幼年感染细菌内毒素对成年实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠行为和病理的影响

目的：探讨大鼠幼年时期感染细菌内毒素对其成年后实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）神经功能损伤和中枢神经系统病理学的影响。方法：取同窝SD幼鼠,于出生后第3和第5天2次给予腹腔注射0．01mg·mL^-1脂多糖（LPS）0．05mL或同等剂量无菌生理盐水。成年后（出生后第8周）用豚鼠脊髓匀浆免疫SD大鼠制作EAE模型,观察并比较这两组大鼠行为学与组织病理学变化。结果：与生理盐水对照组相比,LPS处理组SD大鼠EAE发病率明显降低（P〈0．01）,且中枢神经系统内炎症细胞浸润及神经髓鞘脱失也明显减轻（P〈0．01）。结论：幼年时期感染细菌内毒素对成年SD大鼠EAE有明显的保护作用。     

黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的 探讨黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病中的作用。方法 将20只大鼠随机分为正常对照组及EAE组,EAE组采用粗制髓鞘碱性蛋白（MBP）抗原注入大鼠后足掌皮下（0.2 ml/100 g）制作EAE模型,观察大鼠的发病情况及病理表现;并采用免疫组织化学法检测两组大鼠脑组织CD44的含量。结果 正常对照组大鼠未发病,EAE组大鼠均有不同程度的发病。HE染色后,光镜下观察,正常对照组大鼠脑和脊髓无异常;EAE组大鼠可见脑及脊髓实质内小血管充血,小静脉周围有大量炎性细胞浸润,血管周围白质脱髓鞘改变。免疫组化显示,正常对照组大鼠脑和脊髓组织未发现CD44阳性细胞;EAE组大鼠中枢神经系统（CNS）白质及灰白质交界处可见大量CD44阳性细胞。结论 EAE模型中存在黏附分子CD44的高表达,其对EAE的发病可能起到促进作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑组织和脊髓中脑型肌酸激酶、钙泵和钙中性蛋白酶的变化

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型脑组织和脊髓中脑型肌酸激酶（CK-BB）、钙泵（CaATPase）和钙中性蛋白酶（calpain）的变化。方法：C57BL/6小鼠随机分为：EAE组（n=9）,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽（MOG35-55）及完全弗氏佐剂混合抗原乳剂免疫小鼠;对照组（n=5）,注射生理盐水。用MOG35-55诱导C57BL/6小鼠,建立（EAE）动物模型（即多发性硬化模型）。观察记录EAE小鼠行为学变化;采用苏木精-伊红染色、LFB髓鞘染色,酶标仪和分光光度计法检测发病高峰期（免疫后第19天）的中枢神经组织病理学变化、CK-BB,CaATPase和calpain酶活性的改变。结果：EAE组与对照组相比：①日均神经功能评分和日累积评分增加（P〈0.01）;②苏木精-伊红染色：中枢炎症细胞浸润明显（P〈0.05）;③LFB染色：髓鞘脱失较多;④CK-BB和CaATPase活性降低,calpain活性增加（P〈0.05）;⑤EAE组小鼠（只）日均累积神经功能评分与CK-BB和CaATPase活性呈负相关（P〈0.05）;⑥EAE组小鼠（只）日均累积神经功能评分与calpain酶活性呈正相关（P〈0.05）。结论：EAE高峰期中枢CK-BB和CaATPase活性降低、calpain活性增高是EAE发生发展的后果,提示EAE时中枢能量代谢和CaATPase、calpain的病理性损害。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原和分化群3ε的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原(MHC-Ⅱ)和分化群3ε(CD3ε)的变化。方法 25只C57BL/6小鼠随机分为EAE组(n=13)和正常对照组(n=12)。应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55抗原诱导小鼠EAE模型。观察记录小鼠行为学变化;采用常规及髓鞘染色方法观察脊髓损伤和炎症细胞浸润程度;荧光定量PCR检测脑MHC-Ⅱ和CD3εmRNA的表达。结果 EAE组小鼠发病后EAE症状评分逐渐增加;脊髓炎症细胞浸润明显;髓鞘脱失较多;脑组织MHC-Ⅱ和CD3εmRNA表达显著高于正常对照组(均P<0.01),并与EAE症状评分呈正相关。结论 EAE小鼠脑内MHC-Ⅱ及CD3εmRNA表达水平增高与其病情严重程度一致。     

