新型Ⅰ型人类免疫缺陷病毒疫苗

目前,新型的HIV-1疫苗主要包括HIV-1DNA疫苗、HIV-1活病毒载体,以及基于这两种疫苗发展起来的异源的致敏-强化疫苗策略.本文就HIV-1DNA疫苗引发免疫反应的原理,疫苗设计中所采用的抗病毒靶点以及提升其免疫效果的策略作了介绍.同时介绍了目前应用广泛的几种HIV-1活病毒载体,以及基于HIV-1DNA疫苗和HIV-1活病毒载体这两种疫苗发展起来的异源的致敏强化疫苗策略.     

人免疫缺陷病毒-1型疫苗研制的策略

新一代的人免疫缺陷病毒-1型HIV-1候选疫苗的开发除了安全性的考虑,还必须从策略上兼顾:①区域流行的优势株;②拥有较多的抗原决定簇,并考虑人群主要组织性相容抗原(MHC)的多态性;③能诱发体液免疫和细胞免疫,而细胞免疫更为重要;④联合免疫或加强免疫;⑤剔除有负面作用的位点。本文重点简述HIV-1候选疫苗的发展策略和方向。     

诱导广谱中和抗体的HIV-1疫苗研究进展

<正>疫苗是感染性疾病防治中最有效的干预手段。已有超过70种疫苗批准用于防治30余种病原微生物的感染,拯救了无数人的生命。但是,由于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的高频变异和包膜刺突(Env)的"构象面罩",病毒获得了强大的免疫逃逸能力,导致人体无法产生有效的免疫应答反应,这给HIV-1疫苗研发带来了挑战。目前进行的人体HIV-1疫苗有效性试验中,RV-144是唯一有效的疫苗,但有效率仅31%[1]。因此,针     

流感流行及其基因疫苗的研究进展

流感的季节性流行和大流行给人类造成了很大的损失。注射流感疫苗是预防流感的主要措施之一。目前上市的人用流感疫苗主要是由鸡胚生产的传统灭活疫苗,在疫苗用毒株的获取和生产速度等方面有很大的局限性。基因疫苗研究在近年来取得了重大进展,显示出了传统疫苗所不能比拟的巨大优势,流感基因疫苗主要有DNA疫苗、腺病毒载体疫苗和痘病毒载体疫苗,本文就这三方面作一简要综述。     

不同免疫类型的柯萨奇病毒DNA疫苗免疫效果研究

柯萨奇病毒B组3型（CoxsackievimsgroupBtype3，CVB3）是引起人类病毒性心肌炎的主要病原体，目前还没有特异性的防治措施。我们将巨噬细胞源趋化因子（macrophage—derivedchemokine，MIC）基因和志贺毒素（Shigatoxin，STx）B亚单位基因分别与CVB3VP1基因融合构建DNA疫苗pcDNA3／MDC-VPI和pcDNA3／SYxB—VPI，免疫小鼠，用7LD30CVB3致死攻击，比较两种疫苗的免疫效果，为柯萨奇病毒疫苗的研制奠定试验基础。     

干血斑样本用于人类免疫缺陷病毒1型前病毒基因诊断的研究

目的研究干血斑（DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染前病毒DNA基因诊断的可行性。方法采集59例静脉吸毒HIV-1感染者和22名HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50μl制备干血斑样本后，分离血浆。QIAamp Blood Mini试剂盒和10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。Roche Cobas Amplicor逆转录聚合酶链反应检测HIV-1感染者血浆病毒载量。HIV-1Env基因Gp41区，gag基因，pol基因分别用2对外侧和内侧引物，按照套式PCR方法，进行扩增。以HIV-1任何两个基因区扩增结果组合判断HIV-1感染。结果在重复2～3次的前提下，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93％（95％可信区间89％～97％），34份全血样本94％（95％可信区间89％～98％）。疋。检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时差异无统计学意义。22份两种阴性样本特异性均为100％（95％可信区间95．93％～100％）。8份血浆病毒载量（VL）〉4．0 Log的DBS样本用于基因诊断的可重复性和HIV-1感染样本检出率优于5份VL〈4．0 Log样本。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94％，一份DBS样本HIV-1特异三个基因片段均未扩增。结论干血斑样本易采集，便于运输，保存条件低，费用低廉，用于HIV-1基因诊断时与全血样本检测结果无显著性差异，病毒载量〈4．0 Log的样本，为增加检出概率需要对样本重复检测。DBS样本HIV-1基因诊断方法适合于无条件立即处理血样本的偏远地区或采样困难的感染者的诊断，及HIV-1母婴垂直传播研究中婴幼儿感染的早期诊断。     

