人DNA甲基化转移酶3B1真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建人DNA甲基化转移酶3B1(DNMT3B1)真核表达载体pCMV-DNMT3B1.方法:根据Genebank中人DNMT3B1 cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT 3B1,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中.结果:PCR扩增得到人DNMT3B1的cDNA片段大小为2.6 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到真核表达载体pCMV-DNMT3B1.结论:成功构建了人DNMT3B1真核表达载体,为进一步研究DNMT3B1提供了条件.     

脑多形性胶质母细胞瘤1例

脑多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)临床常见,而本例为不典型的病例.1 病例资料患者,女,74岁,右利手,退休医生.因“突发左侧肢体乏力4h余”于2011年5月15日上午9时入院.患者既往有高血压病病史,曾有上消化道出血、十二指肠球部溃疡等病史,近期无急性发作,但一直未服用抗血小板聚集药物,否认其他特殊病史.     

DNA甲基化转移酶在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌中DNA甲基化转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)表达的临床意义与预后的相关性.方法 运用TCGA和GEO数据库分析DNA甲基化转移酶在胃癌和正常组织中的表达差异;运用生存期分析软件Kaplan-Meier plotter分析DNA甲基化转移酶对胃癌患者预后的影响;下载TCGA和GEO数据库中...     

DNA甲基化转移酶3B基因和多巴胺D1受体基因交互作用与精神分裂症的关系

目的 探讨DNA甲基化转移酶3B(DNMT3B)基因与多巴胺D1受体(DRD1)基因交互作用对精神分裂症患病风险的影响.方法 选取DNMT3B基因2个标签SNP(rs2424908和rs6119954)以及DRD1基因5个标签SNP(rs4532、rs5326、rs2168631、rs6882300和rs267418),采用TaqMan探针SNP基因分型技术对365例精神分裂症患者和365名健康对照者进行检测,使用多因子降维法软件(MDR)分析基因-基因交互作用.结果 DNMT3B基因rs6119954位点基因型分布在患者组与对照组之间差异有统计学意义(χ2=8.06,P=0.018);MDR分析结果显示DNMT3B与DRD1基因相互作用存在于两位点模型(rs6119954-rs267418)(OR=1.79,95%CI:1.29～2.47;χ2=12.51,P=0.0004),三位点模型(rs6119954-rs5326-rs267418)(OR=2.36,95%CI:1.73～3.22;χ2=29.33,P＜0.0001)以及四位点模型(rs2424908-rs6119954-rs5326-rs267418)(OR=3.08,95% CI:2.24～4.24;χ2=48.88,P＜0.0001).结论 DNMT3B与DRD1基因存在交互作用,并可能增加精神分裂症的发病风险.     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异（P〈0.05）。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。     

胶质母细胞瘤中差异甲基化增强子区域调控的蛋白编码基因识别研究

目的 通过对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的DNA甲基化数据和表达数据进行整合和分析,识别表达水平可能受差异甲基化增强子区域(differential methylation enhancer regions,DMERs)调控的蛋白编码基因(protein-coding genes,PCGs),预测其...     

子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B的表达特点与临床意义

目的：探讨子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B（DNA methyltransferase 3B, DNMT3B）的表达特点、与雌激素受体（estrogen receptor,ER）和孕激素受体（progesterone receptor,PR）的相关性及意义。方法：免疫组织化学法检测DNMT3B、ER、PR在104例子宫内膜癌组织中的表达并与临床病理特点及预后相对照。结果：104例子宫内膜癌组织中DNMT3B阳性率为50%,Ⅰ型内膜癌（内膜样癌）中DNMT3B过表达率（54.8%）显著高于Ⅱ型内膜癌（30.0%,P=0.028）,且Ⅰ型内膜癌中,随肿瘤分化变差,DNMT3B阳性率增加（1级、2级、3级分别为43.3%、51.3%、86.7%）,差异有统计学意义（P=0.019）。DNMT3B在肌层侵犯程度重、存在脉管癌栓、淋巴结转移及分期晚的病例中过表达率更高,DNMT3B过表达的患者组预后更差,但差异未见统计学意义（P>0.05）。Ⅰ型内膜癌DNMT3B与ER、PR表达呈负相关,ER、PR阴性组DNMT3B过表达率（78.9%、86.7%）高于ER、PR阳性组DNMT3B过表达率（47.7%、47.8%）,差异有统计学意义（P=0.016,P=0.006）;ER、PR均阴性时,DNMT3B过表达率最高（92.9%）,差异有统计学意义（P=0.002）。Ⅱ型内膜癌中DNMT3B与ER、PR表达未见相关性（P>0.05）。序列分析显示,DNMT3B基因启动子区有多个ER、PR结合位点。结论：内膜样癌与非内膜样癌中DNMT3B表达特点不同,DNMT3B过表达有可能作为预后或预测因子而辅助病理诊断和生物学行为评估。Ⅰ/Ⅱ型子宫内膜癌的甲基化特点可能不同,Ⅰ型内膜癌中DNMT3B过表达与ER、PR表达呈负相关,Ⅱ型内膜癌中DNMT3B表达与ER、PR表达关系不大。     