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞活化及氧化应激的影响

目的观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠CNS小胶质细胞活化及氧化应激的影响。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE组和2-BFI干预组,每组9只。采用MOG_(35-55)免疫法制作经典EAE模型。2-BFI干预组小鼠于EAE造模后当日起腹腔注射2-BFI 20 mg/kg,2次/d,连续14 d。正常对照组和EAE组以等量生理盐水代替。每日观察并记录动物的行为学变化、进行神经功能缺损评分。免疫后第20 d处死各组小鼠,采用HE染色和LFB染色观察组织学变化;免疫组化法测定诱导型小鼠CNS中一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白和离子钙接头分子(Iba-1)的表达,比色法检测丙二醛(MDA)的含量;并对活化的小胶质细胞数量和iNOS蛋白表达水平进行线性相关分析。结果正常对照组小鼠未见神经系统受损的表现。与EAE组相比,2-BFI干预组日均神经功能缺损评分明显降低,CNS脊髓炎性细胞浸润明显减少,髓鞘脱失严重程度明显减轻,活化的小胶质细胞数量减少,iNOS蛋白表达明显减少,MDA含量降低(P0.05~0.01)。相关分析结果显示,iNOS表达水平与活化的小胶质细胞数量呈正相关(r=0.596,P0.01)。结论 2-BFI能减轻EAE小鼠临床症状和组织学改变,2-BFI对EAE小鼠的神经保护作用于小胶质细胞激活和减轻氧化应激相关。     

左归丸干预实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠的髓鞘脱失

课题组前期实验发现,左归丸能减轻实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）模型大鼠的炎症反应。本次实验拟从病理学角度进一步观察左归丸对EAE模型大鼠髓鞘脱失的影响。苏木精-伊红染色和Luxol fast blue髓鞘染色显示,左归丸干预EAE大鼠,大脑、小脑、脑干及脊髓纵切标本髓鞘病变灶数量减少,血清髓鞘碱性蛋白含量降低。     

左旋咪唑诱导大鼠急性EAE外周血CD4+/CD8+和IL-6的检测及意义

目的 探讨急性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周血CD4 /CD8 及IL-6的改变及意义.方法 采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂注射并加用左旋咪唑诱发大鼠EAE模型,分别注射生理盐水/福氏佐剂、左旋咪唑作为对照,注射后16d采用Loyez氏髓鞘染色观察大鼠脊髓髓鞘改变、流式细胞仪检测外周血CD4 /CD8 比值和采用ELISA法检测IL-6水平,并与对照组比较.结果 模型组发病率87.5%,正常组、NS/CFA组和LMS对照组未见异常.模型组髓鞘染色见髓鞘结构疏松、部分髓鞘脱失;外周血CD4 /CD8 比值为2.33±1.04,及IL-6为194.92±56.85,较其余各组明显增高(P＜0.01,P＜0.01).结论 外周血CD4 /CD8 比值及IL-6水平增高在大鼠EAE的发生过程中发挥重要作用.     

黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的探讨黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法将20只大鼠随机分为正常对照组及EAE组,EAE组采用粗制髓鞘碱性蛋白(MBP)抗原注入大鼠后足掌皮下(0. 2 ml/100 g)制作EAE模型,观察大鼠的发病情况及病理表现;并采用免疫组织化学法检测两组大鼠脑组织CD44的含量。结果正常对照组大鼠未发病,EAE组大鼠均有不同程度的发病。HE染色后,光镜下观察,正常对照组大鼠脑和脊髓无异常; EAE组大鼠可见脑及脊髓实质内小血管充血,小静脉周围有大量炎性细胞浸润,血管周围白质脱髓鞘改变。免疫组化显示,正常对照组大鼠脑和脊髓组织未发现CD44阳性细胞; EAE组大鼠中枢神经系统(CNS)白质及灰白质交界处可见大量CD44阳性细胞。结论 EAE模型中存在黏附分子CD44的高表达,其对EAE的发病可能起到促进作用。     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠行为和MMP-9表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠中枢神经系统(CNS)中MMP-9表达的影响。方法:建立雌性EAE大鼠模型,将大鼠随机分为4组:治疗组(EAE Tri组);阳性对照组(EAE NS组);正常对照组(CFA Tri组、CFA NS组),观察Tri对EAE大鼠发病情况的影响,并通过免疫组化法观察Tri对EAE大鼠CNS中MMP-9表达的影响。结果:与EAE NS组比较,EAE Tri组的发病率明显降低,临床评分的平均值和最高值均降低,大鼠脑脊髓白质内炎性细胞浸润和病灶数比EAE NS组明显减少。免疫组化:EAE Tri组大鼠CNS中的MMP-9表达比EAE NS组明显减低。正常对照组大鼠均未发病,CNS中也无炎性细胞浸润及MMP-9表达。结论:Tri能抑制EAE大鼠CNS中MMP-9的表达,减轻EAE大鼠临床症状、降低发病率。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障通透性与紧密连接蛋白-5的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠血脑屏障(BBB)通透性与紧密连接蛋白-5(claudin-5)表达的变化。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为EAE组和正常对照组,应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55诱导制作小鼠EAE模型,每日进行神经功能缺损评分。采用苏木精-伊红、髓鞘染色和免疫组化法观察炎症细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损坏程度。伊文思蓝染色和Western blot法观察BBB通透性和claudin-5表达的变化。结果与正常对照组比较,EAE组小鼠神经功能缺损评分、炎症细胞浸润、髓鞘脱失、轴索损坏和BBB通透性均明显增加;而claudin-5表达显著降低(均P0.01)。BBB通透性的变化与平均神经功能缺损评分、炎症细胞浸润和轴索损坏均呈正相关(P0.01);而与claudin-5表达水平呈负相关(P0.05)。结论 EAE发病过程中claudin-5表达减少,可能导致BBB通透性增加,使外周大量的炎症反应细胞向中枢迁移,继而进一步加重中枢的炎症反应。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalo-myelitis,EAE)模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-l,sVCAM-1)在EAE大鼠中的动态表达。方法:将豚鼠麻醉后,不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接取新鲜豚鼠全脊髓制备匀浆(Guinea Pig Spinal Cord Homoge-nate,GPSCH)为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型。观察其体重及神经功能评分的变化;取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果:Wist-ar大鼠在免疫后10天出现明显的神经系统体征,发病率达100%;脑脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润;sV-CAM-1的表达与对照组比较有显著性升高(P<0.01)。结论:采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的发病机制及治疗奠定了一定的基础。     

甲基泼尼松龙对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脑组织 Nogo-A 及其受体 NgR 蛋白表达的影响

目的 探讨甲基泼尼松龙(MP)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织Nogo-A及其受体(NgR)蛋白表达的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(50只).实验组大鼠通过皮下注射粗制髓磷脂碱性蛋白建立EAE模型,24只造模成功大鼠随机分为EAE组、大剂量MP(MP-H)组和小...     

阿托伐他汀对EAE大鼠脊髓ICAM-1和TGF-β1表达的影响

目的 探讨阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响. 方法 80只清洁级健康雌性Wistar大鼠按照随机数字表法分为4组:正常对照组、EAE模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组,每组20只.各组再分为第14天、21天两个亚组,每个亚组10只.利用新鲜豚鼠全脊髓匀浆及完全福氏佐剂免疫Wistar大鼠建立EAE模型.低、高剂量治疗组大鼠分别给予2 mg/(kg·d)、10 mg/(kg·d)阿托伐他汀灌胃,正常对照组及EAE模型组应用生理盐水灌胃.观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分,采用HE染色方法观察病理改变,免疫组化方法检测ICAM-1及TGF-β1的表达. 结果 与EAE模型组及低剂量治疗组比较,阿托伐他汀高剂量治疗组发病率明显减轻,炎性病灶明显减少,组织中ICAM-1表达明显减少,TGF-β1表达明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 阿托伐他汀可改善EAE大鼠的临床症状及病理改变,并且与剂量有关,其作用推测与减少ICAM-1表达、提高TGF-β1表达有关.     