组织工程研究中病毒表达载体的构建

组织工程中的表达载体按构建来源类型可分为质粒和病毒表达载体。其中病毒表达载体包括腺病毒、反转录病毒和慢病毒表达载体。腺病毒是一种线状DNA肿瘤病毒,基因组内有14个基因。反转录病毒是使最常用的一种病毒载体,是由具有感染性的小白鼠白血病病毒改造而来。慢病毒表达载体是以人类免疫缺陷1型病毒为基础发展起来的基因治疗载体。     

甲型肝炎疫苗人群免疫研究

甲型肝炎是以粪—口为主要传播途径的急性传染病。由于甲型肝炎疫苗的研制与推广 ,使这一流行甚广的疾病有了可靠的预防方法。现将甲型肝炎疫苗的预防效果、免疫策略和疫苗免疫的成本—效益研究进展情况综述如下。1　甲肝疫苗的免疫效果和安全性1.1　减毒活疫苗的免疫效果和安全性1.1.1　健康成人和儿童的免疫学效果　由于甲肝减毒活疫苗其免疫学效果与疫苗病毒含量相关 ,规范化甲肝病毒活疫苗滴度应在 10 E6 .5TC ID50 以上 [1 ]。目前我国获准使用的减毒活疫苗有两种 ,浙江省医科院培养的 H2 株和长春生物所培养的 L A- 1株[2 ] 。谭…     

GFP在人脐血CD34~+细胞中的表达及意义

目的探讨慢病毒载体在CD34+脐血细胞(CBCs)中的基因转导效率,为基因治疗的临床应用提供关键材料。方法应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第三代自身失活(self-inactivating,SIN)慢病毒载体(lentiviralvector)系统,通过流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价该载体系统在人CBCs中的基因转导效率。结果 HIV载体的转导效率在95%以上。结论基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为CD34+CBCs基因转导的极好工具。     

SARS-CoVS蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究

目的：克隆表达SARS-CoVS蛋白，构建SARS全长基因疫苗。方法：从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoV S1和S2蛋白的编码序列，再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1，构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染Vero E6细胞，用Western检测S蛋白的表达。结果：PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段，两片段插入pVAX1构建重组表达载体后，经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染Vero E6细胞，收集细胞总蛋白，Western检测获得特异蛋白带。结论：成功克隆并表达了SARS-CoVs蛋白，为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。     

HIV-1中国流行株gag-hIL-2重组痘苗病毒与pIRES-gag-hIL-2核酸疫苗联合免疫的实验研究

目的　将HIV 1中国流行株B亚型gag和hIL 2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达 ,与核酸疫苗联合免疫 ,评价免疫效果 ,为新型艾滋病疫苗开发研制奠定基础。方法　将HIV 1中国流行株gag hIL 2基因片段插入到痘苗病毒载体pJ38启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果　获得了重组痘苗病毒vJ38gag IL 2 ,具有更好的免疫原性 ,3rVV效果好于 2rVV ,以 2rVV DNA混合免疫效果最好。结论　重组痘苗病毒vJ38gag IL 2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫     

肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建

目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。     

Xpert HIV-1病毒载量检测系统用于HIV-1病毒载量检测的临床价值

目的探讨Xpert HIV-1病毒载量(Xpert HIV-1 VL)检测用于HIV-1病毒载量检测的临床价值。方法采用Xpert HIV-1 VL和Abbott m2000 Real Time检测系统(Abbott m2000)同时检测191份血浆样本的HIV-1病毒载量。采用符合率、卡方检验和Kappa值等统计分析两种检测方法定性检测结果的一致性,采用相关性、回归分析和Bland-Altman模型等统计分析两种检测方法定量检测结果的一致性。结果两种检测方法的阳性符合率、阴性符合率和总符合率均为100%,两种方法检测结果一致性分析的Kappa值为1.00(P<0.001);两种方法检测结果的相关系数为0.9576,回归分析表现出较高的相关性(R2=0.9170),Bland-Altman模型分析显示两种方法检测有95.3%(164/172)的样本在95%一致性界限内。结论Xpert HIV-1 VL用于检测HIV-1 RNA具有很高的灵敏度、准确性和稳定性,且操作简单、方便、安全,适合临床用于对HIV-1患者血浆样本中HIV-1 RNA的检测。     

