RIPK1和RIPK3介导的坏死性凋亡在脑梗死中的研究进展

<正>随着研究的不断深入,人们发现了坏死性凋亡这种特殊的细胞死亡方式,受体相互作用蛋白激酶1 (receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)和RIPK3是介导坏死性凋亡最为关键的细胞内信号因子,当死亡受体与配体结合时,形成RIPK1/RIPK3/混合谱系激酶域样蛋白(mixedlineage kinase domainlike protein,MLKL)复合物介导细胞发生坏死性凋亡,导致炎症反应的产生。多项研究表明坏死性凋亡参与脑卒中、     

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

目的：研究肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法：常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组（Sp,MOI=30∶1）、阴性对照组[渥曼青霉素（wortmannin,WT）,2 μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素（rapamycin,Rapa）,1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组（WT和Sp共同处理）,各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ（microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ）、磷酸化UNC-51-K激酶1（phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1）和螯体1（sequestosome 1,P62）的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY（red fluorescent protein-pneumolysin）、GFP-LC3或（和）RFP-PLY转染/共转染A549细胞,Western blot检测各组磷酸肌醇3-激酶-Ⅰ/Ⅲ（phosphoinositide 3-kinase-Ⅰ/Ⅲ,PI3K-Ⅰ/Ⅲ）、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、Beclin-1蛋白（Beclin 1 protein,Be－clin-1）和哺乳动物雷帕霉素靶（mammalian target of rapamycin,mTOR）的表达。结果：处理A549细胞3 h后,与阴性对照组（WT）相比,Sp感染后,自噬点明显增多（t=41.313,P=0.001）,电镜观察到典型的自噬体结构,LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调（t=121.592,P=0.000）;A549细胞转染RFP-PLY处理3 h后,与阴性对照组（WT）相比,Sp感染同样观察到明显的自噬现象,PI3K-I、Akt蛋白和mTOR表达下调（tPI3K-I=16.544,PPI3K-I= 0.004;tAkt=22.679,PAkt=0.002;tmTOR=19.503,PmTOR=0.003）,而PI3K-Ⅲ和Beclin-1水平无明显差异（tPI3K-Ⅲ=3.572,PPI3K-Ⅲ=0.070;tBeclin-1=0.799,PBeclin-1=0.508）。结论：野生型Sp诱导A549细胞自噬可能通过PI3K-I/Akt/mTOR信号途径。     

苗药验方四大血可减少关节炎大鼠滑膜组织的坏死性凋亡和血管新生：基于抑制RIPK1/RIPK3/MLKL通路

目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠滑膜组织坏死性凋亡和滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW,40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40 g/kg、SX 20 g/kg、SX 10 g/kg）,7只/组。构建CIA大鼠模型。建模后测量大鼠双后肢足跖肿胀程度并进行关节炎指数评分。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-17变化,HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化,Real-time PCR检测滑膜组织中VEGF、MMP-9、Ang-1、RIPK1、RIPK3、Caspase-8 mRNA表达水平,Western blot检测滑膜组织中VEGF、MMP9、Ang-1、STAT-3、RIPK1、RIPK3、MLKL、p-MLKL、Caspase-8蛋白表达水平。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。在光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片,Mod组可见大量炎性细胞浸润,各层组织结构混乱;而药物治疗组中,炎性细胞浸润、滑膜血管新生和滑膜增生程度均降低。且随SX剂量增高,治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比,GTW组和SX 40 g/kg组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-17含量,滑膜组织中RIPK1、RIPK3、VEGF、Ang-1、MMP9 mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平增高（P<0.05）并下调Stat-3蛋白表达和MLKL的磷酸化水平（P<0.05）。结论 SX可以改善CIA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路激活,并下调促血管生长因子VEGF、Ang-1、MMP9、STAT-3表达有关。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2（COX-2）基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法（1）以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象：分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48h后用半定量RT-PCR和Westernbolt分别检测COX-2mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。（2）以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Westernboh检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果（1）与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μ1的siRNA组凋亡率明显增高。（2）lμlCOX-2siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组（P〈0．05）。（3）与阴性转染组相比,10IxlCOX-2siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)调控人结肠癌HT-29细胞程序性坏死的分子机制

