SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂),对广州地区1 060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果1 060例非SARS患儿血清样本,间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论非SARS患儿体内并未存在SARS病毒相关抗体。     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(sARS)患者感染的Vero细胞,为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料.方法标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞,对培养液负染色标本和Vero细胞超薄切片标本进行TEM观察.结果在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒,病毒颗粒为圆形或椭圆形,外周有冠状排列的纤突,病毒颗粒直径约80～160 nm,纤突长度约20～40 nm.感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中,主要在内质网和空泡内,可见群集的大小较一致的病毒颗粒.结论本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARS冠状病毒(SARS-CoV)相符.     

SARS患者血清冠状病毒抗体检测

目的探讨SARS患者血清冠状病毒抗体产生情况.方法采用ELISA方法,对42例临床诊断SARS患者、47例普通肺炎患者和30例正常人进行血清冠状病毒抗体(IgG,IgM)检测.结果42例临床诊断为SARS患者,36例可在10 d左右检测到IgM抗体,阳性率为85.7%,IgG抗体阳性33例,阳性率为78.6%.47例临床诊断为普通肺炎的患者,IgM阳性2例,阳性率为4.26%,IgG阳性4例,阳性率为8.51%.30例正常人体检者没有出现IgM或IgG阳性.结论SARS冠状病毒抗体检测对临床早期诊断有一定的帮助.     

SARS基因研究进展

为了应对严重急性呼吸综合征(SARS)全球流行的严峻形势，世界卫生组织(WHO)组织了多个国家的临床工作、流行病学专家和实验室研究人员进行广泛的协作。这种国际协作显示出了强大的威力，在2003年3月，美国、加拿大、德国和我国香港特别行政区的实验室均报道从SARS患分离出了一种新的冠状病毒，     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的 探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂)，对广州地区l060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果 1060例非SARS患儿血清样本，间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论 非SAILS患儿体内并未存在SAILS病毒相关抗体。     

SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确.将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coli M15诱导表达His-S1m蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2.Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型.经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应.结论: 成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础.     

WHO宣布新冠状病毒是SARS的直接致病原

世界卫生组织(WHO)2003年4自16日在瑞士日内瓦宣布,一种从未在人体内发现的新冠状病毒是严重急性呼吸综合征(SARS)的致病原。该病原体之所以能够如此迅速地发现应归功于来自全球10个不同国家的13家实验室的通力合作。众多证据表明,该病毒与目前所流行的SARS有密切关系,因而最终将其确定为导致SARS的病原体。 WHO传染病项目执行主任David Heymann博士强调指出,SARS研究的进展速度是惊人的,来自世界各国的实验室之间的深入台作使人们迅速确定是何种病原体导致了SARS。对冠状病毒的成功认定使得科学家们能够满怀信心地深入到SARS研究的其他方面。比如,许多实验室已开始揭示SARS病毒     

SARS患者血清中SARS相关冠状病毒抗体产生规律的初步分析

目的 :了解严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中 SARS病毒特异性 Ig M、Ig G抗体产生的规律。方法 :随机选取32例 SARS患者 5 5份血清标本 ,应用 EL ISA分别检测抗 SARS病毒 Ig M、Ig G抗体。结果 :Ig M抗体阳性率为 5 6 .4 % ,平均出现时间为 (5 .88± 2 .6 2 ) d,其中 2例患者在发病后第 2天即出现阳性 ,平均消失时间为 (14 .2 5± 2 .97) d;Ig G抗体阳性率为4 1.9% ,平均出现时间为 (11.4 0± 4 .2 0 ) d,其中 2例患者在发病后第 3天即为阳性 ;Ig M和 Ig G抗体的总体阳性漏检率为6 .2 5 %。结论 :SARS患者于发病后 3～ 7d血清中出现特异的 Ig M抗体 ,可用于实验室诊断 ;同时进行 Ig M和 Ig G抗体的检测可用于发病 8～ 14 d左右的实验室排查检测     

Establishment of a fluorescent polymerase chain reaction method for the detection of the SARS-associated coronavirus and its clinical application

Objective To establish a fluorescent polymerase chain reaction (F-PCR) method for detecting the coronavirus related to severe acute respiratory syndrome (SARS) and to evaluate its value for clinical application.Methods The primers and the fluorescence-labeled probe were designed and synthesized according to the published sequence of the SARS-associated coronavirus genes.A F-PCR diagnosis kit for detecting the coronavirus was developed, and 115 clinical nasopharyngeal gargling liquid samples were tested.Results The sequence of PCR amplified products completely matched the related sequence of the SARS-associated coronavirus genome. Forty-nine out of 67 samples from identified SARS patients and 8 of 18 samples from persons having close contact with SARS patients showed positive results.All 30 samples from healthy controls were negative.Conclusion The F-PCR method established may be a rapid, accurate and efficient way for screening and for the early diagnosis of SARS patients.     

SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆

目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论N蛋白基因的扩增、克隆成功,为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。     

蝙蝠相关的冠状病毒

2019年12月,新型冠状病毒肺炎（COVID-19）暴发,继2003年严重急性呼吸综合征（SARS）暴发后又给人类敲响了一记警钟。研究者通过溯源分析,发现COVID-19病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的自然宿主可能是中华菊头蝠。21世纪以来,全球共出现4次冠状病毒[严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）、中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）、猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）、SARS-CoV-2]的暴发,给人类健康、公共卫生、经济发展及社会稳定造成了巨大的威胁与损失。大量证据表明,这4种冠状病毒的自然宿主可能均为蝙蝠。本文对蝙蝠相关冠状病毒的种类、全球地理分布及引起暴发的蝙蝠相关冠状病毒作一综述。     

传染性非典型肺炎的临床诊断和治疗

目的 :探讨传染性非典型肺炎 (SARS)的临床诊断和治疗 ,以提高对本病的治愈率和降低死亡率。方法 :根据诊断SARS的临床实践和体会 ,参考相关资料 ,综合评价本病的早期诊断和治疗。结果 :SARS由冠状病毒引起 ,患者主要有发热 (体温常 >38 0℃ )、畏寒、头痛、干咳、胸闷气短、呼吸困难等临床症状 ,肺部体征不明显或仅有少量湿性音 ;外周血白细胞正常或降低 ,或伴血小板降低 ;胸部X线或CT检查可见多叶或双侧肺异常阴影 ;单纯用抗生素治疗无效。早期应用糖皮质激素、利巴韦林、氧疗、无创机械通气、对症支持、中医中药及抗生素等综合治疗措施治疗 ,效果令人满意。结论 :SARS由冠状病毒引起 ,诊断主要依据流行病学和临床综合资料 ,积极有效的内科综合治疗可提高SARS治愈率、降低其病死率。     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的 用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染的Vero细胞，为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞．对培养液负染色标本和vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。结果 在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒．病毒颗粒为圆形或椭圆形，外周有冠状排列的纤突，病毒颗粒直径约80～160nm，纤突长度约20～40nm、感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中，主要在内质网和空泡内，可见群集的大小较一致的病毒颗粒。结论 本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARs冠状病毒(SARS—CoV)相符。     

128例SARS病例的临床特点

目的探讨SARS的临床特征。方法对广州市某SARS定点医院128例SARS住院病例的性别、年龄分布、接触史、症状、体征、实验室检查、影像学特点、并发症、治疗与预后等进行系统分析。结果本组患者平均年龄37.6±14.5岁,男性54例,女性74例,69例(53.9%)有SARS病人接触史,3例有明确的野生动物接触史;入院前平均病程为5.79±5.56d;入院时主要症状为发热(123例,96.1%)、咳嗽(74例,57.8%)、全身酸痛(26例,20.3%)、呼吸困难(12例,9.4%)和腹泻(10例,7.8%)等;实验室检查见白细胞计数低下(35例,27.3%)、肝功能ALT异常升高(35例,27.3%)、心肌酶CK异常升高(26例,20.3%)和肾功能Cr异常升高(3例,2.3%)。胸片显示89.1%(114例)的病例在入院时可发现肺部病灶,X线主要表现为渗出性病变,显示为淡薄云雾状或片状的浸润阴影,平均累积肺叶数为2.12±1.27;31.3%(40例)出现并发症;经过系统治疗,63.3%(81例)的病例在住院后10d内病灶已开始吸收。平均住院天数为20.73±11.68d。119例(93%)康复出院,9例死亡,病死率7%;22.7%(29例)出院时胸片仍显示存在纤维化病灶。结论SARS的临床特点主要表现为发热、咳嗽、全身酸痛、白细胞计数偏低、易累及心、肝、肾等脏器,胸片主要为片絮状阴影,经治疗多数病例预后良好,但要注意肺部的残留纤维化。     

重症SARS的临床治疗及疗效分析

目的：探讨SARS的临床特征及治疗方法。方法：对54例重症SARS患进行回顾性分析。结果：54例患均有高热、进行性呼吸困难和肺部阴影。大多数患ALT、AST及LDH升高。肺部和免疫系统是病毒主要作用的靶器官。治疗以综合支持对症为主，及时应用无创正压通气和大剂量糖皮质激素治疗有较好疗效。结论：综合支持治疗对降低重症SARS的病死率有重要意义。     

61例严重急性呼吸综合征临床分析

回顾性分析确诊的 61例严重急性呼吸综合征 (SARS)患者。发现 :发病 2周为疾病的高峰期。有明确SARS接触史者 47人 ( 77.1 % )。 5 6例 ( 91 .8% )静点甲泼尼龙 ,5 4例 ( 88.5 % )使用利巴韦林治疗。用药后血红蛋白降低幅度达 2 0 g/L者占 44.4% ( 2 4/ 5 4) ,心动过速者占 40 .4% ( 2 3 / 5 7)。 6例死亡患者中 5例为老年人 ,均合并严重的基础病变 ,另 1位患者在住院期间自杀。所有患者在出现症状后 ( 8.6± 5 .9)d( 1～ 2 4d)胸片显示异常 ,胸片浸润性病灶完全吸收的平均时间为 ( 1 7.1± 6.2 )d( 5～ 3 5d)。提示 :对SARS患者 ,早期、持续一定时间的中等剂量的激素是必要的 ;治疗过程中应该重视大量激素和大量利巴韦林带来的不良反应。