Nogo-A and Nogo-A receptor expression in periventricular white matter of experimental autoimmune encephalomyelitis rats

BACKGROUND:Previous studies have focused on the correlation between Nogo-A expression and multiple sclerosis or between Nogo-A receptor (NgR) expression and multiple sclerosis in the central nervous system. Expression patterns of Nogo-A and NgR remain poorly understood in rat models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).OBJECTIVE:To observe dynamic changes in Nogo-A and NgR protein expression, and to verify the correlation between Nogo-A and NgR protein, as well as expression patterns at various time points, in periventricular tissue of EAE rats.DESIGN, TIME AND SETrlNG:A neuroimmunological, randomized, controlled experiment was performed at the Clinical Institute of Hunan People's Hospital of China from September to November 2008.MATERIALS:Immunohistochemistry (streptavidin-biotin-peroxidase complex method) kit was purchased from Boster, China.METHODS:A total of 60 female, Wistar rats, aged 6-8 weeks, ware randomly assigned to EAE and control groups (n = 30, respectively). Guinea pig spinal cord homogenate, self-made complete Freund's adjuvant (0.2 mL/100 g), and pertussis vaccine (0.2 mL) were subcutaneously injected into the hindlimb foot pad of rats from the EAE group to create rat models of EAE. Complete Freund's adjuvant (0.2 mL) was infused into rats from the control group.MAIN OUTCOME MEASURES:Nogo-A and NgR protein expression was determined in periventricular white matter using immunohistochemical methods. Neurological scores ware determined in all rats.RESULTS:Rats from the EAE group developed acute-onset EAE following immunization. The pathogenetic symptoms reached a peak on day 15, and neurological scores ware also greatest at this time point. Neurological scores decreased with recovery of the illness. Nogo-A was shown to be expressed in neuronal cells and oligodendrocytes, and expression increased 11 days after immunization (P < 0.01), decreased by day 13 (P < 0.01), and then increased again by day 15. Nogo-A expression remained greater in the EAE group compared with the control group at day 30 (P < 0.01). In the EAE group, NgR protein was primarily expressed on the surface of neuronal bodies and axons. NgR expression increased 13-18 days after immunization (P < 0.01 or P < 0.05).CONCLUSION:Nogo-A and NgR protein expression altered with disease course in periventdcular white matter of EAE rats. Results suggested that Nogo-A and NgR were involved in EAE occurrence.     

牛脊髓髓鞘碱性蛋白的提取及初步鉴定

目的探索一条从牛脊髓中提取牛髓鞘碱性蛋白(M BP)的行之有效的方法,为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型的建立及研究工作奠定基础。方法组织匀浆器将新鲜的牛脊髓捣碎,用London法抽提,考马司亮蓝法鉴定粗提品的含量,SDS-PAGE观测其分子量,M BP免疫W istar大鼠,以鉴定其抗原性。结果粗提品蛋白含量达10m g/m l,粗提品诱导EAE症状典型,发病率高。结论采用London法可从牛脊髓中获取大量的M BP,与其它方法比较产量高,诱导EAE效果好,且本法简便,所以有一定的推广价值。     

复发缓解型EAE大鼠长期、自然病程的视神经病理改变

目的建立小剂量复合抗原成分诱导的EAE长病程动物模型,通过多种方法观察EAE大鼠的视神经病理改变。方法雌性Wistar大鼠72只,6~8周龄,体重180~200g,其中12只为对照组,余60只诱导EAE模型,进行EAE动物的神经功能评分(按照Kono五级评分法[1]进行),观察大鼠每次发病时的病情、病程变化。于第一次发病后第7d和半年时行眼底照相检查,并取视神经行HE染色光镜观察和透射电镜观察其病理改变。结果 EAE组大鼠视神经光镜主要表现为有不同程度的炎症反应;电镜主要表现为髓鞘稀疏,其髓鞘板层松解,轴突萎缩、变性,结构模糊不清。EAE组第一次发病后第7d及半年时眼底照相提示视乳头萎缩,边界不清楚。半年时视乳头萎缩更明显。结论 EAE大鼠存在明显的视神经病变,主要表现为视神经炎症反应、脱髓鞘改变和轴索损伤。     