 目的  研究受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)在人结肠HT-29细胞程序性坏死过程中的作用,并探讨E3泛素连接酶三重结构域包含蛋白16 (tripartite domain containing protein 16,Trim16)对其作用的潜在调控机制。方法  用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)建立HT-29细胞的程序性坏死模型,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测其对凋亡、坏死细胞数目的影响。分别用Western blot和qRT-PCR检测RIPK1在细胞程序性坏死中的表达。构建稳定表达Flag标记的RIPK1的HT-29细胞株,采用Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现与RIPK1有相互作用的新蛋白。应用Ni-NTA pulldown试验检测筛选出的E3泛素连接酶对RIPK1泛素化的调控。结果  TNFα能够成功诱导HT-29细胞程序性坏死。HT-29细胞在TNFα和半胱天蛋白酶抑制剂z-VAD处理后,表现出RIPK1、RIPK3、混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)表达水平显著增加,并伴随着炎性因子白介素1α(IL1α)和白介素6(IL6)水平明显升高。Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现一个与RIPK1有相互作用的E3泛素连接酶Trim16,体外实验表明Trim16可以增强RIPK1的泛素化程度,其可能调节RIPK1在程序性坏死过程中的作用。结论  RIPK1在TNFα和z-VAD诱导人结肠癌HT-29细胞的程序性坏死过程中起重要作用,E3泛素连接酶Trim16对此过程可能有重要调控作用。     

氯己定与次氯酸钠用于根尖周炎根管治疗的临床对比分析

目的 观察氯己定和次氯酸钠对根尖周炎患者的细菌、促炎因子及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）水平的影响。方法 选取2019年6月至2021年5月杭州市西溪医院收治的80例根尖周炎患者，采用随机数字表法将其分为A、B两组，每组各40例。A组患者用2%氯己定冲洗根管治疗，B组用3%次氯酸钠冲洗根管治疗。比较两组患者治疗前后的牙菌落计数、促炎因子和MMP水平。结果 治疗后，两组患者的牙菌落计数、社区牙周指数（community periodontal index，CPI）均显著低于本组治疗前（P<0.05），但两组患者的牙菌落计数、CPI比较差异均无统计学意义（P>0.05）。治疗后，A组患者的肿瘤坏死因子–α（tumour necrosis factor–α，TNF–α）、白细胞介素–1β（interleukin–1β，IL–1β）、MMP–2、MMP–3、MMP–9水平显著低于治疗前，B组患者的TNF–α、IL–1β、MMP–2、MMP–3、MMP–8水平显著低于治疗前（P<0.05）；A组患者的TNF–α、IL–1β、MMP–9水平显著低于B组，MMP–8水平显著高于B组（P<0.05）。结论 氯己定和次氯酸钠均能降低根尖周炎患者的牙内细菌、促炎因子、MMP–2、MMP–3水平，减轻患者的炎性反应，氯己定降低MMP–9效果更佳，次氯酸钠降低MMP–8效果更佳。     

miR–22调控PI3K/AKT信号通路 对肝癌大鼠的影响

目的 探讨miR–22调控磷脂酰肌醇–3激酶–3（phosphatidylinositol 3–kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号通路对肝癌大鼠的影响。方法 选取SPF级健康雄性大鼠43只,根据完全随机分组法选取10只作为空白组;余33只建立肝癌模型,成功建模30只,将其按照完全随机分组法分为模型组、上调miR–22组、下调miR–22组,每组各10只。实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real–time polymerase chain reaction,qRT–PCR）法检测miR–22相对表达量,肝功能检测仪检测谷丙转氨酶（alanine transaminase,ALT）、白蛋白（albumin,ALB）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）水平,采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测PI3K、AKT、p–AKT水平。结果 模型组、上调miR–22组miR–22相对表达量高于下调miR–22组;ALT、ALB、TBIL、PI3K、AKT水平高于下调miR–22组,p–AKT水平低于下调miR–22组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 通过下调miR–22对PI3K/AKT信号通路进行调控,可有效改善大鼠的肝功能,为临床肝癌靶向治疗提供理论依据。     

细胞程序性坏死在急性肺损伤中作用的研究进展

 程序性坏死作为一种新的细胞程序性死亡方式参与急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的病理过程,主要在疾病前期由各类高危因素触发,由受体相互作用蛋白激酶1（receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1）、RIPK3、混合谱系激酶结构域样蛋白（mixed-lineage kinase domain-like protein,MLKL）介导,导致肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、肺泡巨噬细胞等细胞死亡,直接或通过调节机体炎症反应造成严重的肺泡结构损伤及肺水肿,应用抑制剂阻断程序性坏死可以减轻肺损伤。本文就程序性坏死在ALI中的作用进行综述,以期为临床筛选高危患者和治疗提供依据。     