病毒介导的免疫治疗癌症进展

病毒主要作为基因转染载体在免疫治疗中发挥重要作用，本文详细地介绍了病毒载体类型和病毒介导的对肿瘤细胞、宿主细胞的调节、病毒疫苗等免疫治疗癌症的研究进展，可为癌症免疫治疗的基础和临床研究提供参考。     

近全长序列分析HIV-1独特型CRF01_AE/B''重组病毒基因

目的：对上海市发现的1例独特类型的CRF01_AE／B’重组病毒株进行近全长序列分析，以了解其DNA序列的特征．方法：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法，分段扩增HIV-1近全长基因组相应片段，进行克隆、测序．并分析其遗传进化树和序列断点位置。结果：近全长序列分析提示，该患者所感染的病毒由CRF01_AE和HIV-1B’亚型嵌合组成，两者各占约50％：其多聚酶蛋白基因（Pol）和外膜糖蛋白基因（Env）区均有HIV-1B’亚型片段和CRF01_AE片段嵌合组成：2种亚型病毒DNA片段嵌合点的位置与过去报道的重组病毒株（CRF15_AE／B、CRF33_AE／B和CRF34_AE／B）均不同：结论：在我国常见流行的HIV-1CRF01_AE重组病毒与B’亚型已在HIV-1感染人群中发生重组，其可能是在我国散发流行的独特型重组病毒株。     

结核菌疫苗的研究进展

世界范围内，结核病疫情急剧恶化，而疫苗可能是根治结核病的最佳甚至唯一途径。但是，目前唯一可用的疫苗BCG的免疫效果不理想。因此，开发安全、廉价、实用、有效的新型疫苗就成为结核病防治的研究热点.目前研究的疫苗主要有蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、减毒活疫苗和改进的卡介苗以及转基因植物疫苗等。本文概括地分析和介绍了结核病疫苗的研究现状和新近进展。并对疫苗的发展趋势进行了展望。     

用基因组DNA制备独特型抗淋巴瘤核酸疫苗的实验研究

本研究观察从人B细胞淋巴瘤细胞系基因组DNA及RNA分别构建的表达载体作为核酸疫苗诱导小鼠产生抗肿瘤免疫反应的情况。分别提取人B淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的基因组DNA及RNA，将免疫球蛋白重链可变区（IgHV)基因片段克隆到pcDNA3.0真核表达载体中作为独特型核酸疫苗，其中DNA 核酸疫苗用LipofectAMINE转染COS细胞，多面手用RT－PCR观察转录及剪接的情况。两种不同来源的核酸疫苗分别肌内注射免疫小鼠后，用间接免疫荧光法检测抗独特型抗体的生成。结果发现，基因组DNA来源的核酸疫苗在COS细胞中能成功地转录，转录产物大小为477bp，其中86bp的内含子区域被剪接；两种疫苗免疫动物后均可诱导针对Namalwa细胞特异的抗独特型抗体，并于第6周达高峰。结论提示，淋巴瘤基因组DNA和RNA来源的IgHV基因片段均可制备核酸疫苗，能诱发小鼠产生抗淋巴瘤免疫反应。     

基因疫苗——疫苗的新希望

近几年发展起来的基因免疫接种技术导致了基因疫苗的庭生，基因疫苗既具有重组亚单位疫苗的安全性，双具有减毒活疫苗诱导全方位免疫应签的高效力，在病毒感染性疾病和肿瘤等的防治中有着广阔的应用前景本文对基因疫苗的庭生、作用机理和优点等作一简述。     

采用聚合酶链反应检测人类免疫缺陷病毒

1型及2型人类免疫缺陷病毒(HIV-1,HIV-2)被认为是艾滋病及其相关疾病的病因。由于血循环中游离病毒出现率低以及被感染细胞数量少,直接测定血中HIV 是较困难的。一种称为聚合酶链反应的体外DNA 扩增技术已被用于感染者的HIV 前病毒序列的检测。本文介绍聚合酶链反应的原理及其在检测这些病毒中的应用。     

SARS-CoV S蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究

目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVS蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。