慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

目的　探讨白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法　采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L- CFU)抑制作用有显著差异 (P<0 .0 1) ,而相同条件下 ,GM- CFU及 L- CFU的集落存活率分别为 2 6 .91%和 3.49% (P<0 .0 1)。结论　联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化 CML 骨髓     

慢性粒细胞白血症骨髓的体外净化

目的：探讨白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法：采用体外克隆形成培养技术，分别用白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸不同的组合方案，进行体外净化5例慢性粒细胞白血病（CML）骨髓，结果：联用IL－2，IFN－α2α（各800um/ml),bcl-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，对白血病细胞克隆形成单位（L－CFU）抑制作用有显著差异（P＜0．01），而相同条件下，GM－CFU及L－CFU的集落存活率 分别为26．91％和3．49％（P＜0．01），结论：联用IL－2，IFN－α2α（各800g/ml),bcr-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好，可用于临床净化CML骨髓。     

慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

OBJECTIVE: To investigate the effect of IL-2, IFN and bcr-abl AS-ODN on bone marrow purging in vitro for patients with chronic myelogenous leukemia (CML). METHODS: By amplifying in vitro clone forming culture, and purging the bone marrow of 5 CML patients through different combined use of IL-2, IFN and bcr-abl AS-ODN, we compared the effects of 4 combined regimens. RESULTS: It was found that the suppressive effects of the 4th regimen combining IL-2 (800 U/ml), IFN (800 u/ml) and bcr-abl AS-ODN (30 micrograms/ml) on leukemia cell clone forming unit (CFU) were significantly different from the suppressive effects of the other 3 regimens (P < 0.01). With the use of the 4th regimen, the GM-CFU and L-CFU survival rates were 26.91% and 3.49% respectively (P < 0.01). CONCLUSION: The combined regimen of IL-2 (800 U/ml), IFN (800 u/ml) and bcr-abl AS-ODN (30 micrograms/ml) has good effect on selective CML bone marrow purging in vitro and can be used in clinical purging of CML bone marrow.     

长期骨髓培养、白细胞介素2、干扰素α2a体外净化慢性粒细胞白血病骨髓的研究

用长期骨髓培养（ＬＴＢＭＣ）和白细胞介素２（ＩＬ－２,１０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）骨髓进行体外净化培养２周。结果发现：①单用ＬＴＢＭＣ体系其净化效果差;②加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ＇（＋）细胞有明显的杀伤作用（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;③ＩＦＮ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ＇（＋）细胞生长而不影响ＣＭＬ和正常的ＣＦＵ－ＧＭ;④ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ三者净化ＣＭＬ骨髓具有协同作用。结果提示：ＬＴＢＭＣ、ＩＬ－２、ＩＦＮ－α２ａ联合净化效果好,可用于临床净化ＣＭＬ骨髓     

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）刺激自体骨髓T细胞,清除白血病细胞的作用。方法 采用3例CML病人（2例慢性期和1例急变期）外周血,分离单个核细胞（PBMNC）,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素4（rhIL－4)、重组人粒－单集落刺激因子（rhGM－CSF）和重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）的RPMI－1640培养液。37℃CO2孵箱培养10天,或用免疫磁珠从PBMNC分离DC,在含自体血浆、rhGMCSF和rhTNFα的RPMI1640培养液培养3天,收获的细胞即DC加到含rhIL－2的Dexter骨髓长期培养体系,置37℃,5％CO2孵箱培养7天,观察前后骨髓细胞的免疫表型和P210阳性细胞比例。结果 从CML病人外周血获得的DC大多数表达P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210。在含rhIL－2的Dexter体系加入DC能进一步增加体系中的T细胞数。在2例慢性期病人体系中的P210阳性细胞减少,但在急性期病例,体系中P210细胞明显增加。结论 CML病人的DC表达P210,能刺激自体骨髓中T细胞增生,在慢性期病人,这些自体DC活化的骨髓T细胞有清除白血病细胞的作用。     

白细胞介素—2,γ干扰素净化模拟白血病缓解期骨髓及用PCR检 …

探讨白细胞介素２（ＩＬ－２）、γ－干扰素用于自体骨髓中残留白血病细胞的净化及用聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测净化效果。方法：将ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ与模拟慢性粒细胞白血病缓解解的骨髓在培养体系中分别培养１－６ｄ,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法来检测缓解期骨髓中ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ消失情况。     

