广东省食源性副溶血弧菌表型特征与分型比较研究

目的 了解广东省食源性副溶血弧菌的表型特征,并对其分型进行综合比较.方法 对分离自广东省水产品和食物中毒的74株副溶血弧菌分离株进行生化鉴定、药敏试验、耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素(trh)毒力基因的PCR检测.并对副溶血弧菌进行血清分型、核糖体基因分型(Ribotyping)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,应用BioNumerics软件对不同来源、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性.结果 副溶血弧菌除对氯霉素100.00％敏感外,对其余13种抗生素均有不同程度的耐药.tdh阳性率为24.32％、trh阳性率为4.05％.74株副溶血弧菌分为26种血清型,O5:K17和O2:K28型为水产品分离株的优势血清型,O3:K6型为食物中毒分离株的优势血清型.74株副溶血弧菌分为62个核糖体型、67个PFGE型,表现出较大的遗传多样性.结论 广东省大部分食物中毒副溶血弧菌分离株携带tdh毒力基因.3种分型方法中,PFGE的分辨率最高,Ribotyping居中,血清分型最低,3种方法相结合可提高分辨率.     

沈阳地区副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 运用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieldgelelectro phoresis,PFGE)和PCR技术对辽宁沈阳市2010年7-8月份临床粪便标本分离的副溶血性弧菌进行毒力基因检测和分子分型分析.方法 运用PCR技术检测24株副溶血弧菌的耐热溶血素基因(tdh)、耐热溶血素相关溶血素基因(trh)和不耐热溶血素基因(tl);用PFGE技术对其进行分子分型和聚类分析.结果 24株副溶血弧菌均含有tdh和tl基因,表明均为有毒株;PFGE结果显示,24株菌株可分为10种图谱型,其中17株O3:K6被分为4种型别(仅相差1～3条带),表明17株O3:K6在流行病学上密切相关,提示沈阳地区可能存在副溶血弧菌腹泻病的局部暴发或流行.结论 沈阳地区流行的食源性副溶血弧菌存在基因型的多样性,但以遗传关系密切的O3:K6型为优势型别.     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

2018-2022年北京市某区腹泻病例副溶血弧菌流行与分子分型特征

目的 分析2018—2022年北京某平原郊区腹泻病例中副溶血弧菌的流行状况和分子分型特征,为疾病暴发和病原检测提供参考。方法 分析由副溶血性弧菌引起的腹泻病例流行病学及临床资料,对病例的分离菌株进行毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,利用致病菌识别网对PFGE图谱进行聚类分析。结果 腹泻病例中副溶血弧菌检出率为6.83%(87/1 273),不同年份和年龄组检出率差异有统计学意义(χ²_趋势=16.47,χ²=0.005,P<0.01;病例主要临床症状为腹泻(98.85%,86/87)、恶心(87.36%,76/87)、腹痛(68.97%,60/87);分离菌株有11种血清型,构成比前3位为O3∶K6 (58.62%,51/87)、O10∶K4 (14.94%,13/87)和O4∶KUT (10.34%,9/87),O3∶K6血清型比例随年份下降,O10∶K4血清型比例随年份上升,差异有统计学意义(χ²_趋势...     

金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染状况及PFGE分型研究

目的 了解金华市淡水产品中副溶血性弧菌的污染状况,运用脉冲场凝胶电泳技术对分离到的副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采集金华市具有代表性的农贸市场和超市出售的淡水产品,进行副溶血性弧菌的分离与鉴定;应用荧光定量PCR的方法检测毒力基因tdh和trh并进行PFGE聚类分析。结果 150份淡水产品中共检出受到副溶血性弧菌污染的样品64份,阳性率为42.7%;64株副溶血性弧菌分成9个血清群,流行优势血清群为O1、O11;分离到的菌株均没有检测到毒力基因tdh和trh;PFGE共分为54个带型,呈多态性,菌株相似度在52.3%～100%。结论 金华市淡水产品中副溶血性弧菌污染较为严重,应加强淡水产品的监测;PFGE分子分型结果表明,不存在当地淡水产品溶血性弧菌流行趋势。     

腹泻标本分离的副溶血性弧菌的PFGE分型与tdh毒力基因的检测

目的了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的检出情况,探讨流行优势型,分析副溶血性弧菌的毒力基因携带,从而了解疾病发生的诱因,为控制副溶血性弧菌引起的疾病提供依据。方法选择2017年5-10月分离培养腹泻患者标本中的病原菌;质谱仪鉴定出副溶血性弧菌菌株;利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链式反应(PCR)检测菌株毒力基因。结果 108份腹泻患者的粪便标本中培养分离副溶血性弧菌42株,检出率为38.89%(42/108)。PFGE分为12个型别,优势型为A1型,占59.52%(25/42)。tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌38株,阳性率为90.48%(38/42)。结论腹泻患者中副溶血性弧菌检出率较高,PFGE分型方法准确性高、特异性高、重复性好、结果易判读,致病性的菌株带型集中。患者中分离得到的副溶血性弧菌大多为带毒株,具有致病能力。     