CD44在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤及脑转移瘤中的表达

目的　研究 CD44粘附分子在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤中的表达及其在瘤细胞转移、侵袭中的作用 .方法　采用免疫组化 SABC法检测脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤各 2 0例及 10例正常脑组织中 CD44 s,CD44 v3,CD44 v6和 CD44 v3- 10的表达 .结果　 1CD44 s在脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤和脑转移瘤中的表达率分别为15 % ,10 0 %和 90 % ,其表达在前两者间有显著性差异 (P<0 .0 1) ;2 CD44 v3,CD44 v6和 CD44 v3- 10在脑膜瘤和多形性胶质母细胞瘤中无阳性表达 ,在脑转移瘤中表达率分别为40 % ,5 0 %和 75 % (P<0 .0 1) ;3CD44 s,CD44 v3,CD44 v6和CD44 v3- 10在正常脑组织中均无阳性表达 .结论　 1CD44 s蛋白可能在多形性胶质母细胞瘤的脑内侵袭过程中起重要作用 ;2 CD44 v蛋白可能在部分脑转移瘤向颅内转移的过程中起作用 ,且有可能成为脑转移瘤诊治的有用指标     

胶质母细胞瘤中异常甲基化调控的蛋白编码基因识别研究

目的 通过整合多组学数据,识别胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)中表达受DNA甲基化调控的蛋白编码基因(protein-coding genes,PCGs),评估不同甲基化模式下PCGs的生物学功能,挖掘与GBM预后相关的风险标志物。方法 基于多组学数据,构建GBM中PCGs的DNA甲基化谱,筛选表达受异常甲基化调控的PCGs并进行功能富集分析。同时结合GBM临床数据,对筛选出的PCGs进行生存分析。结果 识别出表达受异常甲基化调控的PCGs 630个,挖掘出51个与GBM预后相关的PCGs。结论 系统识别GBM中潜在的表达受异常甲基化调控的PCGs,并对识别GBM风险标志物和潜在的治疗靶点提出了新的认识。     

人DNMT3B1原核表达载体的构建和表达

目的构建人DNMT3B1原核表达载体,并进行初步表达。方法据Genebank中人DNMT 3B1 cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT 3B1,并将扩增产物克隆到原核表达载体PGEX-4T.3中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果 PCR扩增得到人DNMT 3B1的cDNA片段大小为2.6 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到原核表达载体PGEX-DNMT3B1I,PTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21（DE3）中高效表达,相对分子质量约为100 kd。结论成功构建了人DNMT3B1原核表达载体并完成其在E.coli BL21（DE3）中的诱导表达,为进一步在体外研究DNMT3B异构体提供了条件。     

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Western blot法检测转染效率;采用Western blot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。     

甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a及DNMT3b在子宫内膜异位症中的表达

目的:检测DNA甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a, DNMT3b在子宫内膜异位症(dendometriosis, EMs)异位内膜、在位内膜及正常对照子宫内膜的表达。方法:收集子宫内膜异位症巧克力囊肿20例为实验组,行输卵管吻合术者、宫颈病变行手术者20例为对照组,抽提总RNA,反转录制备cDNA。采用real-time RT-PCR 检测DNMT1,DNMT3a及DNMT3b基因的表达,并通过免疫荧光验证DNMTI在EMs异位内膜和在位内膜以及正常对照组子宫内膜中的表达。结果:Real-time RT-PCR检测表明DNMT1, DNMT3a和DNMT3b 在EMs异位内膜和在位内膜的表达较正常内膜低(P<0.05)。DNMT1, DNMT3a和DNMT3b在异位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.44,0.12和0.27;三者在在位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.27,0.13和0.15;三者在异位内膜与在位内膜的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测结果表明DNMT1蛋白在EMs患者异位内膜及在位内膜中表达显著降低。结论:DNMT1,DNMT3a 及DNMT3b在EMs中的异常低表达可能导致患者表观遗传学异常,参与EMs的发病。     