白细胞介素-2、γ干扰素净化模拟白血病缓解期骨髓及用PCR检测净化效果

目的:探讨白细胞介素 2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)用于自体骨髓中残留白血病细胞的净化及用聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测净化效果.方法:将IL-2、IFN-γ与模拟慢性粒细胞白血病(CML)缓解期的骨髓在培养体系中分别培养 1～6d,通过RT-PCR方法来检测缓解期骨髓中bcr/abl mRNA消失情况.结果:模拟缓解期CML骨髓经与IL-2、IFN-γ 24h、48h和 72h培养后用RT-PCR方法仍可检测到bcr/abl mRNA,而经 6d培养后则已测不到.若将IL-2、IFN-γ合用,经 24和 48h培养的骨髓可检测到bcr/abl mRNA,但经 72h和 6d培养后便检测不到,而对照组在 1～6d培养后仍可检测到该基因.结论:初步实验结果表明IL-2、IFN-γ对缓解期骨髓中的K562白血病细胞系具有净化作用,若两者合用具有协同作用,RT-PCR可作为评估净化效果较为敏感和较为可靠的检测方法.     

长期骨髓培养,白细胞介素2,干扰素α2a体外净化慢性粒细？…

用长期骨髓培养的白细胞介素２（ＩＬ－２,０００Ｕ／ｍｌ）,干扰素α２ａ（ＩＦＮ－α２ａ,１０００Ｕ／ｍｌ）不同的组合方案,对１０例慢性粒细胞白血病骨髓进行体外净休培养２周,结果发现：（１）单用ＬＴＢＭＣ体系其次化效果差;（２）加入ＩＬ－２后,对ＣＭＬ的ＣＦＵ－ＧＭ以及ｐｈ’（＋）细胞有明显的杀伤作用,对正常的ＣＦＵ－ＧＭ则无影响;（３０ＩＦＵ－α２ａ在ＬＴＢＭＣ体系中抑制ｐｈ‘（＋）细胞生长而影响     

慢性粒细胞白血病骨髓组织学变异的探讨

本文报道16例慢性粒细胞白血病(CGL)骨髓活检组织学变异的结果,其中CGL慢性期初治6例,复治4例;CGL急变4例和完全缓解2例。各期骨髓组织学变化与细胞成分和造血细胞过度增生有关。急变期可出现骨小梁紊乱、水肿和坏死等。骨髓细胞学检查2例完全缓解,骨髓组织学检查仅1例完全缓解。纤维组织增生在各期均可发生,完全缓解时似可恢复正常,增生是病情进展和预后不良的指征。     

慢性粒细胞白血病合并骨髓坏死1例报告

慢性粒细胞白血病合并骨髓坏死的临床报告较少 ,本院于2 0 0 0年 5月曾见到 1例 ,现报告如下。患者女性 ,5 2岁。 4年前确诊为慢性粒细胞白血病慢性期 ,费城 (PH)染色体阳性 ,bcr/ abl基因阳性。 4年来 ,用羟基脲及干扰素治疗。 2 0 0 0年 2月骨髓常规显示仍处于慢性粒细胞白血病慢性期。患者 2 0 0 0年 4月份以来反复感冒 ,5月份开始头昏、乏力 ,持续高热 ,腰部及髂骨疼痛 ,血常规示 :白细胞 15 .3×10 9/ L,中幼粒细胞 4% ,晚幼粒 2 % ,中性粒细胞 72 % ,淋巴细胞 17% ,单核细胞 5 % ,血红蛋白 5 6 g/ L,血小板 77× 10 9/ L,于5月 12日…     

慢性髓性白血病骨髓细胞体外培养净化的实验研究

目的 :探讨慢性髓性白血病 (CML)骨髓细胞体外培养对自体骨髓移植物的净化作用。方法 :分离 10例初诊的慢性期Ph+ CML患者骨髓单个核细胞 (MNC) ,体外培养 10天 ,利用染色体分析法检测培养前后Ph+ 中期细胞比例 ;通过流式细胞术检测培养前后MNC中CD+ 3 4干 /祖细胞比例。结果 :培养后Ph+ 中期细胞比例下降明显 (5 7%±6 92 % )vs(88.2 %± 7.97% ) ,P <0 .0 5 ;培养体系MNC中CD+ 3 4干 /祖细胞数量减少无显著性 (2 .78± 1.6 7)× 10 5 vs(3 2 7± 2 .2 5 )× 10 5 ,P >0 .0 5。结论 :CML骨髓细胞经体外培养 ,Ph+ 细胞比例下降 ,而CD+ 3 4干 /祖细胞数量无明显变化 ,提示该法对CML骨髓细胞具有一定程度净化作用。     

