长期传代后HL-60细胞内5’-核苷酸酶-n基因表达与阿糖胞苷耐药性的关系

目的观察白血病细胞株(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)胞浆5’-核苷酸酶-Ⅱ(CN-Ⅱ)基因表达,以及长期传代后的变化规律,探索CN-Ⅱ与Ara-C疗效及耐药机制的相关性。方法采用RT-PCR方法测定HL-60和HL-60/R的细胞内CN-ⅡmRNA表达,并通过体外培养传代,检测长期传代(5、10、20、30、40、50代)后CN-ⅡmRNA表达变化。结果培养初期结果显示,HL-60和HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平分别为0.23±0.04和0.47±0.05,HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平明显高于HL-60(P<0.05)。经长期培养传代至10、20、30、40和50代,各传代检测节点的HL-60和HL-60/R细胞内CN-ⅡmRNA表达水平均无明显变化(P均>0.05)。上述各传代检测节点,HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平均明显高于HL-60(P均<0.05)。结论 HL-60、HL-60/R细胞中CN-ⅡmRNA表达差异有统计学意义。经长期传代后,上述差异持续存在,提示CN-Ⅱ表达与Ara-C的疗效相关,但在长期传代后,变化并不明显,可能与Ara-C耐药现象的发生无关。     

抗8-AG和HGPRT缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)的体外诱导分化潜能

具有抗8-AG和HGPRT~-遗传标记的HL-60-AR细胞与维生素A酸或二甲基亚砜一起保温后,细胞对NBT还原反应能力增强;细胞膜表面出现C_2补体受体;细胞形态按粒系白细胞途径向较成熟的方向发育。同时,细胞并合~3H-TdR的速率降低;细胞几乎全部丧失在软琼脂中形成集落的能力。HL-60-AR细胞对次黄嘌呤的诱导分化反应不敏感。     

脱氧胞苷激酶与白血病耐药的关系

目的研究急性粒细胞白血病患者白血病细胞内脱氧胞苷激酶(DCK)的基因表达水平与阿糖胞苷(Ara-C)敏感性之间的关系.方法收集急性粒细胞白血病患者的骨髓标本,分离得到单个核细胞,采用RT-PCR技术半定量测定DCK mRNA表达水平,比较敏感与复发耐药患者DCK表达水平的差异.结果复发耐药患者DCK的表达水平要明显低于敏感患者(P<0.01).结论 DCK表达的降低可能与急性粒细胞白血病患者对Ara-C耐药相关,DCK 表达水平可作为临床评价白血病患者对 Ara-C 敏感性的一个指标,进而可以预测Ara-C 的药物疗效.     

脱氧胞苷激酶与白血病耐药的关系

目的研究急性粒细胞白血病患者白血病细胞内脱氧胞苷激酶 (DCK)的基因表达水平与阿糖胞苷 (Ara C)敏感性之间的关系。方法收集急性粒细胞白血病患者的骨髓标本 ,分离得到单个核细胞 ,采用RT PCR技术半定量测定DCKmRNA表达水平 ,比较敏感与复发耐药患者DCK表达水平的差异。结果复发耐药患者DCK的表达水平要明显低于敏感患者 (P <0 .0 1)。结论DCK表达的降低可能与急性粒细胞白血病患者对Ara C耐药相关 ,DCK表达水平可作为临床评价白血病患者对Ara C敏感性的一个指标 ,进而可以预测Ara C的药物疗效     

白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察白藜芦醇（resveratrol，Res）体外单独及联合阿糖胞苷（Ara-c）对白血病HL-60细胞的抑制作用。方法：在体外培养条件下观察不同浓度Res、Ara-c作用48小时后分别对HL-60细胞增殖的影响。然后根据以上抑制结果，选择对HL-60细胞抑制率15％～30％的Ara-c药物浓度，再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理HL-60细胞48小时后，同样用MTT法检测联合用药对细胞增殖抑制作用。结果：Res、Ara-c体外单独用药均能显著抑制HL-60细胞的生长增殖，Res联合Ara-c（2．5μg／m1）后，对HL-60细胞的增殖抑制作用显著提高，与单独用药组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：Res体外能显著抑制人HL-60细胞的增殖，Res联合Ara-c能显著提高对HL-60细胞的增殖抑制作用。     

