胎盘组织中解脲脲原体感染的检测与分型

应用扩增解脲脲原体ＭＢ抗原基因的ＰＣＲ方法与培养法对照检测了３２例新鲜胎盘组织,结果ＰＣＲ扩增阳性８例,其中属于生物Ⅰ型Ｕｕ５例,生物Ⅱ型３例,ＰＣＲ扩增阳性的新生儿出生时体重平均比扩增阴性的新生儿低０．６２ｋｇ,且以感染ＵｊⅠ型更为显,培养法检出Ｕｕ阳性５例。结果提示胎盘组织中Ｕｕ检出率,ＰＣＲ法显高于培养法,感染胎盘的Ｕｕ可引起新生儿体重降低,可能与Ｕｕ生物Ⅰ型有关。     

解脲脲原体的分群和分型研究

目的建立解脲脲原体的分子生物学分群及分型方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对１４个血清型的解脲脲原体标准株进行检测和分群，并对２７２例泌尿生殖道临床标本进行了检测和分群。采用随机扩增多态性脱氧核糖核酸方法对解脲脲原体１、３、６、１４、８、１０及１１型标准株进行了分析和比较。结果经ＰＣＲ检测，第一群解脲脲原体的扩增片段长度为４０３ｂｐ，第二群解脲脲原体的扩增片段长度为４４８ｂｐ；２７２例泌尿生殖道临床标本，解脲脲原体阳性７２例，其中第一群阳性６９例，第二群阳性３例。构建了１、３、６、１４、８、１０及１１型解脲脲原体的基因指纹图谱。结论本研究建立了用ＰＣＲ对解脲脲原体进行分群的方法；泌尿生殖道临床标本解脲脲原体阳性者以第一群常见，随机扩增多态性脱氧核糖核酸方法可用于解脲脲原体分型。     

PCR法检测泌尿道感染患者沙眼衣原体与解脲脲原体的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，对门诊的５２８例初诊为泌尿道感染患者进行了沙眼衣原体（Ｃｔ）与解脲脲原体（Ｕｕ）检测。结果显示：１７９例为淋球菌阳性，其中ＰＣＲ检测Ｃｔ阳性７１例，阳性率为３９．７％，Ｕｕ阳性７７例，阳性率为４３．０％；在３９４例非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）中，Ｕｕ阳性率为５３．３％（１８６／３４９），Ｃｔ阳性率为２７．２％（９５／３４９）。本研究表明应用ＰＣＲ检测Ｃｔ与Ｕｕ具有敏感性高、     

PCR法检测泌尿道感染患者沙眼衣原体与解脲脲原体的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，对门诊的５２８例初诊为泌尿道感染患者进行了沙眼衣原体（Ｃｔ）与解脲脲原体（Ｕｕ）检测。结果显示：１７９例为淋球菌阳性，其中ＰＣＲ检测Ｃｔ阳性７１例，阳性率为３９．７％，Ｕｕ阳性７７例，阳性率为４３．０％；在３９４例非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）中，Ｕｕ阳性率为５３．３％（１８６／３４９），Ｃｔ阳性率为２７．２％（９５／３４９）。本研究表明应用ＰＣＲ检测Ｃｔ与Ｕｕ具有敏感性高、特异性强等优点，能为临床泌尿道感染病因学诊断与治疗提供定性依据     

胎盘组织中解脲脲原体感染的检测与分型

应用扩增解脲脲原体（Ｕｕ）ＭＢ抗原基因的ＰＣＲ方法与培养法对照检测了３２例新鲜胎盘组织,结果ＰＣＲ扩增阳性８例,其中属于生物Ⅰ型Ｕｕ５例,生物Ⅱ型３例,ＰＣＲ扩增阳性的新生儿出生时体重平均比扩增阴性的新生儿低０６２ｋｇ,且以感染Ｕｕ生物Ⅰ型者更为显著,培养法检出Ｕｕ阳性５例。结果提示胎盘组织中Ｕｕ检出率,ＰＣＲ法显著高于培养法,感染胎盘的Ｕｕ可引起新生儿体重降低,可能与Ｕｕ生物Ⅰ型有关。     

不育症妇女宫颈沙眼衣原体和解脲脲原体检测及其治疗

用细胞培养法、ＰＣＲ和ＩＦＡ检测１４５例不育症育龄妇女及４５例正常育龄妇女宫颈拭子沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲脲原体（Ｕｕ），并以强力霉素和四环素治疗阳性病例。结果示，用细胞培养，ＰＣＲ，培养片ＩＦＡ及直接涂片ＩＦＡ检测不育症组宫颈ＣＴ，检出率分别为６２．７％，６６．８％，６４．８％和３６．５％，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；Ｕｕ分离率为３３．１％；ＣＴ与Ｕｕ合并感染率为１８．６％，两者均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。表明宫颈ＣＴ和Ｕｕ感染是引起女性不育的重要因素。强力霉素、四环素治疗效果并不理想     

