猪囊尾蚴乳酸脱氢酶和酯酶的初步分析

本文应用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳方法对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊乳酸脱氢酶(LDH)和酯酶(EST)的同功酶进行了分离和比较。囊液LDH显示五条酶带,囊壁四条酶带,全囊六条酶带,它们之间酶带的数目不同,位置有的相同,有的不同。特有的LDH0.096,为头节囊壁及全囊提取物中所无,对其可能的来源进行了分析。的样品EST同功酶均显示一条酶带,其位置的差异并不显著。     

泡球蚴组织及囊液同工酶初步分析

应用 PAGE 法对多房棘球绦虫的泡球蚴囊液、全囊、原头蚴及囊壁组织的乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST)和酸性磷酸酶(AP)的同工酶进行了分析.结果 LDH 同工酶仅囊液与全囊各出现4条酶带.EST 同工酶全囊、囊液、原头蚴和囊壁分别出现14、17、3和13条酶带;而 AP 同工酶4种样品的酶带则分别是2、4、1和1条.3种同工酶的酶带数均以囊液样本为多且染色深,提示囊液可能是泡球蚴物质代谢的一个重要场所.     

人体与猪体内囊尾蚴蛋白质和同工酶的初步研究

报道人体与猪体内囊尾蚴的蛋白质组分及酯酶同工酶(EST)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)的带谱。人和猪脑囊尾蚴液的蛋白质PAGE区带各见10和9条,猪囊尾蚴仅有1条主带,而入囊尾蚴具有2条主带;头节囊壁蛋白质PAGE区带各见18和16条,二者带谱基本相似。肌肉皮下囊尾蚴囊液蛋白质区带各有12条,猪囊尾蚴有4条带,人囊尾蚴仅有2条主带,且迁移率也有明显差别。人体和猪体内囊尾蚴囊液的LDH酶带各有4条,其迁移率略有差异;EST各见1条酶带,酶谱基本一致。肌肉皮下囊尾蚴头节囊壁LDH各见2条,EST则见3条,其迁移率也有不同。同时将两种同工酶的活性作了比较。     

泡球蚴组织及囊液可溶性蛋白质组分和抗原初步分析

应用SDS-PAGE分析了泡球蚴囊液及全囊、原头蚴和囊壁组织可溶性蛋白质,结果分别出现23、26、16、25条蛋白带,其中主带分别为4、7、5、7条。用斑点ELISA显示,4种抗原的敏感性分别为67%、67%、100%、67%,特异性分别为90%、89%、83.5%、91%。     

泡球蚴组织及囊液可溶性蛋白质组分和抗原初步分析

应用 SDS-PAGE 分析了泡球蚴囊液及全囊、原头蚴和囊壁组织可溶性蛋白质,结果分别出现23、26、16、25条蛋白带,其中主带分别为4、7、5、7条。用斑点 ELISA 显示,4种抗原的敏感性分别为67%、67%、100%、67%,特异性分别为90%、89%、83.5%、91%。     

抗脑囊虫头节和囊壁鸡卵黄抗体的制备

鸡卵黄免疫球蛋白IgY(Yolk Immunoglobulin)是近几年研究的热点,本文把IgY用于对脑囊虫抗体的制备,为囊虫抗体的获取开辟了新思路.自新鲜病猪肉中摘取猪囊尾蚴,用TBS缓冲液浸洗并吸干水分.然后将头节和囊壁剥离,经离心及饱和硫酸铵溶液处理制成抗原.用分光光度法测定蛋白含量.将抗原与福氏完全佐剂混合制成乳浊液,免疫34周龄美国海兰特产蛋母鸡40只,分为2组,每组20只.分别进行头节和囊壁抗原的免疫,每只鸡以1ml抗原于左右背部和胸部多点注射.     

小鼠黑色素瘤凝集的分离纯化

目的：制备并纯化小鼠黑色素凝集素（MMA）。方法：利用亲合层析及凝胶过滤层桥从小鼠B16黑色素瘤中分高纯化小鼠黑色素瘤凝集素（MMA）。结果：利用亲和层材制备的凝集素,经SDS-PAGE显示出一条分子量12．4kD的主要蛋白带和两个分子量为35kD和67kD的痕迹蛋白带;经凝胶过滤层析则出现分子量为26kD主峰及分子量为35kD和67kD的两个小峰。26kD的蛋白成分经SDS－PAGE和等电聚焦电泳显示出一条均一的蛋白带。26kD的蛋白成分特异性识别会多聚乙酰氢基乳精的糖链,活性依赖于巯基而非钙离子。结论：26kD的成分为MMA,利用经亲和层析和凝胶过滤层析等可得到成分均一的MMA,MMA为S型凝集素。     