人骨髓基质细胞的分离、培养及成骨鉴定

目的建立一种体外分离培养人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCells ,hBMSCs)的方法。方法 :从髂棘 (髂前或髂后 )抽取骨髓液 5～ 8ml,经密度离心后的骨髓单核细胞 ,以 10 6/ml浓度接种培养 ,贴壁细胞接近长满后 ,进行传代培养 ,每传一代约 5～ 7d。培养期间进行碱性磷酸酶的检测和钙染色。结果 :原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的细胞。两种细胞在体外可向成骨方向转化。结论 :人骨髓基质细胞在体外长期培养后仍具有成骨能力 ,为骨髓中间充质干细胞 ,掌握其培养方法为其广泛应用奠定基础。     

异种骨髓移植中移植物抗宿主病的实验研究

目的 :探讨克服异种骨髓移植间强烈的移植物抗宿主病的方法。方法 :实验分两步 :第一步 ,SD大鼠亚致死剂量 5 .5Gy全身照射后 ,4h内经尾静脉输入正常BALB/c小鼠骨髓细胞 8× 10 7。 2d后予腹腔注射Cy15 0mg/kg。诱导形成嵌合体大鼠 ,使其对BALB/c小鼠产生特异性免疫耐受。第二步 ,BALB/c小鼠接受致死剂量 9.0Gy全身照射 ,随机三分组。照射后 4h内经尾静脉注射骨髓进行移植。A组输注正常SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7;B组输注正常SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7和脾细胞 2× 10 7;C组输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7和脾细胞 2× 10 7;比较GVHD发生情况。结果 :A组有 2只小鼠死于感染和放射损伤 ,所有对象均未观察到明显GVHD表现。B组平均存活时间为 (9.0± 1.3)d ,且死前均出现不同程度的典型GVHD表现 ,如皮毛脏乱、消瘦、弓背体位、腹泻 ,甚至血便等 ;肝实质内有灶性淋巴细胞及多形细胞浸润 ,并可见局灶性坏死 ;肠绒毛部分或大部分脱落 ,粘膜坏死、有大量炎性细胞浸润 ,符合GVHD病理改变。而C组除 2只小鼠分别于 18d、31d死亡外 ,余均存活超过 6 0d ,与B组有显著差异 ,且死亡率最低。结论 :有受者嵌合体的供者 ,在进行异种骨髓移植后有助于克服异种移植物抗宿主病。     

不同血液疾病骨髓中环状核粒细胞的观察

本文对７２例不同血液疾病和２６例感染性疾病骨髓中环状核粒细胞进行观察，结果表明慢粒２１例中出现环状核粒细胞２０例，环状核粒细胞比值ｘ０．８０±０．５２。而其它疾病骨髓中环状核粒细胞及其比值均明显低于慢粒组，提示环状核粒细胞的检查对于慢粒和其它骨髓增生性疾病的区别，从形态学上提供辅助指标。     

自体骨膜细胞及红骨髓经皮注射修复骨缺损的实验研究

目的 :探讨自体骨膜细胞和红骨髓 (RBM )混合物修复骨缺损的能力。方法 :在 36只家兔双侧桡骨中段制备骨缺损模型 (造模同时取骨膜细胞培养、传代 ) ,分为四组 :自体骨膜细胞与红骨髓混合植入组 (A1组 :18侧 )、自体红骨髓植入组 (A2组 :18侧 )、自体骨膜细胞植入组 (B1组 :18侧 )、空白对照组 (B2组 :18侧 )。在 2 ,4 ,8,12周分别进行X线检查、病理组织学检查、12周时进行生物力学测试。结果 :A1组 8周时骨缺损基本修复 ,12周时己完全修复 ,A2 ,B1组的骨缺损在 12周时基本修复 ;生物力学测试术后 12周时的最大扭距和抗扭刚度为 :A1>B1>A2。结论 :自体骨膜细胞和红骨髓混合经皮注射到骨缺损内有较强的成骨能力 ,骨缺损修复快、质量好。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞的体外诱导分化