不育症妇女宫颈沙眼衣原体和解脲脲原体检测及其治疗

用细胞培养法、ＰＣＲ和ＩＦＡ检测１４５例不育症育龄妇女及４５例正常育龄妇女宫颈拭子沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲脲原体，并以强力霉素和四环素治疗阳性病例。结果示，用细胞培养，ＰＣＲ、培养片ＩＦＡ及直接涂片ＩＦＡ检测不育症组宫颈ＣＴ，检出率分别为６２．７％、６６．８％、６４．８％和３６．５％，明显高于对照组（Ｐ〈０．０１），Ｕｕ分离率为３３．１％，ＣＴ与Ｕｕ合并感染率为１８．６％，两者均明显高于对照组（Ｐ     

解脲脲原体检测之培养法与PCR法对比研究

应用ＰＣＲ法和培养法对１６０例泌尿生殖道感染患者的标本进行了解脲脲原体（ＵＵ）检测。结果 两种方法的总符合率为９１．２％，经卡方检验，两者的差异无统计学意义。若以培养法为标准，ＰＣＲ法的敏感性和特异性分别为８５．２％，９５．０％，提示培养法仍应是临床首选诊断方法。     

PCR和培养法检测泌尿生殖道解脲支原体比较

目的 对聚合酶链反应（ＰＣＲ）和培养法检测泌尿生殖道解脲支原体（Ｕｕ）进行比较。方法 用上述二种方法同时检测１１６例患者的泌尿生殖道拭子。结果 ＰＣＲ检测阳性４６例,培养阳性４５例,培养阳性的４５例中ＰＣＲ阳性４２例。若以培养法为对照,ＰＣＲ敏感性为９３．３％,特异性为９４．４％。ＰＣＲ和增减法检测Ｕｕ的阳性率无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论 ＰＣＲ检测泌尿生殖道解脲支原体,敏感性高,特异性强,与     

解脲脲原体感染与不育关系的研究

目的 探讨男、女不育与解脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ Ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ，ＵＵ）感染的关系，进一步研究ＵＵ感染致男性不育的机制。方法 应用分离培养法对３３６对夫妇（７７２例）不育患者（不育组）及１２４例正常生育者（对照组）进行生殖道解脲脲原体（ＵＵ）检测，并对不育组男性精液进行常规分析。结果 不育组和对照组ＵＵ检出率分别为５８．８％、１２．１％，不育组ＵＵ检出率照明高于对照组（Ｐ〈０．０１）     

骨关节炎关节软骨中软骨细胞线粒体DNA缺失突变的分析

目的：分析骨关节炎病人关节软骨组织中软骨细胞线粒体DNA序列变化,探讨骨关节炎发病的潜在病理机制。方法：应用gap—PCR扩增方法检测10例骨关节炎病人和3例正常关节软骨中软骨细胞线粒体DNA的4977bp缺失突变。采用2轮PCR扩增,第1轮PCR反应以骨关节炎病人的关节软骨中软骨细胞线粒体DNA为模板;第2轮PCR扩增反应以第1轮PCR扩增反应的产物为模板,再次进行扩增。结果：第1轮PCR反应结果显示,mtDNA524bp扩增产物呈阴性,而533bp扩增产物均呈阳性;第2轮PCR扩增反应结果显示,10例骨关节炎病人病例标本中有2例出现524bp区带,而533bp扩增产物均呈阳性。两次扩增,正常关节软骨中软骨细胞和外周血对照524bp扩增产物全部为阴性。结论：骨关节炎病人关节软骨组织中软骨细胞线粒体DNA有8470～13447nt之间4977bp大片段缺失,提示骨关节炎的发病与关节软骨中软骨细胞线粒体DNA的突变关系密切。     

Establishment of a multiplex PCR system to diagnose tuberculosis and other bacterial infections

BactirialinfectiousdiseasesareverycommoninchildrenofChina.Manysevereinfectionssuchaspu-rulentmeningitis,tuberculousmeningitisandsepsisstillthreatenchildren'shealthandeventheirlives.Bacterialcultureisaclassicmethedtodetectthepathogensofinfectiousdiseases,butithastotakeseveraldaysforgeneralbacteriaandeven4to8weeksfortuberclebacillus(Tb).ltcouldbringsomeperplexitiesfordoctorstodeterminetheeffectivetherapy.So,arapid,specificandsensitivemethodisrequiredfordiagnoslngbacterialinfections,speciallydif…     

