湛江南药场檀香种植基地灌溉水和土壤环境质量研究

【目的】对檀香种植基地灌溉水和土壤环境质量进行初步评价,为檀香规范种植基地建设提供科学依据。【方法】灌溉水质量采用农田灌溉水质量标准(GB5084-2005)进行检测分析,土壤环境质量按国家土壤环境质量标准(GB15618-1995)进行检测分析,并分别采用单项污染指数法和综合污染指数法对两者进行评价。【结果】檀香基地灌溉水质量达GB5084-2005要求;土壤环境质量达GB15618-1995二级标准。【结论】湛江南药场檀香基地灌溉水和土壤质量完全符合《中药材生产质量管理规范》(GAP)的相关要求,适合作为檀香生产基地。     

檀香萜烯合成酶基因的克隆与序列分析

目的通过克隆技术获得参与檀香挥发油形成的萜烯合成酶基因。方法利用CTAB-LiCl法提取檀香已结香心材总RNA,采用RT-PCR技术克隆萜烯合成酶基因。结果克隆获得了一个檀香萜烯合成酶基因,该基因编码区全长1 731 bp,编码576个氨基酸残基。结论 CTAB-LiCl法能提取较高质量的檀香心材总RNA,克隆获得的萜烯合成酶具有编码区。     

基于ITS分子标记的鄂尔多斯地区节旋藻系统发育分析

目的 鉴定分别采于鄂尔多斯市巴彦淖尔碱湖的3种藻株,命名为sp.DD、sp.ER、sp.FB;采自哈素海的藻株,命名为sp.HS;获赠于中国海洋大学的藻株命名为sp.QD的5种藻株,并做系统发育分析。方法 将采集的藻液进行分离纯化,获得目的藻株,提取基因组DNA,PCR扩增ITS序列片段,进行序列测定和聚类分析。结果 系统发育分析表明,sp.HS 与 Arthrospira platensis strain Sp-2 在同一支上,同源性为 99.59%;sp.DD 单独一支,与 Arthrospira platensis“Inner Mongolia”的同源性为 88.01%;sp.QD 与 Arthrospira platensis F3S 在同一支上,同源性为 99.60%;sp.ER与 sp.FB 聚为一支,与 Arthrospira erdosensis“Inner Mongolia”同源性为 99.18%。结论 经鉴定 sp.HS、sp.DD、sp.QD 为 Arthrospira platensis,sp.ER与sp.FB为Arthrospira erdosensis,并揭示内蒙古鄂尔多斯地区节旋藻藻种间的系统发育关系。     

引种檀香不同部位的质量研究

以进口檀香为对照，对广东湛江引种檀香同一植株的不同生长部位的药材性状、粉末特征及主要化学成份等方面进行研究。结果表明，不同生长部位的檀香质量差异较大。药用应选取下部心材为佳。     

山东玫瑰花核糖体rDNA ITS序列分析初步探究

[目的]分析不同种质玫瑰花(Rosae Rugosae Flos)核糖体DNA的ITS序列,为其种质资源分子鉴别提供依据。[方法]采用聚合酶链反应(PCR)技术获得ITS基因,进行测序,经CLUSTALX(2.0)软件进行统计分析,计算各样本间的遗传距离。[结果]各样品间遗传距离范围为0.000~0.011,各样本不仅在非编码区的转录间隔区ITS1和ITS2存在多个变异位点,而且在保守的5.8S编码区也存在变异位点。[结论]ITS序列的测定为玫瑰花品种鉴别和种质资源优化提供分子生物学依据。     

菟丝子rDNA ITS序列的测定及分析

目的研究菟丝子rDNA-ITS序列特征。方法分别采用PCR产物直接测序法和克隆测序法,对菟丝子属7个种rDNA的ITS区(包括ITS-1,5.8S rDNA和ITS-2)进行序列测定。结果菟丝子属植物ITS序列总长度约为612 bp,GC含量分别为:ITS-1区53%~63%,5.8S rDNA 48%~55%,ITS-2区46%~56%;苜蓿菟丝子种内的3个地理种发现了3个变异位点。用NJ法构建系统发育树显示:含日本菟丝子Cuscuta.japonica的分支处于系统树靠近基部位置,与之亲缘关系较近的依次为中国菟丝子C.chinensis和杯花菟丝子C.cupulata;余下5个种的分支中田野菟丝子C.campestris和五角菟丝子C.pentagona合为一支,南方菟丝子C.australis和苜蓿菟丝子C.approximata合为一支。结论NJ法建立的发育树与形态学分类基本相符,为菟丝子属植物分类鉴定提供了重要的分子依据。     