程序性细胞坏死参与急慢性损伤脑内神经元死亡的研究进展

 程序性细胞坏死是一种新发现的细胞死亡形式。这类死亡细胞形态类似坏死,而其死亡过程受胞内主动机制的调节,由此改变了坏死细胞不受内在机制调控的经典概念。当细胞膜上死亡受体与其配体结合,细胞内凋亡因子caspase-8被抑制时,激活受体相互作用蛋白（receptor interaction protein,RIPK1/RIPK3）激酶及关键底物——混合谱系激酶结构域样蛋白（mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL）的信号通路,从而触发细胞发生程序性细胞坏死。后者参与多种疾病的病理过程,如肿瘤、免疫炎症、神经退行性疾病、脑缺血损伤等。本文就程序性细胞坏死的信号通路、重要调控分子及在神经损伤相关疾病致病机制进行综述,并对研究方法和分析工具药物进行了归纳总结。     

乌灵胶囊联合电针治疗双相情感障碍维持期失眠的临床疗效

目的 探讨乌灵胶囊联合电针治疗双相情感障碍（bipolar disorder，BD）维持期失眠患者的临床疗效。方法 选取2020年10月至2021年10月于绍兴市第七人民医院医治的94例BD维持期失眠患者，按照就诊顺序以奇偶数法将患者分为对照组和观察组，每组各47例。对照组患者接受电针治疗，观察组患者接受乌灵胶囊联合电针治疗。评价两组患者的临床疗效；比较两组患者治疗前后的睡眠质量、单胺类神经递质及肿瘤坏死因子–α（tumor necrosis factor–α，TNF–α）、白细胞介素（interleukin，IL）–1β、IL–4等水平变化。结果 观察组患者的总有效率显著高于对照组（P<0.05）；治疗2周及4周后，观察组患者的匹兹堡睡眠质量指数、睡眠障碍评定量表评分和5–羟吲哚乙酸水平均显著低于同期对照组（P<0.05），5–羟色胺、β–内啡肽、TNF–α、IL–1β、IL–4水平均显著高于同期对照组（P<0.05）。结论 BD维持期失眠患者接受乌灵胶囊联合电针的疗效确切，睡眠质量得到明显改善，其机制可能与调控单胺类神经递质及TNF–α、IL–1β、IL–4水平有关。     

炎症性肠病中的坏死性凋亡：一个潜在的治疗靶点（英文）

炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)的发病率近年来呈快速上升趋势,目前尚无有效的方法防止其复发。程序性细胞死亡对维持内环境稳态至关重要。坏死性凋亡作为一种新发现的程序性细胞死亡方式,其在IBD中的作用值得探讨。坏死性凋亡由受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)、RIPK3和混合系激酶区域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导,导致细胞肿胀、质膜破裂、细胞内容物流出,继而引起细胞死亡并促进炎症的发生。研究发现IBD患者病变标本的坏死性凋亡水平升高,在IBD动物模型中抑制坏死性凋亡能够减轻炎症程度,表明坏死性凋亡与IBD的发病机制相关。然而,由于细胞坏死性凋亡调控的复杂性及其相关信号分子功能的多样性,其具体机制仍未明确。坏死性凋亡在IBD的发病过程中可能发挥了重要的调控作用,为进一步探究IBD的治疗靶点提供了新的思路和方法。     

新加肾元方调控RIPK1/RIPK3/MLKL通路对高糖诱导的糖尿病肾病肾小球足细胞损伤的影响

目的:探讨新加肾元方对高糖诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠肾小球足细胞损伤及RIPK1/RIPK3/MLKL通路的影响,并分析其可能的作用机制。方法:选取70只SD大鼠,随机取12只为正常对照组,另58只采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ法建立糖尿病肾病大鼠模型成功48只,随机分为模型组,阳性对照组,新加肾元方低、高剂量组,各12只。阳性对照组厄贝沙坦水溶液0.017g/kg灌胃,新加肾元方低、高剂量组0.72g/kg、1.44g/kg灌胃,正常对照组、模型组等体积生理盐水灌胃。检测肾功能：尿素氮、血清肌酐、蛋白尿;HE染色观察肾组织病理形态;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;ELISA检测肾组织TNF-α、IL-6水平;WB检测肾组织RIPK1/RIPK3/MLKL通路相关蛋白表达;对新加肾元方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:模型组大鼠蛋白尿、血清肌酐、尿素氮水平、凋亡指数、TNF-α、IL-6水平、RIPK1、RIPK3、MLK...     

