个体价值认同的社会主义核心价值观培育探析

目的 建立人结直肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株,检测其多药耐药性并初步探讨可能的耐药机制。 方法 采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP细胞株HCT-8/L-OHP。MTT法鉴定药敏性,并检测耐药细胞株的多药耐药性、生长曲线和细胞群体倍增时间。用光镜、电镜、流式细胞术等方法观察亲本细胞和耐药细胞的形态、周期及细胞凋亡。通过实时荧光定量PCR和Western-blot检测HOXB8基因和ABCC1(MRP or MRP1),ERCC1,P-gp,GST-π的mRNA及蛋白表达水平。 结果 建成了肠癌耐药细胞模型HCT-8/L-OHP,半抑制浓度(IC50)为62.33 μmol/L,耐药指数(RI)为10.78。耐药株细胞形态发生变化,代谢率降低,生物活力减弱。HCT-8/L-OHP细胞株具有耐药性,细胞增殖减慢。HCT-8/L-OHP细胞在G₂/M期的比例增多,在S期及G₀/G₁期的比例减少,相较于亲本细胞株,差别具有统计学意义(P<0.01); HCT-8/L-OHP细胞凋亡率低于HCT-8细胞。ABCC1(MRP or MRP1),ABCB1(P-gp)等耐药相关基因在耐药细胞株中高表达; HOXB8基因在HCT-8/L-OHP细胞中表达,较亲本细胞株表达明显升高,差别具有统计学意义(P<0.01)。 结论 成功构建了肠癌耐药细胞株HCT-8/L-OHP,耐药的分子机制可能是ABCC1(MRP or MRP1)及ABCB1(P-gp)等基因的表达升高。HOXB8基因过表达可能与人结直肠癌对L-OHP耐药的机制相关。     

人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨

目的:建立耐伊立替康(CPT-11)的人结直肠癌细胞株(HT-29/CPT-11),并研究其生物学特性.方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/CPT-11;CCK-8法检测CPT-11对亲本细胞HT-29和耐药细胞株HT-29/CPT-11细胞的半数抑制率(IC50);绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR检测HT-29/CPT-11和HT-29细胞MDR-1 mRNA的表达.结果:(1) 成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,耐药指数为6.51.(2) HT-29/CPT-11耐药细胞株倍增时间较原代细胞HT-29延长[分别为(41.29±1.69)h和(27.12±2.73)h,P<0.05].(3) 流式细胞术检测细胞周期结果显示,耐药细胞株HT-29/CPT-11 G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05).(4) 耐药细胞HT-29/CPT-11的MDR-1 mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为1.086±0.054和0.416±0.02(P<0.05).结论:成功构建了人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,为下一步研究耐药机制奠定实验基础.     

Pokemon基因表达与胃癌耐药性的关系

目的 探讨okemon基因表达与胃癌细胞药敏性及耐药基因的关系.方法 取60例胃癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化技术检测组织中pokemon蛋白及耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、生存素(survivin)的表达,并分析pokemon蛋白与其他4种蛋白的关系.采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、奥沙利铂(L-OHP)对胃癌细胞株SGC7901、胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR、胃上皮细胞株GES-1的抑制作用;qPCR及蛋白质印迹法检测上述3种细胞株中pokemon和耐药基因的表达.合成针对pokemon的siRNA并转染SGC7901/ADR细胞,检测转染前后SGC7901/ADR细胞的化疗药敏性及耐药基因的变化.结果 胃癌组织中pokemon、P-gp、MRP1、LRP、survivin蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(P＜0.05);pokemon蛋白表达与P-gp、survivin蛋白表达间存在正相关关系(r=0.385 2,P=0.002;r=0.342 4,P=0.007).Pokemon、P-gp、MRP1、survivin蛋白在SGC7901/ADR细胞株中的表达高于细胞株SGC7901及GES-1;SGC7901/ADR细胞株的耐药性最强,SGC7901次之,GES-1最弱(P＜0.01).Pokemon-siRNA转染SGC7901/ADR细胞后细胞中pokemon mRNA的表达明显受到抑制;转染后化疗药物对细胞的抑制能力增强,P-gp、survivin表达减弱(P＜0.05).结论 Pokemon与P-gp、survivin通过相互调控而促进胃癌耐药性的形成.Pokemon可能成为胃癌靶向治疗的候选基因.     

人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株的建立及特性

目的建立人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株,检测该细胞株的多药耐药性及其可能的机制。方法在人结直肠癌细胞株SW480（亲本细胞）的培养液中,逐渐提高化疗药物奥沙利铂（Oxa）浓度,建立稳定的耐药细胞株（SW480/OxR）,采用细胞增殖试剂WST-1检测细胞对化疗药物Oxa和5-FU的敏感性;实时荧光定量PCR检测MDR-1、Survivin及Oct4的mRNA表达水平;流式间接法检测P-gp、Survivin蛋白阳性细胞比例;Western blot方法检测Oct4蛋白表达。结果 WST-1检测细胞增殖结果为：耐药细胞加药（Oxa及5-FU）72h后细胞数量变化不大（P〉0.05）;耐药细胞MDR-1、Survivin和Oct4的mRNA水平,P-gp＋及Survivin＋细胞比例以及Oct4蛋白水平均明显高于亲本细胞（P〈0.01）。结论耐药细胞具有多药耐药特性,可能与高表达耐药蛋白P-gp、抗凋亡蛋白Survivin及干细胞转录因子Oct4有关。     