抗8-AG和HGPRT缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)的建立

用MNNG处理HL-60细胞和8-AG软琼脂集落形成方法,成功地筛选出一株抗高浓度8-AG和完全缺失HGPRT活性的人早幼粒白血病细胞突变株,命名为HL-60-AR。该株细胞能抵抗8-AG的毒性作用,对HAT选择培养基十分敏感,检测不到HGPRT活性,不能参入~3H-次黄嘌呤。HL-60-AR细胞基本上保持了野生型HL-60细胞的生物学特征。突变细胞已在体外培养11个月,传100多代,遗传标记仍然稳定。     

小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞分化的作用

目的观察小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法阿糖胞苷 (10 8M)作用HL 6 0细胞 2 6天 ,观察细胞生长 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA表达水平的改变。结果小剂量阿糖胞苷可诱导HL 6 0细胞向单核 /巨噬细胞分化 ,抑制HL 6 0细胞的增殖 ,使细胞停滞于G1期 ,P5 3,P2 1蛋白和P5 3mRNA表达明显增强。结论小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞具增殖抑制和诱导分化作用 ,该作用与G1期阻滞及P5 3,P2 1表达增高有关。     

珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化的研究

目的观察珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化作用.方法采用HL-60细胞株体外培养,MTT法观察不同作用时间的直接细胞毒作用;细胞涂片观察细胞形态学改变;试剂盒检测酸性磷酸酶(ACP)含量.结果珠子参血清和珠子参煎液均有明显的细胞毒作用,72 h时抑制率分别为31.27%、34.23%,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用后,达72.9%、75.22%.作用72 h后ACP活性高于对照组,分别为13.6107、16.0122(U/gprot.min)(P＜0.01),细胞形态学观察以中幼粒及晚幼粒为主,分别占36.8%、75.8%,向成熟细胞方向分化.结论珠子参在体外对HL-60细胞株有细胞毒作用,且能提高5-FU的敏感性而与化疗药物起协同作用;珠子参有诱导HL-60细胞分化的功能.     

超氧阴离子参与白藜芦醇诱导的人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究超氧阴离子（O2^-·）、H2O2、线粒体膜电位（砌口）在白藜芦醇（nSV）诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡中的作用。方法：以碰’V（10．0、50．0、100．0μmol／L）分别作用HL-606、12、24h后，用流式细胞术检测细胞内O2^-、H2伤及MMP水平；四氮唑蓝凝胶法检测RSV作用HL-6024h后超氧化物歧化酶（SOD）的活性；MTt法检测SOD和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率；锥虫蓝细胞计数法检测N-乙酰-L-半胱氨酸（NAc）和RSV共同作用HL-50后的细胞生存率。结果：RSV可使HL-50内O2^-·水平升高，H2-2水平、MMP降低，SOD活性无明显变化；SOD和NAC对RSV诱导的HL．60凋亡作用无明显影响。结论：RSV诱导HL-60凋亡机制是RSV引起细胞内O2^-·水平升高，MMP降低，从而启动caspases凋亡途径诱发细胞凋亡。     

小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,对胚胎发育、神经细胞再生、关节软骨代谢、肿瘤细胞增殖等方面均有影响[1-3].阿糖胞苷(Cytosinearabinoside,Ara-c)是治疗白血病的重要药物.有研究认为,化疗药物是否能够有效地诱导白血病细胞凋亡是判断急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性的重要指标[4].资料显示,小剂量Ara-c及rh-LIF单用均可诱导细胞凋亡[5,6].最近,小剂量Ara-c与其它药物联合治疗白血病获得较好疗效[7,8].本文报道rh-LIF和Ara-c联合诱导HL-60凋亡的作用.     