糖尿病大鼠心肌损伤中程序性坏死通路相关蛋白的表达

目的 探讨程序性坏死（Necroptosis）通路相关蛋白在糖尿病心肌中的表达及其可能机制。 方法 在大鼠高糖高脂饮食喂养基础上腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg制备糖尿病模型大鼠,其中正常组（CON组,n=6）、高脂高糖组（HC组,n=6）和糖尿病组（DM组,n=6）;10周后超声检测左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）及左心室射血分数（LVEF）;处死大鼠后测量心质量（HW）、体质量（BW）、心体比（HW/BW）;ELISA法检测血液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）及丙二醇（MDA）水平;心尖部组织行Masson染色;RT-PCR及Western blotting检测心肌组织中RIPK1、RIPK3、MLKL的含量变化。 结果 与CON组比,HC组HW、TNF-α、IL-6、MDA水平增加,RIPK1、RIPK3和MLKL的蛋白表达量增加（P < 0.05~P < 0.01）,但MLKL的mRNA表达量无明显变化（P>0.05）;与HC组比较,DM组HW/BW升高,LVEF下降,TNF-α、IL-6及MDA水平增加,RIPK1、RIPK3、MLKL的mRNA及蛋白含量增加（P < 0.01）,Masson染色蓝染加重。 结论 高糖状态可诱导心肌损伤,增加心肌纤维化及氧化水平,可能与上调Necroptosis通路有关。     

HIPK2在IL-2撤除诱导T细胞凋亡中的作用

目的 研究同源结构域相关的蛋白激酶2（homeodomain-interacting protein kinase 2,HIPK2）在白介素2（interleukin 2,IL-2）撤除诱导的T细胞凋亡中的表达及其作用.方法 IL-2依赖性的T细胞株（CTLL-2）,撤除IL-2后可诱导凋亡.运用PI染色和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,实时定量RT-PCR检测HIPK2及其他细胞凋亡相关基因的表达.通过反义技术下调HIPK2的表达,观察HIPK2在IL-2撤除诱导的T细胞凋亡中的作用.结果 随IL-2撤除时间延长,CTLL-2细胞凋亡率增加,细胞基因组DNA发生了明显片段化.参与死亡受体凋亡途径的基因FasL和Fas表达没有明显改变（P＞0.05）,Bcl-2家族中促凋亡基因Bim表达明显上调（P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-xL表达明显下调（P＜0.05）,HIPK2表达明显上调（P＜0.05）.下调HIPK2的表达可以显著降低CTLL-2在IL-2撤除后的细胞凋亡率（P＜0.01）,促凋亡基因Bim的表达被显著下调（P＜0.01）,而抗凋亡基因Bcl-xL明显上调（P＜0.05）.结论 HIPK2可以促进IL-2撤除诱导的CTLL-2 T细胞凋亡,这种作用可能与HIPK2上调促凋亡基因Bim和下调抗凋亡基因Bcl-xL的表达相关.     

抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究抑制TNFR/RIPK信号通路对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 160只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、Nec 1组,每组又根据时间点分为12h、24h、3d、7d四个亚组。采用动脉夹钳夹法制作ASCI模型,空白对照组不做任何处理,假手术组仅暴露脊髓,不损伤脊髓,模型组和Nec 1组用动脉瘤夹脊髓全横截面1min,缝合伤口。空白对照组、假手术组和模型组注射给予生理盐水,Nec 1组注射坏死性凋亡抑制剂Necrostain 1（Nec 1）溶液1μl/kg,1次/d,分别给药12h、24h、3d、7d。给药后以BBB评分对各组大鼠后肢神经功能恢复情况进行评分,完成评分后,取10只给药7d的大鼠脊髓,进行HE染色、Nissl染色、碘化丙啶（PI）染色、Tunel染色;另取10只给药7d的大鼠,取脊髓,用Western Blot检测RIP1、RIP3、Bcl 2蛋白表达情况。结果 模型组和Nec 1组各时间点的BBB评分均显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）,Nec 1组各时间点的BBB评分显著高于模型组（P＜005）。造模7d后,模型组脊髓出现坏死、空洞现象,大量炎性细胞浸润,坏死区域面积显著高于假手术组（P＜005）;尼氏体呈细颗粒状,神经元数量减少、染色浅、排列无序,坏死性凋亡细胞较多;PI红染细胞、Tunel阳性细胞数、凋亡小体数量,以及RIPK1、RIPK3、Bcl 2蛋白表达水平显著多于假手术组（P＜005）。给予Nec 1治疗7d后,Nec 1组脊髓坏死组织较模型组少,空洞现象得到改善,炎性细胞浸润现象好转,Nec 1组坏死区域面积显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）;尼氏体着色的神经元细胞染色较深,颗粒变粗,存活神经元数量显著高于模型组（P＜005）;PI红染细胞数、凋亡小体数,以及RIPK1、RIPK3蛋白表达水平显著少于模型组（P＜005）,Bcl 2蛋白表达水平显著高于模型组（P＜005）。结论 坏死性凋亡抑制剂Nec 1能通过抑制TNFR/RIPK信号通路,下调RIPK1、RIPK3、上调Bcl 2的表达来缩小ASCI损伤面积,缓解炎症浸润,减少损伤周围神经元数量,改善神经元功能,提高损伤神经元及胶质细胞存活率,改善大鼠BBB评分,抑制坏死性凋亡。     