不同剂量甲泼尼龙治疗实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的疗效及其与大鼠脊髓糖皮质激素受体亚型表达的关系

目的探讨不同剂量甲泼尼龙(MP)治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效及其与大鼠脊髓糖皮质激素受体(GR)亚型表达的关系。方法健康雌性Wistar大鼠28只,随机分为大剂量MP治疗组(8只)、小剂量MP治疗组(8只)、EAE模型组(7只)和正常对照组(5只)。大、小剂量MP治疗组及EAE模型组接种豚鼠全脊髓制成的抗原乳剂,制作EAE模型。免疫接种后每日对大鼠进行神经功能缺损评分。接种后第12 d,大、小剂量MP治疗组分别予以MP 100 mg/(kg.d)或25 mg/(kg.d)尾静脉注射,连续3d后减半量再给药2 d;EAE模型组及正常对照组大鼠予等容量生理盐水。给药结束后次日,采用免疫组化法检测大鼠脊髓组织GRα及GRβ的表达。结果两MP治疗组大鼠治疗后的神经功能缺损评分比治疗前明显降低(均P<0.01);并且明显低于EAE模型组(均P<0.001),但两组间差异无统计学意义。大、小剂量MP治疗组大鼠脊髓组织GRα表达均明显低于EAE模型组与正常对照组(P<0.05～0.01);各组大鼠脊髓组织GRβ表达的差异无统计学意义。相关性分析显示,EAE大鼠治疗前后神经功能缺损评分的差值与脊髓组织GRα、GRβ的表达不相关,与GRα/GRβ比值呈正相关(r=0.550,P=0.027)。结论 MP治疗EAE大鼠的疗效与剂量无关,而与脊髓组织GRα/GRβ比值有关。     

辛伐他汀抑制大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的 探讨辛伐他汀(STATINS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎IEAE)的作用及机理.方法 Wistar大鼠55只采用随机数字表法分为EAE组(15只)、STATINS组(15只)、雷公藤(TP)组(15只)、正常对照组(10只).使用STATINS干预EAE大鼠,以TP为阳性对照,观察大鼠P53蛋白、IL-6、TNF-α、TGF-β的表达变化.结果 与EAE组相比,STATINS组发病率降低、临床症状减轻、体质量下降减少、病灶数减少、潜伏期延长,而TP组临床症状减轻、病灶数减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),TP组体质量变化、潜伏期、发病率无显变化,差异无统计学意义(P＞0.05);STATINS组IL-6和TNF-α的表达降低,P53蛋白和TGF-β的表达增高;TP组仅TNF-α的表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与TP组相比较,STATINS组P53蛋白与TGF-β的表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05),而TNF-α及Ⅱ-6的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 STATINS可以有效抑制EAE.其可能的机制是抑制IL-6和TNF-α等促炎症因子的表达,促进P53蛋白与TGF-β的表达,效果可能优于TP.     

木犀草素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠SPH/SPHK1/S1P1通路及神经元凋亡的影响

目的 探讨木犀草素(Luteolin)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune en-cephalomyelitis,EAE)大鼠神经酰胺-鞘氨醇(Sphingosine,SPH)/鞘氨醇激酶1(Sphingosine kinase 1,SPHK1)/1-磷酸鞘氨醇受体1(Sphing...     

粘附分子在实验性变态反应性脑脊髓炎发生中的作用

目的 探讨粘附分子ＣＤ１１ａ，ＣＤ５４，ＣＤ６２在实验性变态反应性脑脊髓炎（ＥＡＥ）发生中的作用。方法 采用Ｗｉｓｔａｒ大鼠建立了ＥＡＥ动物模型，应用免疫荧光法检测下沉大鼠及ＥＡＥ动物周围血和脑组织中Ｔ细胞亚群及ＣＤ１１ａ，ＣＤ５４，ＣＤ６２的表达，结果 发病大鼠脑组织局灶周围大量淋巴细胞浸润，主要为ＣＤ４Ｔ细胞，发病大鼠周围血淋巴细胞上及大鼠脑组织粘附分子的表达明显升高，结论 粘附分子ＣＤ１１ａ