约氏疟原虫卵囊黑化期间大劣按蚊血淋巴蛋白的分析

目的　初步探讨大劣按蚊 (Anophelesdirus)黑化包被约氏疟原虫 (Plasmodiumyoelii)卵囊相关蛋白。方法　挤压法分别收集血餐后第 1、3、4、5天时不吸血组、吸正常血组和感染组的雌大劣按蚊血淋巴 ,经SDS PAGE分离后 ,银染显色。同时 ,用烟草天蛾 (ManducaSexta)前酚氧化酶 (Prophenoloxidase ,PPO)亚基 1IgG检测正常雌大劣按蚊血淋巴中的PPO。结果　SDS PAGE发现感染约氏疟原虫后 ,部分大劣按蚊的血淋巴蛋白带增强 ,而部分血淋巴蛋白带却减弱 ,免疫印迹发现大劣按蚊血淋巴PPO有 87× 10 3 、6 7× 10 3 、6 3× 10 53条蛋白带 ,而相应分子量的 3条蛋白带在约氏疟原虫感染后第 4、5天开始增强 ,其中尤以 87× 10 3 的增强最为明显。结论　大劣按蚊在对约氏疟原虫卵囊黑化包被期间诱导合成的某些血淋巴蛋白与前酚氧化酶级联反应主要成分有关联     

小鼠黑色素瘤凝集的分离纯化

目的：制备并纯化小鼠黑色素凝集素（ＭＭＡ）。方法：利用亲合层析及凝胶过滤层析从小鼠Ｂ１６黑色瘤中分离纯化小鼠黑色素瘤凝集素（ＭＭＡ）。结果：利用亲和层析制备的凝集素,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示出一条分子量１２．４kＤ的主要蛋白带和两个小峰。２６kＤ主峰及分子量为３５kＤ和６７kＤ的痕迹蛋白带;经凝胶过滤层析则出现分子量为条均一的蛋白带。２６kＤ的蛋白成分特异性识别含多聚乙酰氨基乳糖的糖链,活性依赖于巯基而     

聚焦层析分离人肝精氨酸酶同工酶组分

用聚焦层析结合DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,从正常人肝浸液中分离得两个精氨酸酶同工酶组分.经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定从聚焦层析得到的第一峰同工酶组分为一条蛋白带,第二峰具有精氨酸酶活性的蛋白组分的主要蛋白带也极明显。各蛋白质成分向阴极电泳的前后顺序与从聚焦层析洗脱的先后次序一致。两型同工酶的比活力分别约为2050U/mg及790U/mg。用SDS-PAGE检测两型同工酶均由两种亚基组成,且分子量近似。     

猪带绦虫不同发育阶段的同功酶及蛋白质组分的比较研究

本文报告猪带绦虫虫卵、囊尾蚴头节囊壁混合物、囊液、成虫未熟和成熟节片混合物及妊娠节片等不同发育阶段的酯酶同功酶和乳酸脱氢酶与蛋白质组分的带谱。结果表明,酯酶同功酶带以虫卵阶段最多,共四条酶带;乳酸脱氢酶同功酶带以囊尾蚴头节和囊壁混合物、囊液及成虫节片阶段为最多,各为四条酶带,且各有一条主带。蛋白质组分以虫卵阶段为最复杂,至少有19条区带。经 PAS 染色后,除囊液富含糖蛋白外,其余各发育阶段均未出现糖蛋白区带;同时将各不同发育阶段两种同功酶的活性作了比较。     

猪蛔虫与人蛔虫体壁蛋白组分可溶性抗原及同功酶的电泳分析

报告猪蛔虫与人蛔虫体壁蛋白组分,可溶性抗原及乳酸脱氢酶和脂酶同功酶的电泳分析结果。猪蛔虫体壁有3条(PAGE)、18条(SDS-PAGE)和10条(IEF)考马斯亮蓝染色带;人蛔虫体壁相应有11、15、8条染色带,两者的等电点范围为pH3.5～6.4。猪蛔虫体壁至少含9种抗原;人蛔虫体壁至少含7种相关抗原,两种蛔虫体壁脂酶电泳结果表明在酶带的数目及相对迁移率方面均有差异,而两种蛔虫乳酸脱氢酶的电泳结果则无明显差异。     

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究,根据聚丙烯酰胺胶电泳（ＰＡＧＥ）谱带的位置和数目进行品种鉴别;用改进的十二烷酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定其主要蛋白质成分分子量;用等电聚焦电泳（ＩＦＥ）测定其主要蛋白质成分的等电点（ＰＩ）。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。     

大鼠足阳明胃经循经部位发现特异蛋白电泳条带的实验研究

目的:通过蛋白质凝胶电泳技术,寻找大鼠循经部位与非循经部位蛋白质条带的差异,证实循经部位是否存在特异蛋白.方法:在大鼠足阳明胃经循经部位与非循经部位选取皮下结缔组织,提取蛋白质制备电泳样品,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察二者蛋白电泳条带差异.结果:在电泳图谱中可观察到大鼠循经部位存在特异蛋白电泳条带(非循经部位不存在).结论:初步证明大鼠足阳明胃经循经部位存在特异蛋白质.     