2018—2019年包头市市售水产品中副溶血性弧菌监测结果及病原学特征分析

目的 了解包头市市售水产品中副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus,VP）的带菌率,并对其毒力基因、耐药性、分子分型等病原学特征进行分析。 方法 2018—2019年共采集市售水产品160份,分离培养获得VP,荧光定量PCR测定毒力基因、微量肉汤稀释法测定抗生素敏感性、脉冲场凝胶电泳进行分子分型。 结果 160份市售水产品中共检出VP 43株,海水、淡水、地产淡水产品检出率分别为20.62%、36.51%、33.33%,本地产水产品与外地产水产品检出率无统计学差异（χ2 = 0.069,P＞0.05）;43株VP thl基因的携带率为100%,1株携带tdh基因;仅有12株VP对全部22种抗生素敏感,主要耐药性表现在头孢噻肟（51.16%）、氨苄西林（46.51%）,1株细菌最高耐受11种抗生素并发现2株碳青霉烯类药物耐药菌;43株VP分为39个PFGE型别,相似度1.9%～100%,无明显优势型别条带。 结论 包头市市售水产品中存在VP污染,本地产与其他地区来源的水产品污染程度相当;VP对β内酰胺类抗生素耐药程度高,PFGE型别呈多态性。后续应持续对水产中VP污染的监测,重视多耐药的发生及耐药谱的改变,加强爆发菌株及相关患者的溯源工作。     

1起副溶血弧菌性食物中毒的病原分析

目的 调查1起食物中毒的致病病原,为食源性疾病防控提供依据.方法 对1起食物中毒事件进行流行病学调查;采集可疑食材和病例标本,将分离鉴定的副溶血弧菌进行血清学分型、多重PCR毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析.结果 在3名患者粪便均分离到副溶血弧菌,检出2种血清型,2株为O3∶K6血清型,1株为O4∶...     

泰州市不同来源副溶血性弧菌分离株毒力基因型和耐药性的比较研究

分析上海市奉贤区不同来源副溶血性弧菌耐药性、主要毒力基因携带及分子分型情况。

对2018—2020年上海市奉贤区分离到的210株副溶血性弧菌进行17种抗生素药物敏感试验,耐热直接溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin,tdh）、耐热相关溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin⁃related hemolysin,trh）和不耐热溶血素基因（thermolabile hemolysin,tlh）检测以及脉冲场凝胶电泳分型分析。

药敏结果显示,共检出耐药株147株,耐药率为70.00%。其中,126株对1种抗生素耐药,以耐头孢唑啉（CFZ）为主;15株对2种抗生素耐药,以耐CFZ和氨苄西林（AMP）为主;多重耐药菌（MDR）6株,以耐AMP、复方新诺明（SXT）、CFZ、头孢噻肟（CTX）、头孢他啶（CAZ）和头孢吡肟（FEP）为主。食源性菌株AMP耐药水平高于人源性菌株（P<0.05）。210株副溶血性弧菌均携带毒力基因tlh。84株人源副溶血性弧菌菌株tdh和trh基因携带率分别为89.29%和7.14%;126株食品源副溶血性弧菌菌株trh基因携带率为1.59%,未检出tdh基因。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析得到173种带型,菌株之间的相似度为48.80%~100.00%,存在主要流行克隆系。

上海市奉贤区副溶血性弧菌存在多重耐药现象,对β⁃内酰胺类抗生素耐药情况较为严重,人源性菌株毒力基因携带率较高。PFGE带型总体上较为分散,但人源菌株中存在主要流行克隆系。奉贤区引起食源性疾病的风险性较高,应加强防控。

     

马鞍山市不同来源副溶血弧菌生物学特征及分子流行病学研究

目的了解马鞍山市不同来源副溶血弧菌分离株的病原学及分子生物学特征。方法从市场流通食物、食物中毒事件标本及临床腹泻病例标本中分离培养、鉴定副溶血弧菌;并进行尿素酶、神奈川试验、药敏试验;PCR方法检测tlh、tdh和trh基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 40株不同来源的副溶血弧菌尿素酶阳性17株,神奈川试验阳性20株;头孢唑啉的耐药达到95.00%,氨苄西林的耐药达到69.00%,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、派拉西林/三唑巴坦、美洛培南均100.00%敏感;毒力基因检测tlh阳性36株,阳性率为90.00%,tdh 29株阳性,阳性率为72.50%,40株菌trh全部阴性;PFGE将40株副溶血弧菌分成19种型别,部分菌株相似性100.00%,整体菌株带型相对分散。结论马鞍山市副溶血性弧菌对大多数抗生素均具有较高敏感性,3种毒力基因携带率低,PFGE提示有部分菌株有流行趋势,但整体没有发现明显优势菌群,提示本地食品中副溶血性弧菌未出现大流行迹象。     

