人脐带间充质干细胞对输卵管炎大鼠输卵管超微结构和功能的改变

目的:探讨人脐带Wharton’s间充质干细胞(Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)在输卵管炎性不孕症治疗中的应用前景。方法:成年雌性Wistar大鼠50只,随机分为输卵管炎症模型组(n=40)和对照组(n=10)。其中,模型组大鼠双侧输卵管注入混合菌后再随机分成5组,急性治疗前组(n=5),于造模后第20日取材;急性治疗组(n=10),于造模第20日,给予腹腔注射WJMSCs(1×106/ml),7 d/次,共3次,疗程结束1周后5只取材;慢性治疗前组(n=5),于造模后30 d取材;慢性治疗组(n=10),于造模第30日开始给予WJMSCs;方法同急性治疗组,疗程结束1周后5只取材;慢性模型组(n=10),造模后不给予任何处理,第51日5只取材,所有余下雌鼠分别与雄鼠同笼。检测比较急、慢性输卵管炎模型大鼠腹腔注射WJMSCs治疗前、后血清INF-γ和TNF-α水平、输卵管超微结构、单位面积输卵管腔上皮皱褶长度(Lu)和分泌颗粒的密度(D),以及各组受孕率及产仔数。结果:急性输卵管炎期,输卵管上皮被破坏,间质水肿,治疗后基本恢复正常。慢性输卵管炎期,上皮扁平化,黏膜下纤维化,治疗后无明显改善。急性输卵管炎治疗前组Lu值无明显变化,而D值显著下降,治疗后恢复正常;慢性输卵管炎治疗前组Lu、D值均明显降低,治疗后无明显好转。急、慢性输卵管炎治疗前组血清TNF-α和INF-γ水平均明显增高,治疗后急性组恢复到正常水平,而慢性治疗组虽有下降,但仍高于正常水平。急性输卵管炎治疗组受孕率、产仔数恢复正常。慢性输卵管炎治疗前、后,其受孕率、产仔数均明显下降。结论:WJMSCs腹腔注射治疗大鼠急性输卵管炎,能降低血清炎症因子,恢复输卵管结构和功能,恢复生育功能,但对慢性输卵管炎的治疗效果不明显,提示在急性期治疗输卵管炎有可能防止继发不孕的发生。     

间充质干细胞迁移中相关的细胞因子

间充质干细胞作为理想的种子细胞,在创伤愈合、组织修复和再生中被广泛的研究。内源性或外源性的间充质干细胞募集到损伤部位,在局部微环境下诱导细胞迁移、并有利于移植细胞在局部存活、分化成特定的细胞,实现愈合、修复、再生的功能。这些内、外源性细胞是如何识别、移到受损部位的？大量的研究显示,一些细胞因子如CXC族趋化因子及其受体、生长因子及其受体、溶血磷脂酸及其受体等细胞因子在干细胞的迁移中起重要的作用。本文综述部分在间充质干细胞迁移中起重要作用的细胞因子,以更好的理解间充质干细胞迁移的分子机制。     

人脐带间充质干细胞移植对围绝经期大鼠INHB和AMH的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)移植对围绝经期大鼠AMH、INHB的影响。方法:阴道脱落细胞涂片筛选30只13~15月龄的SPF级SD围绝经期大鼠模型,随机分为A、B、C组(每组10只)。A组不予处理;B组经尾静脉移植浓度1×106细胞/ml h UCMSCs 1ml,隔日1次,共2次;C组移植等量的细胞培养液。于成模时和末次移植后7天和14天,检测各组大鼠的AMH、INHB水平。结果:3组成模时及末次移植后7天的AMH、INHB水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。末次移植后14天,B组的AMH、INHB水平高于A、C组,差异有统计学意义(P0.05);移植后,A、C组的AMH、INHB水平逐渐下降,移植后第14天时下降显著,与成模时比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:h UCMSCs移植可延缓围绝经期SD大鼠AMH、INHB下降水平,提示对延缓围绝经期大鼠卵巢储备功能下降有积极意义。     

脐带间充质干细胞治疗宫腔粘连的研究进展

宫腔粘连(IUA)是一种常见妇科疾病,常导致月经过少、闭经甚至不孕不育等严重后果。脐带间充质干细胞(UCMSCs)具有多向分化潜能、强大的抗炎和免疫调节特性,能促进组织修复,可能成为治疗IUA的新方法。本文对UCMSCs在IUA治疗中的应用及相关作用机制进行总结,旨在为其临床治疗提供新的思路和方法。     