Identification of the major allergen of Macrobrachium rosenbergii (giant freshwater prawn)

Objective

To characterize the major allergens of Macrobrachium rosenbergii (giant freshwater prawn).

Methods

Raw and cooked extracts of the giant freshwater prawn were prepared. The IgE reactivity pattern was identified by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting technique with the sera of 20 skin prick test (SPT) positive patients. The major allergen identified was then characterized using the proteomics approach involving a combination of two-dimensional (2-DE) electrophoresis, mass spectrometry and bioinformatics tools.

Results

SDS-PAGE of the raw extract showed 23 protein bands (15–250 kDa) but those ranging from 40 to 100 kDa were not found in the cooked extract. From immunoblotting experiments, raw and cooked extracts demonstrated 11 and 5 IgE-binding proteins, respectively, with a molecular mass ranging from 15 to 155 kDa. A heat-resistant 36 kDa protein was identified as the major allergen of both extracts. In addition, a 42 kDa heat-sensitive protein was shown to be a major allergen of the raw extract. The 2-DE gel fractionated the prawn proteins to more than 50 different protein spots. Of these, 10 spots showed specific IgE reactivity with patients'' sera. Matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight (MALDI-TOF) analysis led to identification of 2 important allergens, tropomyosin and arginine kinase.

Conclusions

It can be concluded that the availability of such allergens would help in component-based diagnosis and therapy of prawn allergies.     

双向电泳分析失神经支配大鼠腓肠肌蛋白的表达变化

目的:建立骨骼肌蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找失神经支配骨骼肌与正常骨骼肌蛋白的表达差异。方法:建立失神经腓肠肌模型,提取腓肠肌总蛋白,进行第一向等电聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分离总蛋白,使用PDQuest软件对凝胶图像进行分析,并测量了凝胶蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差。结果:失神经组和正常组腓肠肌组织3块凝胶的平均蛋白质点数分别为560±16和545±13,平均匹配点数分别为471±19和447±17,匹配率达84.1%和82.1%。对比分析了两种腓肠肌组织的双向电泳图谱发现,平均匹配点数为445±8;发现在失神经支配后有80个点发生了明显而稳定的质和量(大于10倍或小于0.1倍)的改变。不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(1.203±0.763)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.062±0.529)mm。结论:失神经组和正常组腓肠肌的双向电泳图谱存在明显差异,失神经后表达下调的蛋白可能与维持肌肉正常功能相关,而表达上调的蛋白则可能与肌萎缩的发生过程相关。     

应用盘状电泳和等电聚焦对三种革螨的酯酶同工酶与蛋白质的研究

本文应用盘状电泳和薄层等电聚焦技术对三种革螨——茅舍血厉螨、兵广厉螨和羽腹巨螯螨,作了酯酶同工酶和蛋白质的生化分析,进行了比较研究。结果表明,它们各自的酯酶同工酶酶带和蛋白电泳带都有明显的差别。盘状电泳酯酶同工酶的酶带,茅舍血厉螨有3条,兵广厉螨有4条,羽腹巨螯螨为2条,同时测定了三者酶带的Rf值和相对活性;用等电聚焦电泳分析酯酶同工酶,上述三种螨分别显示11、9、7条亚带,并测定了各亚带的等电点。蛋白质盘状电泳,茅舍血厉螨蛋白带为12条,兵广厉螨为5条,羽腹巨螫螨为5条;在等电聚焦电脉时,上述三种螨分别为24、9、22条蛋白带。     

双向电泳技术分析大鼠快慢肌蛋白的表达差异

目的：建立骨骼肌蛋白分离的双向电泳（2-DE）技术体系，分析趾长伸肌与比目鱼肌中快慢肌蛋白的表达。方法：提取大鼠趾长伸肌和比目鱼肌的总蛋白，定量，然后进行第一向等电聚焦0EF）和第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术分离总蛋白，GS-800获得凝胶图像，并测量不同凝胶间蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差，使用PDQuest7．3软件对凝胶图像进行分析，找出趾长伸肌与比目鱼肌蛋白表达的差异。结果：在趾长伸肌和比目鱼肌组织的蛋白表达谱上，分别检测到680±19和660±27个蛋白点，平均匹配点数为590±13和580±17，匹配率达86．7％和87．8％，不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为（0．51±0．48）mm，在SDS-PAGE方向上的偏差为（0．53±0．42）mm，对比分析趾长伸肌和比目鱼肌组织的2-DE图谱，发现有27个点存在明显的表达差异，在比目鱼肌中高表达的点有12个，在趾长伸肌中高表达的点有15个。结论：建立了骨骼肌蛋白分离的双向电泳技术体系，发现成年大鼠趾长伸肌和比目鱼肌的双向电泳图谱相似，但是有部分蛋白质点存在表达差异．这些差异表达的蛋白，可能与快慢肌本身的生理特性相关。