铁超载与铁剥夺对Ara-C诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载对铁剥夺对Ara C诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :细胞培养法、台盼蓝活细胞拒染实验、细胞活力测定、光镜形态学观察、DNA琼脂糖电脉及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察不同浓度的三氯化铁 (FeCl3 )、铁剥夺剂 去铁胺 (DFO)等对HL 60细胞的作用 ,选择 10 0 μmol/LFeCl3 和 10 μmol/LDFO与Ara C共同作用于HL 60细胞 ,并以单用Ara C及生理盐水作对照。结果 :①FeCl3 (10 0 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml) 6h ,12h ,2 4h ,APO %和Sub -G1%低于单用Ara C(10 0 μg/ml)组 ,两组相比有显著差异性 (P <0 0 5 )。②DFO(10 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml)组APO %、DNA电泳ladder数目 ,FCM检测Sub -G1%均比单用Ara C高 (P <0 0 1)。③等摩尔的DFO与等摩尔FeCl3 共同作用于HL 60细胞 ,结果与生理盐水组相同 ;等摩尔DFO加等摩尔FeCl3 和Ara C(10 0 μg/ml)与单用Ara C(10 0 μg/ml)结果相同。 结论 :铁超载抑制化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺 (DFO)可促进化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 ,白血病患者补铁应慎重     

Effect of Concurrent Use of rh-IL-3 and rh-GM-CSFon Apoptosis of HL-60 Cells Induced by Ara-C

Accordingtotherecentstudy,thechemotherapeuticagentswhichhaveeffectsondifferentlevels0fnucleicacidmetabolismcaninduceapopt0siswhichoc-curredinacuteleukemiccells.Thefinalef-fectofchemotherapeutantdepends0ntwofactors,thegenetoxicity0fdrugsandin-duction0fap0pt0sis.Ara-Cisachem0thera-peutantwh1chaffectstheSphaseincellcy-c1e.ItsuppressesDNAp0lymeraseandnu-cleoside-diph0phate-reductase.Italsoper-meatesam0nggen0t0xicityofDNAandkillstheleukemicceIls.Thehemopoieticgrowthfactors,namelyrh-IL-3andrh-…     

淫羊藿苷对气管切开模型大鼠早期β-防御素-2和T细胞亚群的影响

目的： 探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对气管切开模型大鼠早期免疫相关指标的影响。方法： 将54 只SPF 级雄性SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、模型组(B组)、模型+ICA治疗组(C组),每组18 只。B,C组制备大鼠气 管切开模型。模型成功6 h 后给予C组ICA干预,A,B组给予等量生理盐水。分别在第24,72,168 h 取肺组织、肺 泡灌洗液及外周血。用RT-PCR检测大鼠肺组织中β-防御素-2 mRNA表达,ELISA检测肺泡灌洗液及外周血血清中β- 防御素-2 含量,流式细胞仪检测外周血T细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+)含量,并计算CD4+/CD8+值。结果： 气管切 开后B组大鼠肺组织β-防御素-2 mRNA及肺泡灌洗液β-防御素-2 含量在24 h 明显升高,随后逐渐降低,至168 h 降低 最明显(均P<0.05);外周血血清β-防御素-2 含量逐渐降低,168 h 明显低于24 h(P<0.05),但3 个时间点与A组比较差 异均无统计学意义(均P>0.05);外周血CD3+ T细胞水平24 h 明显低于A组(P<0.05),CD4+和CD8+ T细胞水平3 个时 间点与A组比较差异均无统计学意义,且各组组内差异亦均无统计学意义(均P>0.05)。C组ICA干预后：肺组织、肺 泡灌洗液、外周血血清β-防御素-2 含量及外周血中CD3+和CD4+ T细胞水平均逐渐升高,明显高于B组(均P<0.05); CD8+在24 h 明显低于A组(P<0.05),其余时间点3 组组间组内比较差异均无统计学意义(均P>0.05);CD4+/CD8+值在 168 h 明显高于A,B组(均P<0.01)。结论： ICA 可以改善气管切开模型大鼠早期肺部免疫功能,这可能与上调肺组 织β-防御素-2 mRNA表达及肺泡灌洗液、外周血血清中β-防御素-2 含量,提高外周血中CD3+和CD4+ T细胞水平和 CD4+/CD8+值,降低CD8+ T细胞水平有关。     