输卵管:间充质干细胞的新来源

目的:探讨临床上废弃的输卵管组织中是否存在间充质干细胞(MSC)。方法:收取2013年6月至9月在北京海军总医院手术治疗的6例因子宫颈癌、子宫肌瘤、子宫内膜癌及卵巢癌等疾病行输卵管切除术的输卵管组织,体外细胞培养、流式细胞学及体外诱导分化鉴定此类细胞为输卵管MSC。结果:体外分离、培养及扩增的输卵管细胞形态呈长梭型,细胞排列均一并呈漩涡状生长。流式细胞术检测结果显示,≥95%的MSC表达MSC相关表面标记物CD105、CD73和CD90,CD13、CD29、CD44、CD166、HLA-ABC均阳性表达,CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR均阴性表达。体外诱导分化显示,输卵管干细胞具有成骨、成脂肪及成软骨分化的能力;RT-PCR结果显示,输卵管干细胞经诱导分化后,成脂相关基因AP2,成骨相关基因Osteopontin及成软骨相关基因Sox-9和COMP表达均阳性。结论:临床废弃的输卵管组织中存在MSC,提示临床中废弃的输卵管组织是MSC的新来源。     

人脐带间充质干细胞在妇科疾病中的研究进展

人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)是来源于中胚层的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞。与其他来源的间充质干细胞(MSCs)相比,hUCMSCs具有来源丰富、低免疫原性、对捐献者无损害及不涉及伦理问题等优势,因此hUCMSCs在细胞治疗和再生医学的临床应用方面拥有广阔的前景。近年研究表明,hUCMSCs可能为妇科疾病治疗提供新的思路。     

衰老对小鼠睾丸结构和精子发生的影响

目的:探讨衰老对小鼠睾丸结构和精子发生的影响。方法:昆明小鼠分为老龄组(18月龄,n=15)和青年对照组(6月龄,n=15),取睾丸称重,H.E.染色,观察睾丸组织结构,计数萎缩曲细精管的比例,定量分析睾丸精子发生的状态。结果:老龄小鼠睾丸有部分曲细精管萎缩,多为局灶性,管内生精细胞减少,生精阻滞常发生在初级精母细胞阶段,或有生精细胞脱落至管腔。老龄组萎缩管的比例高于对照组(P<0.01)。定量分析显示老龄组曲细精管横截面内球形精子细胞和延长精子细胞与支持细胞的比例均显著低于对照组(P<0.01),支持细胞数目与对照组相比无显著差异(P>0.05),精原细胞和初级精母细胞与支持细胞的比值也没有显著减少(P>0.05)。结论:老龄小鼠睾丸精子发生衰减,以球形精子细胞和延长精子细胞减少为主。昆明小鼠可作为雄性生殖衰老研究的动物模型。     

妊娠晚期羊水间充质干细胞生物学特性研究

目的：研究妊娠晚期羊水来源的胎儿间充质干细胞（MSCs）的体外分离、培养及其生物学特性。方法：贴壁培养法培养妊娠晚期羊水中的胎儿MSCs，形成细胞集落后用细胞刮刀刮下细胞重新培养、扩增，用倒置相差显微镜观察细胞形态．通过细胞表面抗原、细胞核型分析、细胞因子检测等证实该细胞是否为胎儿MSCs，以及不同代细胞之间是否有生物学特性上的差异，并通过绘制生长曲线，比较各代细胞的生长趋势。结果：用贴壁培养法分离、培养出的细胞呈梭形，不同代胎儿MSCs表面抗原、细胞核型相同，不同羊水标本来源的胎儿MSCs均表达胚胎干细胞相关蛋白（Oct-d），第8代（P8代）细胞比P2、P5代细胞生长缓慢。结论：通过上述方法可以成功分离、培养妊娠晚期羊水来源的胎儿MSCs，不同代细胞间生物学特性基本相同。     