阳春砂的ITS序列分析

目的：用ITS全序列鉴别各地产阳春砂及常见伪品。方法：从各地产阳春砂及常见伪品绿壳砂和海南砂中提取总DNA，以核基因组通用引物ITS为引物进行扩增，扩增产物经纯化后，用PCR产物直接法进行测序。结果：各样品的ITS序列总长度均为626bp，其中ITS－1序列长度为248bp,5.8S序列长度为155bp，ITS－2序列长度为223bp；6个阳春砂和绿壳砂的ITS－2序列完全一致，各样品的5．8S序列完全一致，在ITS-1可各样品却有不同的碱基位点。结论：ITS－1序列可对阳春砂的道地性作出鉴别，明显区分其伪品。     

不同产地大麻的ITS全序列分析

目的:对分别采自云南、新疆两个地区的大麻植物,通过ITS序列的分析,从分子水平进行鉴定。方法:采用DNA提取试剂盒提取大麻的ITS全序列DNA,经过PCR扩增,胶回收后测序,所得序列与从Genbank中获取3个大麻科植物的ITS全序列比对,以葎草的ITS全序列为外源基因构建了大麻属的系统发育树。结果:对获得的基因序列进行同源性分析,NCBI数据库中登陆的大麻相应序列与新疆大麻(毒品大麻)的ITS全序列亲缘关系性最近,为99%;云南大麻(工业大麻)与新疆大麻(毒品大麻)亲缘关系较远。结论:ITS序列能够较准确的将毒品大麻和工业大麻区分开。     

树龄对广东引种印尼檀香挥发油化学成分影响

目的：研究树龄对广东引种印尼檀香挥发油化学成分的影响。方法：采用GC-MS联用仪，测定不同树龄的引种印尼檀香石油醚提取物的化学成分含量。结果：随着树龄增加总檀香醇的含量逐渐增加，E-荷叶醇的含量呈减少趋势。结论：广东湛江南药场引种的檀香挥发油的得率及质量与进口檀香十分接近，符合商品和药用要求。     

苏皖产大戟属药用植物rDNA的ITS序列分析

目的研究苏皖产大戟属内6种药用植物的ITS长度的变异,为探讨大戟属植物的系统演化关系和大戟属植物鉴定提供DNA分子证据。方法利用PCR技术对大戟属植物的rDNAITS区碱基序列进行测定。结果这6种大戟属植物的ITS1的长度范围为255~262bp,ITS2的长度范围为214~236bp。运用Mega2软件进行的系统分析得到大戟属内6种植物的系统进化树。这一分析结果与来自形态学的研究结果相吻合。结论此法可用于大戟属植物种间及真伪品鉴别。     

檀香不同部位总黄酮含量比较

目的比较不同部位檀香总黄酮的含量,为其综合利用提供依据。方法定期采集檀香不同部位样品,以芦丁为对照品,紫外-可见光光度法在500nm处测定其总黄酮含量。结果檀香叶、嫩枝、树干的总黄酮含量分别为5.42%、2.38%、0.72%。结论檀香叶和嫩枝总黄酮含量均较高,可考虑综合利用。     

檀香叶的HPLC指纹图谱研究

目的建立檀香叶HPLC指纹图谱。方法檀香叶以70%(体积分数)乙醇超声提取;采用HPLC法,色谱柱:Agilent TC-C18(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-0.5%(体积分数)冰醋酸,梯度洗脱;流速:1 mL/min;检测波长:338 nm;柱温:30℃。结果对所采集的10批檀香叶药材进行了测定,建立了檀香叶指纹图谱,共找出了13个共有峰,各样品与自动生成对照图谱的相似度均在0.94以上。结论所用方法简便、专属性强,有助于科学评价和控制檀香叶药材的质量。     

檀香对丹参药代动力学的影响研究

目的:研究“丹参饮”中使药(檀香)对君药(丹参)药代动力学参数的影响。方法:建立家兔含药血浆中丹参素含量的高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱(HPLC-ESI-MS/MS)分析方法。血浆用10%高氯酸沉淀蛋白,上清液用乙酸乙酯萃取获得样品。以对羟基苯甲酸为内标,采用离子阱质谱的多级反应模式(MRM)测定丹参素的血药浓度,DAS数据处理软件对数据进行统计学处理。结果:丹参素在0.2-40.0μg/mL范围内线性关系良好,方法检测限为1.0 ng,重复性实验RSD(%)为1.34(n=6),高、中、低3个浓度的平均回收率(%)分别为(80.69±3.93),(95.5±2.81),(74.21±3.58)。配伍给药前后,丹参中丹参素体内代谢动力学模型均为二室开放模型,但配伍给药后AUC0-∞较丹参单独给药明显增大。结论:“丹参饮”中使药(檀香)可促进君药(丹参)吸收入血,该研究可为“君-使”对药体内作用机制的研究提供新思路。     