组胺H2受体激动剂4—甲基组胺对阿糖胞苷抑制HL—60细胞增殖的负？…

在用４－甲基组胺（４－ＭＨ）激动ＨＬ－６０细胞上的组胺Ｈ２受体后,观察抗白血病药物阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对ＨＬ－６０白血病细胞增殖抑制作用的影响。以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和集落培养为增殖指标,用ＮＢＴ还原试验检测细胞的分化,用ＨＰＣＬ和荧光分光光度法分别检测细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ＾２＋离子的变化。结果显示,ＨＬ－６０细胞上的组胺Ｈ２受体经４－ＭＨ激动后,Ａｒａ－Ｃ对其增殖的抑制作用明显减弱。     

联用重组的IL-3、GM-CSF对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为研究在阿糖胞苷（Ara－C）的作用下，基因重组的人白细胞介素3（rh－IL－3）、粒单祖细胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）对白血病细胞凋亡的影响，选用了HL－60白血病细胞系，采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C－myc、bcl－2抗原表达的分析以及白血病细胞集落的培养观察方法，观察了0～36h8个不同时相凋亡率与其他指标的变化，表明Ara－C凋亡的作用随药物孵育时间的延长而逐渐增强，凋亡率从0h的1．5％升至36h后的36．4％，而IL－3和GM－CSF能使这种作用明显提高，使凋亡率从7．6％升至19．6％，并能增强Ara－C对白血病细胞的杀灭，引起HL－60细胞C－myc抗原表达下降，而bcl－2抗原表达变化不大，同时发现这两种细胞因子对正常造血细胞影响较小，这为临床上白血病诱导缓解期联用rh－IL－3、rh－GM－CSF和细胞毒药物，提高缓解率，提供了理论依据。     

Effects of retinoic acid and arotinoidethylester on expression of cyclins and cyclin-dependent kinase in HL-60 cells

Intherecentyears,manyfeaturesofthecon-trolofcellcyclehavebeenclarified.Theprogres-sionofthecellcycleinmammaliancellsisregulat-edbythefamilyofcyclin-dependentserine-threo-nineproteinkinase(cdks).Differentcdksactindistinctphaseofthecellcycle.Theprecisetimingoftheiractionisdeterminedbymeansoftheircellcycle-specificexpression,phase-specificphospho-rylationandinteractionwithcdkinhibitors,buttheitinteractionwithspecificcyclinsismoreim-portant.Cellcycleprogressionisgovernedbythesequentialformation,ac…     

Cox-2在槲皮素抑制耐药白血病HL-60、HL-60A细胞增殖中的作用

目的探讨槲皮素体外对急性白血病耐药细胞株HL-60、HL-60A的抑制作用及环氧化酶-2(Cox-2)在其中起的作用。方法 CCK-8法检测槲皮素对HL-60及HL-60A细胞的抑制作用,流式细胞仪检查槲皮素诱导细胞凋亡作用;Westert-blot法检测Cox-2在正常人外周血单个核细胞、HL-60及HL-60A细胞表达情况;观察不同浓度槲皮素处理HL-60及HL-60A细胞前后Cox-2表达的变化趋势。结果槲皮素可以诱导HL-60及HL-60A细胞凋亡及抑制其增殖;Cox-2在正常人外周血单个核细胞低表达,在HL-60及HL-60A表达明显升高,HL-60A表达升高更加明显;经槲皮素处理后,Cox-2在HL-60及HL-60A的表达明显下降,HL-60A下降更加明显。结论Cox-2表达与急性白血病细胞耐药有关,槲皮素通过抑制Cox-2的表达诱导HL-60A细胞凋亡而抑制细胞增殖。     

铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁剥夺诱导HL 60细胞及对化疗药物诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :HL 60细胞与不同浓度的铁螯合剂 去铁胺 (DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养 6h、12h、2 4h、48h。通过测定细胞活力 ,观察细胞形态学变化 ,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡 ;通过亲和免疫组化方法检测c myc基因表达 ,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL 60细胞的作用。结果 :DFO单用可降低HL 60细胞活力 ,抑制HL 60细胞增殖 ,诱导HL 60凋亡 ,并可使c myc基因表达增加 ,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加 ;DFO与化疗药物联合时 ,可增加化疗药物HL 60细胞凋亡的作用 ,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 :铁剥夺可影响HL 60细胞DNA的合成 ,诱导其凋亡 ,并提高HL 60细胞对化疗药物的敏感性。因此 ,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一 ,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。