妊娠晚期羊水间充质干细胞生物学特性研究

目的:研究妊娠晚期羊水来源的胎儿间充质干细胞(MSCs)的体外分离、培养及其生物学特性.方法:贴壁培养法培养妊娠晚期羊水中的胎儿MSCs,形成细胞集落后用细胞刮刀刮下细胞重新培养、扩增,用倒置相差显微镜观察细胞形态,通过细胞表面抗原、细胞核型分析、细胞因子检测等证实该细胞是否为胎儿MSCs,以及不同代细胞之间是否有生物学特性上的差异,并通过绘制生长曲线,比较各代细胞的生长趋势.结果:用贴壁培养法分离、培养出的细胞呈梭形,不同代胎儿MSCs表面抗原、细胞核型相同,不同羊水标本来源的胎儿MSCs均表达胚胎干细胞相关蛋白(Oct-4),第8代(P8代)细胞比P2、P5代细胞生长缓慢.结论:通过上述方法可以成功分离、培养妊娠晚期羊水来源的胎儿MSCs,不同代细胞间生物学特性基本相同.     

脐带间充质干细胞移植预防宫腔粘连的研究

目的:采用机械刮宫建立大鼠宫腔粘连(IUA)模型,研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)对IUA的预防作用。方法:将雌性未受孕SD大鼠麻醉后进行机械刮宫,分别于术后第3、5、7、9、12天进行大体观察,取子宫刮宫段,Western blot法检测TGF-β1表达,观察子宫内膜愈合情况。将雌性未受孕SD大鼠随机分为生理盐水组、干细胞组,麻醉后行机械刮宫,术后分别给药,于给药第3天打开腹腔进行大体观察,取刮宫段,Western blot法检测TGF-β1表达;常规固定组织后进行HE染色、Masson染色,观察受损子宫的愈合程度;免疫组化检测CD34和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:刮宫后第3天,与其余时间点相比,TGF-β1表达明显增加,IUA程度最为严重。与生理盐水组相比,干细胞组的IUA评分显著降低(P0.05)。Western blot结果显示,与生理盐水组相比,干细胞组的TGF-β1表达明显降低,差异有统计学意义(P0.01);HE染色、Masson染色显示,与生理盐水组相比,干细胞组的子宫内膜纤维化程度较低,内膜愈合较好。与生理盐水组相比,干细胞组子宫组织的CTGF染色分值明显下降(P0.01),CD34染色分值明显升高(P0.01)。结论:UCMSCs可有效预防术后IUA,促进子宫内膜愈合。     

间充质干细胞与卵巢癌的相互作用

间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)与肿瘤的关系日益受到重视。MSCs可趋化到肿瘤局部,参与间质形成,与肿瘤细胞相互作用。研究表明,MSCs可通过分泌细胞因子、促进肿瘤干细胞化等抑制或促进卵巢癌细胞增殖;与卵巢癌细胞发生交互作用,促进或抑制卵巢癌的侵袭和转移;MSCs还可通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、骨形成蛋白4/Hedgehog(BMP4/HH)信号通路增强卵巢癌化疗耐药性;可利用MSCs对肿瘤组织的趋向性将其作为载体构建靶向给药系统对卵巢癌进行靶向治疗。因此,MSCs在卵巢癌的发生发展中起重要作用,为该病的治疗提供了新的研究思路,但具体作用及机制仍存在较多争议,有待进一步研究。     

Combined Transplantation of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Progenitor Cells Restores Cavernous Nerve Injury-Related Erectile Dysfunction

Background

Whether combined transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs) and endothelial progenitor cells (EPCs) is more effective than transplantation of a single cell type in the restoration of erectile function is unknown.

骨髓间充质干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟的研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响。方法:分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM)。收集小鼠生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞,根据有无完整颗粒细胞层包裹颗粒细胞-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC)分为2类,分别在4种培养基(CM、DMEM、α-MEM、HTF)中培养不同时间,观察卵母细胞核成熟情况,荧光标记后激光共聚焦检测皮质颗粒(cortical granules,CG)分布和含量变化;体外受精后观察受精率和囊胚形成率。结果:2类COC卵母细胞的成熟率CM组明显高于DMEM组、α-MEM组、HTF组(P<0.01);体外受精率和囊胚形成率CM组明显高于DMEM组、HTF组(P<0.01),与α-MEM组和体内成熟组间差异无统计学意义(P>0.05);CM组卵母细胞内CG分布和含量变化与核成熟同步。结论:CM能使小鼠卵母细胞核、质同步成熟,提高了成熟率和卵母细胞质量。     