DNMT3b基因多态性及其在胃癌组织中的表达水平与胃癌的关联性分析

目的:探讨中国北方汉族人群DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因单核苷酸多态性(SNPs)和胃癌发病风险之间的关联性,阐明DNMT3b基因是否为胃癌的易感基因。方法:选择447例胃癌患者作为病例组,961名健康对照者作为对照组,采用TaqMan技术检测2组研究对象DNMT3b基因的rs1569686、rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs8118663位点的基因型分布。免疫组织化学技术检测病例组(104例)胃癌患者胃癌组织和85例患者的癌旁对照组织中DNMT3b蛋白的表达水平。结果:在病例组和对照组研究对象中5个SNPs位点基因型分布频率相近,未发现5个SNPs位点的多态性与胃癌的发生有关联(P>0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织中DNMT3b蛋白的表达水平升高(P<0.05)。5个SNPs的不同基因型与胃癌组织中DNMT3b蛋白的表达水平均无关联(P>0.05)。结论:中国北方汉族人群中DNMT3b基因多态性与胃癌的发生无关联,DNMT3b基因可能不是胃癌的易感基因。     

DNMT3A R882突变在成人急性髓系白血病中的研究进展

DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)是重要的DNA甲基化转移酶之一,与血液系统恶性肿瘤的发生发展密切相关.近几年研究发现DNMT3A R882在成人急性髓系白血病(AML)中高频突变,并且成为研究热点.DNMT3A R882突变通过改变DNMT3A结构,使DNMT3A酶活性下降、全基因组DNA低甲基化,促进成人AML发生发展.DNMT3A R882突变在成人AML患者完全缓解(CR)时的长期存在,是预后不良的主要生物分子学标志,同时也意味着常规的微小残留病灶监测(MRD)不能作为R882突变的分子标志.现就近几年对成人AML患者中DNMT3A R882突变的研究进展做一综述.     

DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析

目的:探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与江苏汉族人群食管癌易感性的关系。方法:提取195例食管癌患者及189例健康体检人员外周血基因组DNA,采用PCR-RFLP结合DNA测序技术检测DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结果:正常对照DNMT3B C46359T等位基因TT/CT基因型频率为98.9%/1.1%,病例组为97.9%/2.1%,在对照组与病例组中均未检测到DNMT3B 46359 CC基因型。携带DNMT3B 46359 CT等位基因的个体与对照组相比,其患食管癌的易感性未见明显升高(P=0.43,OR=1.96,95%CI:0.35~10.82)。对比江苏汉族人群和英国、美国白种人群,DNMT3B C46359T单核苷酸多态性频率分布有明显差异(P<0.01)。结论:DNMT3B基因C46359T多态性可能不适合作为中国汉族人群食管癌易感性的一个独立风险因素,此位点多态性的分布在不同人种间有显著差异。     

胃肠道间质瘤中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达及其DNA甲基化

目的 检测胃肠道间质瘤(GIST)组织及瘤旁组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)的表达,并研究整体DNA甲基化。方法 选取包头医学院第二附属医院2017年1月至2020年1月内镜下切除的GIST组织30例及瘤旁组织30例,应用免疫组化和qRT-PCR方法检测GIST组织和瘤旁组织中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白和mRNA的表达情况;应用亚硫酸氢盐限制性酶切分析技术(COBRA)分析重复序列LINE-1的甲基化水平。结果 GIST中DNMT1 mRNA的表达与瘤旁组织比较,差异无统计学意义(P0.05);GIST中的DNMT3a mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中的DNMT3b mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001)。DNMT1蛋白在GIST及瘤旁组织中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=1.000);DNMT3a蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.045);DNMT3b蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.017)。GIST中LINE-1序列的甲基化水平低于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中LINE-1序列的非甲基化水平高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的异常表达与GIST的发生发展有密切关系,具体机制可能与降低整体甲基化水平有关。     

血液系统条件性DNMT 3B 基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的 构建可在血液系统中条件性敲除DNMT 3B 基因小鼠并进行鉴定,为研究DNMT 3B 基因的生物学功能及其在血液肿瘤疾病的作用机制提供动物模型。方法 将引进的DNMT3Bflox/flox 小鼠与Mx1-Cre+ 小鼠进行杂交繁殖,得到基因型DNMT3Bflox/+Mx1-Cre+ 及DNMT3Bflox/+Mx1-Cre- 两种子代,再用这两种子代杂交产生子代小鼠,通过PCR 法鉴定子代小鼠的基因型;获得基因型为DNMT3Bflox/flox Mx1-Cre+ 的小鼠,通过腹腔注射pI-pC 共5 次诱导DNMT3B 敲除,然后用半定量PCR 方法鉴定DNMT 3B 基因敲除情况。结果 基因型鉴定确认在13 只子鼠中有2 只为DNMT3Bflox/flox Mx1-Cre+,经pI-pC 腹腔注射后,DNMT 3B 基因通过Cre/loxP 系统被成功敲除。结论 该方法成功构建可以在血液系统条件性敲除DNMT 3B 基因的小鼠,并进行敲除后鉴定。