复方甘草酸苷联合卤米松乳膏治疗 神经性皮炎的疗效

目的 探讨复方甘草酸苷联合卤米松乳膏治疗神经性皮炎患者的临床疗效。方法 选取2019年4月至2020年2月温州市中医院收治的神经性皮炎患者92例为研究对象，根据随机数字表法将其分为观察组和对照组，每组46例。对照组患者在基础治疗上加用卤米松乳膏，观察组患者在对照组基础上加用复方甘草酸苷，观察并记录两组患者的临床疗效、湿疹面积及严重程度指数（eczema area and severity index，EASI）评分、特应性皮炎评分（scoring atopic dermatitis，SCORAD）、肿瘤坏死因子–α（tumor necrosis factor–α，TNF–α）、白细胞介素（interleukin，IL）–6、IL–8、5–羟色胺（5–hydroxytryptamine，5–HT）、铁蛋白（ferritin，Fer）、鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCA）水平及不良反应情况。结果 观察组患者治疗后的总有效率显著高于对照组（P<0.05）；治疗后，两组患者的EASI评分、SCORAD、TNF–α、IL–6、IL–8、5–HT、Fer及SCCA均显著低于本组治疗前（P<0.05），且观察组患者的EASI评分、SCORAD、TNF–α、IL–6、IL–8、5–HT、Fer及SCCA均显著低于对照组（P<0.05）。两组患者的不良反应发生率比较差异无统计学意义（χ2=0.123，P=0.726）。结论 卤米松乳膏联合复方甘草酸苷治疗神经性皮炎可提高患者的临床疗效，减轻瘙痒症状，降低免疫炎性反应，安全性好，具有临床推广意义。     

RIPK1调控LPS诱导的星形胶质细胞神经炎症的作用机制

目的 探究坏死性凋亡抑制剂（necrostatin-1, Nec-1）抑制受体相互作用激酶1(receptor-interacting protein kinase 1, RIPK1)对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的星形胶质细胞神经炎症模型的作用。方法 采用星形胶质细胞（MA细胞）,随机分为4组：Control组、LPS组、Nec-1组及Nec-1+LPS组。使用RIPK1抑制剂Nec-1(50μM预处理30 min,共处理24 h)作为给药手段,使用LPS(0.1μg/mL处理24 h)刺激小鼠星形胶质细胞系（MA细胞）构建神经炎症细胞模型。使用3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide, MTT]检测细胞活力,以确定LPS的安全浓度;利用免疫印迹（western blotting）法检测RIPK1的表达,以确定LPS和Nec-1的最终工作浓度;使用实时荧光定量PCR(realtime quan...     

