组PL、PE、CL含量(41.21±9.71、415.30±31.25、200.56±29.41)明显降低(P<0.05),Ch含量(88.75±14.03)明显升高(P<0.05)。硒组与缺血再灌注组比较,硒组PL、PE、CL含量(58.73±11.12、764.34±51.87、325.79±31.14)明显升高(P<0.05),硒组Ch含量(62.41±12.11)明显降低(P<0.05)。结论硒对家兔心肌缺血再灌注损伤膜磷脂有保护作用。