东方田鼠特异DNA片段的克隆及核苷酸序列分析

根据泰泽氏菌rDNA序列设计出二对特异引物，以标准菌RJ株和大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌纯化的DNA为模板，进行套式PCR反应。结果用外引物扩增，泰泽氏菌和大肠杆菌均出现625bp的反应带，其它细菌无反应带；而用内引物第二次扩增，只有泰泽氏菌出现196bp的特异扩增带，将PCR方法应用于人工免疫抑制的SD大鼠，检出率为30％（9／30）。同时将此30份血清用间接免疫荧光法（IFA）进行检测，结果未检出阳性样品。结果提示，套式PCR方法具有特异性强、敏感性高，简便快速的特点。     

犬细小病毒核酸诊断方法的建立和应用

目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法（PCR方法）并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物，以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板，犬细小病毒扩增出221bp的特异带，将PCR产物连接到pMD18-T Vecter，转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较，与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测，并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100％，粪便检测均无犬细小病毒的特异带，从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带，经测序比较，同源率为100％。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法，并能应用于临床诊断。     

基因扩增法检测军团杆菌DNA的研究

采用聚合酶链式反应建立检测军团菌 DNA 的实验诊断方法。结果显示,采用军团菌属5 SrRNA 编码区特异性引物进行扩增,11种军团菌(包括八种嗜肺军团菌)均可见104bp 的阳性扩增带;采用嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(mip)基因编码区特异性引物扩增,所有八种嗜肺军团菌均可见650 bp 的特异性扩增带,所有三种非嗜肺军团菌扩增结果为阴性。检测敏感性为60 fg 左右。     

弓形虫529 bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建

目的：构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法：以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定。以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA。结果：PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致。以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段。结论：成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

空肠弯曲菌套式PCR快速检测方法的建立与初步应用

目的建立套式PCR快速检测实验动物空肠弯曲菌的方法。方法根据GenBank数据库的空肠弯曲菌flaA基因设计2对引物，对空肠弯曲菌抽提DNA作PCR扩增及克隆测序。同时，对其他病原菌抽提核酸扩增，并对120份临床样品进行检测。结果空肠弯曲菌经2对引物分别扩增出1719bp和640bp片段，与预期大小一致。套式PCR检测的最低限度为10CFU。整个检测过程可在8h内完成。而其他病原菌未出现特异性扩增条带。采用套式PCR对121份临床样品进行检测，检出31份阳性，与传统的细菌分离方法完全一致。结论本研究建立的套式PCR方法具有很好的特异性和敏感性，可用于实验动物空肠弯曲菌的快速检测。     

巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿ZFY基因的研究

目的：建立一种无创伤性产前基因诊断的方法。方法：自行建立巢式PCR方法对46例10～40孕周的初孕妇血浆中游离胎儿Y染色体ZFY基因进行扩增，扩增片段分别为354bp和307bp，46例均采用母体血浆直接作为模板进行巢式PCR。结果：39例妊娠男性胎儿孕妇血浆中有32例出现ZFY基因条带，检出率为82．1％(32／39)，其中24例2次扩增均为阳性，8例第2次扩增才出现阳性条带，巢式PCR可明显提高检测敏感性(从61．5％提高到82．1％)。7例妊娠女性胎儿孕妇血浆2次均未出现阳性扩增带，无假阳性结果。本研究的性别总符合率为84．8％(39／46)。结论：巢式聚合酶链反应检测母体血浆中游离胎儿DNA的敏感性和特异性较高，有希望成为无创伤性产前基因诊断方法应用于临床。     

应用引物延伸预扩增反应技术检测孕妇血浆中的胎儿DNA

目的：建立一种检测孕妇血浆中胎儿DNA的新方法。方法;对65例5－41孕周的孕妇血浆中胎儿DNA采用引物延伸预扩增（PEP）后行特异性位点聚合酶链反应（PCR）扩增,并用探针微孔板杂交法检测PCR产物。扩增的基因为Y染色体短臂SRY基因,扩增片段的大小分别为351bp和254bp。结果：46例妊娠男性胎儿的孕妇中41例血浆中出现SRY基因扩增带,检出率89．13％;19例妊娠女性胎儿的孕妇中3例（15．79％）为假阳性。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为100％、90．91％、75％,总符合率86．15％。结论：利用PEP法能解决孕妇外周血中胎儿细胞数量太少达不到常规扩增条件所要求的最低模板量的问题,同时配合探针微孔板杂交法能使诊断结果更准确。     

肺炎衣原体的体外传代培养

目的探讨肺炎农原体（Chlamydia pneumoniae,Cpn）在体外连续扩增的方法。方法通过Cpn感染HEp-2细胞，采用高低速反复离心纯化的方法。并经Giemsa染色及DNA聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测肺炎农原体的DNA。结果cpn感染HEp-2细胞可见包涵体形成，Cpn连续传三代后，应用Cpn特异性基因片段进行检测扩增，结果均可见437bp特异性扩增阳性带。结论Cpn能有效地在体外连续扩增。