大鼠呼吸机相关肺损伤热休克蛋白70和核因子-κB的表达及其意义

目的 探讨呼吸机所致肺损伤(VILI)炎症反应中热休克蛋白70(HSP70)和核因子-κB(NF-κB)表达的意义.方法 健康SD大鼠30只,实施麻醉和气管切开术后分别接受不同潮气量(VT)的通气(通气时间均为4 h).随机分为以下3组:对照组(A组);常规通气组(B组,VT=10ml/kg);损伤通气组(C组,VT=40ml/kg).4 h后放血处死动物,测定肺湿/干比重、髓过氧化物酶(MPO)活性及肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白含量,光镜下行白细胞(WBC)计数;Western blot检测肺组织HSP70及NF-κB的表达.结果 在大潮气量机械通气4 h后,BALF中总蛋白含量、肺湿干比、WBC计数和MPO水平(3.89±0.31、5.83±0.42、6.10±0.80、7.31±1.21)均明显更高(P＜0.05);肺组织中HSP70、NF-κB表达水平(1.36±0.13、0.41±0.07)均显著增加,且两者呈负相关.结论 HSP70可通过抑制NF-κB的活性,保护肺组织避免VILI.     

不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响

目的评价不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响。方法健康清洁级SD雄性大鼠48只,6～8周龄,采用随机数字表法分为四组:气管切开保留自主呼吸的假手术组(A组)、机械通气模型组(B组)、瘦素10μg/kg组(C组)和瘦素50μg/kg组(D组),每组12只。采用10%水合氯醛3.5 ml/kg麻醉大鼠,疼痛反射消失后C组腹腔注射瘦素10μg/kg,D组腹腔注射瘦素50μg/kg,A、B组腹腔注射等容量生理盐水,注射后即刻进行气管切开,插管机械通气。A组气管插管后保留自主呼吸,B、C、D组机械通气建立VILI模型,参数设置:V_T 20 ml/kg,RR 80次/分,I∶E 1∶1,FiO_2 21%,PEEP 0 mmHg,通气时间4 h。分别于基础状态、通气结束时抽取股动脉血进行血气分析。通气结束后放血处死大鼠,在4℃下取肺组织并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),光镜下进行中性粒细胞计数,采用ELISA法测定TNF-α、IL-6、IL-1β浓度;取肺组织称重,计算肺湿干重比(W/D);观察肺组织病理改变并进行病理评分;采用Western blot检测肺组织研磨液中NF-κB p65含量。结果与A组比较,B、C、D组W/D、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织NF-κB p65含量明显升高(P0.01)。与B组比较,C、D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。与C组比较,D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。结论瘦素可降低大鼠机械通气肺损伤中炎性因子的表达水平,减轻肺损伤,50μg/kg较10μg/kg作用明显。     

机械通气致肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶的表达

目的探讨机械通气致肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)及其组织抑制因子(TIMP-1和TIMP-2)的表达。方法30只健康雄性SD大鼠随机分为3组,麻醉和气管切开及气管内插管后,进行三种方式通气,A组(对照组):保留自主呼吸;B组(小潮气量组):Vr 7ml/kg, 呼吸频率(RR)40次/min;C组(大潮气量组):Vr 40ml/kg,RR 20次/min;B、C组大鼠通气时间均为4 h。测定实验前及通气4 h后PaO2/FiO2、通气4 h后支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数、总蛋白水平及左肺湿重/干重(W/D)比值,并行肺组织病理学检查,RT-PCR检测肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达;酶谱法分析BALF中MMP-2和MMP-9的活性。结果通气4 h后,与A、B组比较,C组PaO2/FiO2下降,BALF中总蛋白含量、白细胞计数、W/D比值以及MMP-2、MMP-9活性增高,肺组织MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平增高,TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达水平无明显变化,肺组织有更多的白细胞浸润和肺泡壁结构的破坏。结论大潮气量通气可致大鼠急性肺损伤,MMP-2和MMP-9及TIMP-1和TIMP-2的失衡在其中发挥重要作用。     

组织蛋白酶B在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用：与NLRP3炎症小体的关系

目的评价组织蛋白酶B(CTSB)在大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用及其与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系。方法 SPF级健康雄性SD大鼠36只, 6～8周龄, 体重220～300 g, 采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、VILI组(V组)和VILI+CA074-me组(Me组)。C组和V组大鼠气管插管前1 h腹腔注射等量生理盐水, Me组腹腔注射CA074-me 5 mg/kg。C组自主呼吸4 h, V组和Me组行机械通气4 h, 通气参数:VT 20 ml/kg, 通气频率80次/min, FiO2 21%, PEEP 0 cmH2O。气管插管前和自主呼吸或通气结束后采集股动脉血行动脉血气分析, 记录PaO2, 随后处死大鼠, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和取肺组织, 确定肺组织湿重/干重(W/D)比值, HE染色法观察病理学结果并进行肺损伤评分, 采用ELISA法检测BALF及血清IL-1β和IL-18浓度。采用qRT-PCR法检测肺组织CTSB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1的mRNA表...     