基于TLR4/NF–κB信号通路探讨防风治疗 溃疡性结肠炎大鼠的机制研究

目的 探讨防风对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子κB（Toll–like receptors 4/nuclear factor kappa–B,TLR4/NF–κB）信号通路及炎症因子的影响。方法 将24只SPF级雄性SD大鼠通过随机数字表法分为正常组、模型组与治疗组,每组各8只;模型组与治疗组大鼠通过5%的2,4,6–三硝基苯磺酸结肠内灌注建立溃疡性结肠炎大鼠模型,正常组大鼠给予等量生理盐水灌肠;造模后治疗组大鼠给予防风水煎液灌胃治疗,模型组及正常组大鼠予等量生理盐水灌胃,连续14d。在造模前及治疗前后观察大鼠一般情况,记录疾病活动指标评分,治疗结束后收集各组大鼠血清、结肠,测量完整结肠长度,结肠组织苏木精–伊红染色,统计病理学评分;酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中炎症因子白细胞介素–6（interleukin–6,IL–6）、白细胞介素–8（interleukin–8,IL–8）、肿瘤坏死因子–α（tumor necrosis factor–α,TNF–α）含量;蛋白质印迹法（Western blotting）检测TLR4、NF–κB蛋白表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠疾病活动指标评分显著升高,结肠显著缩短,病理评分显著提高,炎症因子IL–6、IL–8、TNF–α含量显著升高,TLR4、NF–κB蛋白相对表达水平显著提高,差异均有统计学意义（P<0.01）;经防风治疗后,治疗组大鼠上述情况有所好转,相较于模型组,疾病活动指标评分明显下降,结肠长度明显增长,病理评分显著下降,炎症因子IL–6、IL–8、TNF–α含量明显下降,TLR4、NF–κB蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 防风可通过TLR4/NF–κB信号通路减轻肠道炎症,从而治疗大鼠的溃疡性结肠炎。     

重度子痫前期并发HELLP综合征 炎症指标的变化研究

目的 分析重度子痫前期（severe preeclampsia,SPE）并发溶血肝功能异常血小板减少（hemolysis,elevated liver function and low platelet count,HELLP）综合征炎症指标的变化及危险因素。方法 采用回顾性研究方法,选取2012年1月至2021年12月温州市中西医结合医院收治的SPE患者52例,根据是否并发HELLP综合征将其分为观察组（n=20）和对照组（n=32）。观察组患者并发HELLP综合征,对照组无HELLP综合征。检测两组患者的白细胞计数（white blood cell,WBC）、中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil–to–lymphocyte ratio,NLR）、超敏C反应蛋白（hypersensitive C–reactive protein,hs–CRP）、白细胞介素–6（interleukin–6,IL–6）和肿瘤坏死因子–α（tumor necrosis factor–α,TNF–α）等炎症指标。采用t检验或Mann–Whitney U检验对数据进行比较,SPE并发HELLP综合征的影响因素评价采用多因素Logistic回归分析。结果 观察组患者的WBC、NLR、hs–CRP、IL–6及TNF–α水平均高于对照组[（12.0±3.3）×109/L vs（9.3±2.4）×109/L,t=3.413;（5.43±1.67） vs（4.27±1.27）,t=2.347;31.10（1.13~88.93）mg/L vs 5.38（0.50~17.99）mg/L,Z=–4.806;8.8（3.4~14.5）pg/ml vs 6.6（2.7~10.2）pg/ml,Z=–2.136;8.4（6.0~10.9）pg/ml vs 5.8（2.1~9.7）pg/ml,Z=–4.177],差异均有统计学意义（P<0.05）。观察组患者的IL–4及IL–10水平均低于对照组[（2.41±0.65）pg/ml vs（3.00±0.92）pg/ml,t=–2.505;（2.37±0.63）pg/ml vs（3.24±0.76）pg/ml,t=–4.291],差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析发现,WBC、NLR、hs–CRP、IL–6及TNF–α水平的升高及IL–10水平的降低是SPE并发HELLP综合征的部分危险因素[校正后OR值（95%CI）分别为1.435（1.108~1.859）、1.466（1.034~2.078）、1.283（1.082~1.523）、1.317（1.029~1.686）、2.538（1.420~4.535）和6.663（1.912~23.004）,P均<0.05]。结论 在SPE患者中,WBC、NLR、hs–CRP、IL–6和TNF–α水平的升高及IL–10水平的降低可能是并发HELLP综合征的部分危险因素。     

核受体GCNF对H9C2心肌细胞的影响及作用机制

目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制。方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡水平,实时定量PCR及Western blot技术检测受体结合蛋白激酶2(RIPK2)和受体结合蛋白激酶3(RIPK3)的表达水平。结果:Ad-hGCNF腺病毒感染后,H9C2心肌细胞GCNF表达上调,亚细胞定位位于细胞核,细胞活力降低,凋亡水平显著增加,RIPK2和RIPK3表达水平均升高。结论:感染Ad-hGCNF腺病毒表达载体降低H9C2细胞活力,增加其凋亡水平,机制与RIPK2和RIPK3的表达上调有关。