水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

采用脉冲场凝胶电泳和自动化核糖体分型技术分析MPN法分离出的副溶血性弧菌的同源性

目的对15管MPN法分离的78株副溶血性弧菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和自动化核糖体分型(RP)研究,以确定其同源性。方法EcoRⅠ酶切DNA进行核糖体分型;限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ在50℃和37℃酶切包被的染色体DNA,进行脉冲场凝胶电泳分析,两者的结果均用BioNumerics软件进行聚类分析。结果78株副溶血性弧菌用EcoRⅠ、SfiⅠ、NotⅠ酶切后各产生64、68、71种带型,同一样品中分离的菌株有的带型完全相同,但大部分带型不同,且划分到不同的群中。结论PFGE是一种快速、有力、重复性好的分型技术,而且分辨能力要高于核糖体分型;在今后的溯源研究中,要考虑对可疑食品采用MPN定量法挑取多个菌落进行亲缘关系分析,防止漏检。     

疑似霍乱弧菌鉴定及分子分型检测

目的 对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征.方法 利用细菌生化鉴定条(API 20 E)进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要毒力基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其基因型别.结果 经鉴定,该2株疑似霍乱菌株均为非O1非139群霍乱弧菌,经16 SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%,均包含毒力基因hylA、ompW和toxR,PFGE结果显示2株菌具有完全不同的带型.结论 2株疑似霍乱弧菌为非O1非139群霍乱弧菌,其致病因素与(hylA)、(ompW)、(toxR)毒力基因有关,并且2株菌遗传关系较远.     

食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析

目的对2起食物中毒中不同血清型的副溶血性弧菌进行基因特征分析。方法第1起食物中毒发生在2010年5月17日深圳市某食堂,感染人数20人左右,采集到病人肛拭子9份,可疑食品3份,每份样本挑取20个可疑菌落;第2起食物中毒发生在2010年7月1日深圳市某配餐中心,感染人数10人左右,采集到病人肛拭子7份,可疑食品2份,涂抹样3份,每份样本挑取10个可疑菌落。对可疑菌落分别进行盐耐受试验、生化试验和血清学鉴定。从2起食物中毒的每份样本中挑取不同血清型进行tdh、trh、GS—PCR、orf8基因检测和脉冲场凝胶电泳分析（PFGE）。结果第1起食物中毒分离到副溶血性弧菌180株,其中03：K6107株,02：K2870株,04：K34、03：K25、04：K12各1株;第2起食物中毒分离到副溶血性弧菌80株,其中03：K644株,04：K8、011：K36、011：K19各10株,01：K566株。03：K6、01：K56、04：K8、011：K36携带tdh基因,不携带砒基因,其他血清型（02：K28,04：K12,03：K25,04：K34,011：K19）均不携带tdh和f砘基因。03：K6和011：K362种血清型的GS-PCR和orf8基因阳性,其他血清型阴性。PFGE结果显示第1起食物中毒中食品和病人肛拭分离的02：K28（分别3、2株）的PFGE带型基本一致,属高度相关菌株。第2起食物中毒中病人肛拭分离的4株03：K6与卤鸡蛋盘涂抹样分离的1株03：K6PFGE带型一致。2起食物中毒的03：K6带型基本一致。来自相同样本不同血清型的副溶血性弧菌的PFGE带型不一致。结论第1起食物中毒与食用污染了副溶血性弧菌的食品有关,第2起食物中毒与污染了副溶血性弧茵的卤鸡蛋盘有关。通过血清分型和分子生物学分析,可认为相同样本中分离的不同血清型副溶血性弧菌未发现遗传学证据,为遗传不相关菌株。     

2014-2015年烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株的生物学特征及分子分型研究

目的 了解烟台市副溶血性弧菌临床分离株的耐药特性、毒力基因分布情况以及分子分型特征。方法 对2014-2015年的副溶血性弧菌临床分离菌株按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行14种抗生素的药敏试验;通过实时荧光PCR检测tlh、trh、tdh、orf8 4种毒力基因;采用脉冲场凝胶电泳对菌株基因组DNA进行分子分型。结果 (1)20株副溶血性弧菌仅对头孢唑啉耐药或处于耐受敏感之间,耐药率为5.0%,对其他13种抗生素100.0%敏感。(2)20株副溶血性弧菌均携带特异性基因tlh,其他3种毒力基因trh、tdh、orf8的阳性率分别为30.0%(6/20)、100.0%(20/20)、65.0%(13/20),毒力基因组成以orf8-tdh型为主,占60.0%(12/20)。(3)20株菌被限制性内切酶NotⅠ切出6个PFGE types(PT),带型相似度60.7%～100.0%,根据PT相似系数大于80.0%的菌株,可以分成A群和B群2个聚类群。结论 烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株耐药较轻,毒力基因tdh、orf8的携带率较高,PFGE带型聚类群内相似度较高且存在优势明显的分子型别。