脂氧素受体激动剂BML-111减轻大鼠机械通气肺损伤

目的探讨脂氧素受体激动剂BML-111对机械通气肺损伤(VILI)的保护作用及其机制。方法 32只健康雄性SD大鼠随机均分四组,L组:VT6ml/kg;H组:VT20ml/kg;BML组:VT20ml/kg,机械通气开始时腹腔注射BML-111(1mg/kg);BOC组:VT20ml/kg,机械通气开始前30min腹腔注射叔丁氧羟基-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(BOC-2,50μg/kg),机械通气开始时腹腔注射BML-111(1mg/kg)。RR均为80次/分,机械通气时间均为4h。实验结束处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。观察肺组织病理学变化,Western Blot法检测肺组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平、核转录因子(NF)-κB核转位。对BALF中细胞进行分类计数,检测BALF中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。结果 H、BOC组BALF中蛋白浓度和中性粒细胞计数、TNF-α、IL-1β和L-6含量明显高于L和BML组(P0.05或P0.01)。H、BOC组ERK、p38MAPK和JNK磷酸化水平明显高于L和BML组(P0.05或P0.01)。H、BOC组IKB-α表达明显低于L和BML组(P0.05或P0.01);H、BOC组NF-κB p65亚基从胞浆向胞核转位明显高于L和BML组(P0.05或P0.01)。结论 BML-111抑制MAPK的磷酸化和NF-κB信号通路激活,并可能是其减轻VILI的机制之一。     

HSF1在小鼠呼吸机相关性肺损伤内源性保护机制中的作用：与HMGB1的关系

目的评价热休克转录因子1(HSF1)在小鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)内源性保护机制中的作用及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的关系。方法 SPF级健康C57BL/6雄性小鼠40只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、VILI组、阴性对照siRNA+VILI组(NV组)和HSF1 siRNA+VILI组(siRNA组)。机械通气前48 h时, NV组气道内注射阴性对照siRNA 5 nmol, siRNA组气道内注射HSF1 siRNA 5 nmol, 均用无菌磷酸盐缓冲液稀释至50 μl。VILI组、NV组和siRNA组机械通气(VT 35 ml/kg, RR 75次/min, I∶E 1∶2, FiO2 21%)4 h构建小鼠VILI模型, C组仅行气管切开, 保留自主呼吸。分别于气管插管后即刻和机械通气4 h时, 行动脉血气分析, 记录PaO2;然后深麻醉下处死小鼠, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织, 采用ELISA法测定BALF中TNF-α、IL-1β、HMGB1浓度, 测定肺组织湿重/干重(W/D)比值...     

氟比洛芬酯对大鼠机械通气所致肺损伤的影响

目的 探讨氟比洛芬酯对大鼠机械通气所致肺损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重300～350 g,随机分为4组(n=10),常规潮气量通气组(TV组,潮气量8 ml/ks)、大潮气量通气组(HV组,潮气量40 ml/ks)、大潮气量通气+氟比洛芬酯5 ms/kg组(HV+F1组)和大潮气量通气+氟比洛芬酯10 mg/kg组(HV+F2组).HV+F1组和HV+F2组于机械通气前15 min时分别静脉注射氟比洛芬酯5、10 mg/ks.于机械通气4 h时处死大鼠,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、血栓素B2(TXB2)和总蛋白浓度,计数白细胞及计算肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与TV组相比,HV组BALF TNF-α、IL-6、TXB2、总蛋白浓度、白细胞计数和肺组织W/D升高(P<0.05),肺组织发生病理学损伤;与HV组相比,HV+F1组和HV+F2组BALF TNF-α、IL-6、TXB2、总蛋白浓度、白细胞计数和肺组织W/D降低(P<0.05),肺组织病理学损伤减轻;HV+F2组BALF TNF-α和TXB2浓度低于HV+F1组(P<0.05),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论 氟比洛芬酯可通过抑制炎性反应减轻大鼠机械通气所致肺损伤.     