骨髓间充质干细胞对顺铂所致的大鼠窦前卵泡损伤的保护作用

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对顺铂(DDP)所致的体外培养大鼠窦前卵泡损伤的保护作用。方法:实验分为3组,每组为30个窦前卵泡。实验组:取第3代MSCs,贴壁生长后,将大鼠窦前卵泡移入培养板内共培养24小时后换液,加入1μg/ml DDP,作用24小时后换新鲜基础培养液;实验对照组:未行MSCs共培养,直接将大鼠窦前卵泡移入培养液中培养,后面方法同实验组;空白对照组:大鼠窦前卵泡移入培养液中培养,不加入DDP。光镜下观察3组窦前卵泡的形态学变化,采用化学发光法分别检测加药后第3、5、7天各组培养液中雌二醇(E2)的浓度。结果:1实验组窦前卵泡第3、5天均存活,第7天仅少数窦前卵泡变黑,但卵母细胞清晰可见;实验对照组窦前卵泡第3天出现退化现象,第7天则完全退化;空白对照组窦前卵泡第3天形态尚规整,但第7天大多数卵泡出现退化现象。2实验组中E2含量随着时间的变化逐渐升高(P0.05);空白对照组E2含量随着时间的变化逐渐下降(P0.05);实验对照组E2含量最低,变化不大,3个时间点比较,差异无统计学意义(P0.05)。3组间大鼠窦前卵泡培养液中E2含量间有主效应(P0.05),时间和组别之间存在交互效应(P0.05)。结论:MSCs对DDP引起的窦前卵泡的损伤可能有保护作用,可恢复并促进窦前卵泡的内分泌功能。     

人脐带间充质干细胞促进宫腔粘连大鼠子宫内膜增殖与分化

目的： 评估人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUCMSC）对宫腔粘连大鼠损伤子宫内膜增殖分化的影响。方法： 首先以自身对照为原则构建宫腔粘连大鼠模型20只,造模14 d后将其随机分为干细胞组（n=10）和对照组（n=10）;获取人脐带标本后分离培养hUCMSC,传至第三代时将0.5 mL hUCMSC悬液多点注射于干细胞组造模侧子宫;另在对照组造模侧子宫注射等量的磷酸盐缓冲液,2组未造模侧子宫均不处理。干预7 d后获取子宫组织,使用免疫荧光染色检测人核抗体、子宫内膜上皮细胞标记物角蛋白（CK）抗体和间质细胞标记物波形蛋白抗体在大鼠子宫中的分布情况,以此评估hUCMSC在大鼠子宫中的定植和分化;使用免疫组化染色和实时荧光定量聚合酶链反应观察大鼠子宫组织增殖细胞核抗原Ki-67和CK的表达量及其mRNA表达水平。结果： 宫腔粘连大鼠模型子宫内膜组织表现为子宫腔缩窄,内膜腺体稀疏,腔上皮缺失,间质内无细胞结构区域增多;另子宫宫腔剖视可见其形态欠规则,颜色苍白,粘连带形成,宫腔欠通畅,部分闭塞。体外培养的hUCMSC在细胞形态及免疫表型方面均符合hUCMSC特征。干细胞组中,在人核与波形蛋白共同染色切片中,红色荧光与绿色荧光共同显影于同一细胞;且干细胞组的Ki-67和CK的平均光密度和mRNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论： hUCMSC可在损伤部位存活并定植,并可能通过上调Ki-67和CK表达改善组织修复微环境而非经分化为子宫内膜细胞起作用。     

罗格列酮对人胚胎干细胞向脂肪细胞分化的影响

目的:探讨罗格列酮对人胚胎干细胞(hESCs)向脂肪细胞分化的作用。方法:收集常规IVF/ICSI-ET周期废弃胚胎,建立并鉴定hESCs系,扩增备用。根据基础成脂诱导分化培养基中是否添加10μmol/L罗格列酮分为实验组和对照组,采用油红-O染色测定细胞内脂滴、GPO-POD酶法测定细胞内甘油三酯和RT-PCR法测定脂肪细胞特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)mRNA鉴定脂肪细胞,并进行组间比较。结果:hESCs可定向诱导分化为脂肪细胞,罗格列酮刺激组较对照组甘油三酯含量高,差异具有显著性(P<0.05)。结论:PPARγ激动剂——罗格列酮对人胚胎干细胞向脂肪细胞诱导分化有促进作用,可显著提高诱导分化效率。