目的：探索肝细胞生长因子（HGF）、酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）、制瘤素M（OSM）诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）为肝细胞的能力及效果。方法：采用红细胞裂解＋贴壁法分离纯化大鼠骨髓MSCs,取第4代MSCs,按如下分组诱导其向肝细胞分化：①MSCs组（空白对照）：不加细胞因子;②H＋a组：20μg/LHGF＋20μg/LaFGF;③H＋O组：20μg/LHGF＋20μg/LOSM;④a＋O组：20μg/LaFGF＋20μg/LOSM;⑤H＋a＋O组：20μg/LHGF＋20μg/LaFGF＋20μg/LOSM;⑥H＋a＋O（分）组：20μg/LHGF（1～9d）＋20μg/LaFGF（9～18d）＋20μg/LOSM（9～21d）。于不同时间点采用RT-PCR检测甲胎蛋白（AFP）和细胞角蛋白18（CK18）的表达,溴甲酚绿法检测其中白蛋白（ALB）的含量,谷氨酸脱氢酶法检测其中尿素（Urea）含量。结果：除对照组外,其余各组在7～14d可见AFP mRNA的表达,21d仅a＋O组表达阳性。除对照组及a＋O组外,其余各组均出现CK18 mRNA、ALB及Urea,在同一时间点,H＋a＋O组表达量高于其余各组（P〈0.05）。结论：HGF联合aFGF/OSM能够成功诱导MSCs分化为肝细胞;aFGF与OSM不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化,但与HGF联合使用能明显提高分化率。     

骨髓基质干细胞接种于纤维蛋白凝胶的体外培养

目的：研究经分离培养的免音舱基质子细胞(MSC)接种在可吸收性纤维蛋白凝胶上向成分细胞分化，表型维持的影响。方法：取兔骨髓基质子细胞于含100nl/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并向成管细胞诱导。将细胞与纤维蛋白凝胶复合，通过扫描电镜观察细胞附着情况，共聚焦显微镜观察I型胶原的分泌，组织化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)阳性细胞，ALP含量测定。结果：骨髓基质子细胞在可吸收性纤维蛋白凝胶表面附着良好并继续增殖，可分泌I型胶原，这些细胞的ALP染色呈强阳性，细胞碱性磷酸酶含量增高。结论：具有良好的可塑性、低抗原性、好的降解吸收性的纤维蛋白凝胶具有促进骨髓基质细胞表达成管细胞表型、合成细胞外基质的功能，是良好的细胞载体。     

经颈内动脉骨髓干细胞移植治疗脑梗死后遗症

目的:探讨骨髓干细胞移植治疗脑梗死后遗症的临床疗效与可行性。方法:病人9例,平均60.5岁。脑梗死发生后2wk～22mo。50岁以下取自体骨髓血120～150mL,50岁以上(含50岁),取胎儿脐带血约80mL。实验室即刻分离,分离后的骨髓干细胞(混于10mL生理盐水中)。经股动脉穿刺,以Seldinger氏方法,送入5.0F猎人头导管,导管尖端置于颈内动脉处缓慢注入。结果:移植术后2wk～3mo观察。肢体运动,痛温感觉语言功能。明显改善6例,改善2例,无变化1例。总有效率89%。结论:经颈内动脉骨髓干细胞移植治疗脑梗死后遗症方法近期有效,安全性目前可靠。     

嗅鞘细胞和骨髓基质细胞的联合培养研究

目的探讨体外联合培养嗅鞘细胞(OECs)和骨髓基质细胞(BMSCs)的可行性及形态学观察。方法将原代培养的OECs和BMSCs消化制成细胞悬液,以相同比例接种,接种密度为104/ml。10 d后将联合培养的细胞置于倒置相差显微镜下进行形态学观察,并于鉴定前2 d加入细胞掺入剂BrdU,应用P75抗体和BrdU抗体对联合培养的细胞进行免疫荧光鉴定。结果联合培养的细胞在24 h内均完全贴壁,培养5 d后镜下可见细胞形态主要有3种:①双极、三极或多极形;②短梭形,突起较短;③扁圆形或不规则形。到第10天时部分细胞相互编织成网,部分细胞生长呈条索状,相互平行。荧光鉴定显示:荧光双标阳性者(既发红色荧光又发绿色荧光)为OECs,只发红色荧光而不发绿色荧光者为BMSCs。结论OECs与BMSCs在体外可以很好的联合培养,生物学特性均保持不变,为体内联合移植奠定了基础。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞

目的：研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用。方法：用HGF、aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT—PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况。结果：除对照组外其余各组细胞均有AFP表达（P〈0．05）;对照组及a＋O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达（P〈0．05）。结论：HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化。