氯化钆预处理对ANP肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中CYLD及NF-κB的影响

目的:观察氯化钆(GdCl3)预处理对性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)肿瘤抑制因子CYLD及NF-κB的影响,探讨CYLD在ANP肺损伤中所起的作用。方法:36只SD大鼠随机分成正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组。采用5%牛磺胆酸钠逆行性胰胆管注射制备ANP动物模型,GdCl3预处理组在造模前30 min经尾静脉注射GdCl3(10 mg/kg)。术后6 h处死各组动物,经支气管肺泡灌洗获取肺泡AMs,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量,Western blot检测AMs中NF-κB及CYLD活性水平。检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)的水平变化,并行肺组织病理学检查。结果:假手术组肺组织未见病理改变,ANP组和GdCl3预处理组肺组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但GdCl3预处理组病变程度轻与ANP组;ANP组肺组织的MPO活性,以及BALF的TNF-α,IL-1β含量较正常对照组明显升高(均P<0.05);正常对照组,ANP组,GdCl3预处理组AMs核蛋白NF-κB的表达量分别为0.08±0.03,0.18±0.06及0.11±0.04,3组AMs的CYLD的表达量分别为0.32±0.09,0.15±0.05和0.27±0.07。ANP组,GdCl3预处理组AMs中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r=-0.708,r=-0.571,均P<0.05)。结论:ANP肺损伤中存在CYLD低表达和NF-κB活化,GdCl3预处理能通过增加CYLD表达,减少NF-κB活化,进而减轻肺损伤。     

半乳糖凝集素-1预处理对机械通气相关性肺损伤小鼠的影响

目的 探讨半乳糖凝集素-1(Galectin-1)预处理对机械通气相关性肺损伤(VILI)小鼠的影响。方法 选择清洁级健康雄性C57BL/6小鼠30只,6～8周龄,体重22～30 g。采用随机数字表法将小鼠分为三组：对照组(C组)、VILI组(V组)和Galectin-1+VILI组(G组),每组10只。C组气管插管后保持自主呼吸4 h, V组和G组气管插管后机械通气4 h。气管插管前1 h C组和V组腹腔注射生理盐水0.75 ml, G组腹腔注射Galectin-1 3μg。于气管插管前即刻、自主呼吸或机械通气结束时采集动脉血检测PaO₂,后处死小鼠,收集肺泡支气管灌洗液(BALF),采用ELISA法检测BALF中IL-1β和IL-18浓度。取肺组织测定湿/干重比(W/D),采用qRT-PCR法检测肺组织GSDMD、caspase-1和caspase-11 mRNA表达量,Western blot法检测肺组织GSDMD、caspase-1和caspase-11蛋白含量,HE染色法观察病理改变并行肺损伤评分。结果 与C组比较,V组和G组机械通气结束时PaO     

参附注射液对大鼠机械通气相关性肺损伤的保护作用及其机制

目的 探讨参附注射液(Shenfu injection,SF)对大鼠机械通气(mechanical ventilation,MV)相关性肺损伤的保护作用及其机制. 方法 40只健康成年雄性Wister大鼠采用随机数字表法分为4组,每组10只:对照组(C组)、正常潮气量MV组(N组)、大潮气量MV组(L组)、大潮气量MV+SF处理组(SF组).C组保留自主呼吸;N组、L组和SF组MV4h,潮气量分别设置为8～10 ml/kg、40 ml/kg、40 ml/kg,SF组于MV前15 min静脉注射SF 10 ml/kg.实验结束处死动物,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),测定BALF中总蛋白、IL-1β、IL-18和TNF-α的浓度;取肺组织,测量湿/干重比(wet/dry,W/D),采用免疫组化法检测肺组织NF-κB的表达,观察病理学改变并进行肺损伤评分. 结果 SF组BALF中TNF-α、IL-1β、IL-18浓度分别为(65±11)、(47±9)、(58±8) ng/L,较L组(99±7)、(69±7)、(86±7) ng/L明显降低(P＜0.05);SF组大鼠肺损伤评分、W/D、肺组织NF-κB光密度值分别为(8.5±1.8)分、(5.0±1.6)、(0.32±0.28),较L组(14.1±2.7)分、(5.5±1.8)、(0.54±0.33)均明显降低(P＜0.05). 结论 SF可减轻大鼠MV相关性肺损伤,其机制可能与SF抑制肺内NF-κB通路的活性且降低肺内炎性因子的释放有关.