蛲虫核糖体DNA ITS1的PCR扩增及序列分析

目的 扩增人蛲虫（Enterobius vermicularis）核糖体DNA的第一内转录间隔区（ITS1）。方法提取人蛲虫的基因组DNA，PCR扩增rDNA的ITS1及部分5．8S片段，对该片段进行PCR—SSCP分析并测序。结果扩增的片段大小为334bp，包含Enterobius vermicularis全部的ITS-1（303bp）及部分5．8S（31bp）序列，ITS1种内序列一致。结论首次报道人蛲虫的ITS1序列，将为以ITS1作为遗传标记用于蛲虫鉴别诊断、系统发育等研究奠定基础。     

深圳市白纹伊蚊rDNA ITS2区克隆及SNP分析

目的 克隆和序列分析深圳市白纹伊蚊核糖体DNA（rDNA）第2内转录间隔区（ITS2），并探明其rDNA ITS2核酸的特异性及不同个体在rDNA ITS2区的单核甘酸的多态性（sinde Nuclear Polymorphism。SNP），以便利用ITS2基因的高度保守I匿及其蚊媒不种群在ITS2片段的多态性束分子鉴别白纹伊蚊。方法 PCR特异扩增白纹伊蚊rDNA ITS2，利用QIAquick技术从琼脂糖胶上回收纯化扩增的目的ITS2DNA片段，纯化后的目的ITS2DNA片段被连接到TA载体上，在含有青霉素的琼脂糖胶平面上筛选舍目的ITS2DNA片段的阳性克隆，阳性克隆经含有青霉素的LB液体培养基培养，用Ultrapure^TM质粒提取试剂盘提取克隆质粒，用双酶切鉴定插入的片段大小，DNA序列分析仪分析每个蚊rDNArrs2的序列，用生物信息系统进行白纹伊蚊rDNAITS2SNP的差异分析。结果 518bp全长的深圳市白纹伊蚊rDNAITS2被克隆和序列分析．深圳市四个不同地理的白蚊伊蚊rDNAITS2的同一性为97％，而两个地方之间的比较有99％的同一性，其rDNAITS2基因单核苷酸存在转换、颠换和缺失，在518bp的范围内有6个C→T，2个A→G的转换，3A→Ts一个A→C的颠换。3个CG和一个AC缺失。结论 白蚊伊蚊rDN AITS2有高度的保守性，不同个体也表现了单核苷酸的多态性。     

丹参及鼠尾草属植物的rDNA ITS序列分析

目的研究丹参ITS片段遗传多样性,分析该片段在丹参药材DNA分子鉴别和鼠尾草属植物系统学研究中的意义。方法用一对引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法测序。结果获得核糖体DNA中ITS和5.8SrDNA完整序列,13个鼠尾草属植物ITS1与ITS2序列的长度分别为222～224bp、220～223bp。鼠尾草属植物种间ITS1序列差异百分率为0～12.16%,ITS2序列的差异百分率为0.5%～13.51%;丹参种内ITS1序列的差异百分率为0～0.9%,ITS2序列的差异百分率为0～0.5%;鼠尾草属各类群与外类群的差异百分率ITS1序列为16.07%～20.27%,ITS2序列为15.91%～20.27%。用邻接法(NJ)根据ITS1与ITS2序列数据建立系统发生树。结论两段序列在丹参种内保守,在属间有较大的差异,与外类群的差异最大,可作为中药丹参分子鉴定的标记,而鼠尾草属植物的系统发生关系尚须进一步研究。     

牛膝的rDNA ITS序列分析

目的 探讨不同产地牛膝的ITS的序列变异，为鉴别牛膝提供DNA分子标记。方法 利用特异性PCR技术对牛膝的rDNA ITS区碱基序列进行测定，报道了牛膝的rDNA ITS区的碱基序列。结果 得到核糖体DNA中的ITS及5．8S rDNA完全序列，18S和26S rDNA部分序列，共约650bp。牛膝与川牛膝及土牛膝碱基序列有明显差异，不同产地、不同栽培品种牛膝碱基序列无差异。结论 此法可用于牛膝种间及真伪品鉴别。