去甲基化药物逆转结肠癌细胞株sw620/L-OHP耐药性的作用及机理研究

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)对结肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株sw620/L-OHP耐药性的逆转作用及其作用机制.方法 应用5-aza-dC作用于结肠癌细胞sw620与其L-OHP耐药细胞sw620/L-OHP,CCK-8法检测其逆转耐药作用;应用Western blot检测5-aza-dC使用前后sw620/L-OHP细胞中BNIP3基因及耐药基因编码的P糖蛋白(P-GP)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达水平的变化;应用同位素微量示踪法检测5-aza-dC使用前后3w620/L-OHP细胞中甲基转移酶(DNMT)的活性.结果 1.4 μmol/L5-aza-dC能使L-OHP对sw620/L-OHP细胞IC50由(0.335±0.043)μg/mL降到(0.069±0.023)μg/mL,逆转耐药倍数为8.26倍(P＜0.001);5-aza-dC能使sw620/L-OHP细胞中P-GP、MRP蛋白表达增加(P＜0.05),但增加程度与5-aza-dC剂量变化无关(P＞0.05);另外5-aza-dC还能使表达低下的BNIP3蛋白重新表达,且其表达水平随5-aza-dC浓度的增加而增加(P＜0.001);5-aza-dC能够降低sw620/L-OHP细胞中DNMT的活性(P＜0.001).结论 5-aza-dC通过降低DNMT活性来上调BNIP3的表达,并协同某种机制抑制P-GP、MRP的进一步表达,从而逆转sw620/L-OHP细胞耐药性.     

竹节香附素A对耐奥沙利铂肠癌细胞株的作用及机制研究

目的 探讨竹节香附素A(RA)对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP的逆转作用及其可能机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、耐多药基因1(MDR1)等基因的表达;免疫荧光试验及蛋白免疫印迹(WB)检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP、P-gp、IκB-α、P65蛋白的表达情况.结果 RA可增加HCT116/L-OHP细胞株对奥沙利铂的敏感性,两药联合后的半数抑制浓度(IC50)从原来的(234.12±6.13)μg/mL降低至(140.45±2.25)μg/mL,耐药逆转倍数约为1.67,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术显示,单用奥沙利铂时,细胞凋亡率为20.5％,而联合RA后,细胞凋亡率增加至34.4％,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR及WB结果显示,凋亡关键因子caspase-3、PARP在联合组中表达较单用奥沙利铂组增加;耐药蛋白基因MDR-1及其编码蛋白P-gp在联合组中的表达较单药奥沙利铂组减少;此外,WB结果还显示,核因子-κB(NF-κB)信号通路中IκB-α、P65在联合组中的表达较单药组减少.结论 RA可增加结肠癌耐奥沙利铂细胞株对奥沙利铂的敏感性可能与调节NF-κB信号通路减少P-gp的表达有关.     

苦参碱逆转人结肠癌细胞株（HT-29）奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的：研究苦参碱对结肠癌耐药细胞HT-29/奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA;CCK-8法测定苦参碱对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化;实时定量PCR 检测各组细胞肺耐药蛋白（lung resis-tance protein LRP)和 P-glycoprotein (P-gp) mRNA表达水平; Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果苦参碱使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA细胞周期以及细胞凋亡没有影响;联合用药对HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡（P<0.05）。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对HT-29/OX-ALRP和P-gp mRNA以及蛋白的表达没有影响;联合用药作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低（P<0.01）,同时下调了LRP和P-gp蛋白表达（P<0.01）。结论苦参碱部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制可能与细胞内LRP和P-gp表达降低有关。     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

乏氧对肺腺癌A549细胞P糖蛋白和多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 通过研究乏氧对人肺腺癌细胞株A549的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法 乏氧条件下(2％O2)人肺腺癌细胞株A549体外培养24h,丙酮固定后运用免疫组织化学的方法对乏氧诱导因子-1α(HIE-1α)、P-gp和MRP的表达进行检测,并用MTT法检测乏氧条件下A549细胞在阿霉素和顺铂作用下的存活率。结果 乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549中乏氧诱导因子-1α、P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高,HIF-1α与P-gp、MRP的表达增高存在明显的相关性。乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549对阿霉素的耐药性明显增强。结论 在人肺腺癌A549细胞中HIF-1α蛋白表达与P-gp和MRP表达存在明显的相关性。     

多药耐药相关蛋白在白血病耐药研究中的进展

多药耐药是白血病治疗中的一个难题,随着P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)等肿瘤耐药蛋白的发现及相关调节剂在临床上的应用为复发及难治性白血病的治疗开辟了一个新的途径.本文就对白血病另一种耐药蛋白--多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associated protein 1, MRP1)的结构、功能活性及其临床意义的研究进展作一综述,并与P-gp作了比较.