诱生型血红素氧合酶mRNA、诱生型一氧化氮合酶mRNA在脑缺血中的表达

目的观察诱生型血红素氧合酶(HO-1)mRNA、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA在局灶性脑缺血中的表达及其不同作用。方法采用逆转录酶多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定HO-1mRNA、iNOSmRNA在局灶性缺血脑组织中不同时间点的表达变化。结果iNOSmRNA的表达在缺血后2 h出现,24 h达最高峰,以后逐渐下降。HO-1mRNA表达在缺血后2 h即出现,缺血后12 h达最高峰。结论脑缺血的病理生理过程中存在着一氧化氮(NO)及一氧化碳(CO)两种信使系统之间的相互作用。HO-1mRNA及iNOSmRNA的表达上调并具有时相性。缺血后期HO-1mRNA仍然维持在一定的水平,可能具有对抗后期iNOSmRNA增高所产生的NO毒性作用。     

在急性局灶性脑缺血早期VEGF、FLT-1、FLK-1 mRNA的表达及作用研究

目的 检测血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（FLT-1，FLK-1）mRNA在急性局灶性脑缺血中的表达，并探讨血管内皮生长因子在急性局灶性脑缺血中的作用。方法 建立SD大鼠永久大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位杂交技术检测血管内皮生长因子及其受体基因在局灶性脑缺血后不同时间点的表达。结果 原位杂交显示VEGF及FLT-1，FLK-1mRNA在局灶性脑缺血后3h即开始表达增强。VEGFmRNA和FLT-1，FLK-1mRNA于48h达高峰，后VEGFmRNA逐渐下降。至14d恢复到对照水平。而FLT-1，FLK-1mRNA在达高峰后，下降更加缓慢，约在21d时达对照水平，VEGFmRNA主要在缺血半影区神经元表达，同时在胶质细胞和血管内皮细胞表达，而FLT-1，FLK-1mRNA主要在缺血周边血管内皮细胞表达，但也在神经元表达。在缺血后48h半影区周边出现血管增生。并逐渐向中心区延伸，于缺血后7d达高峰，整个半影区可见明显敌国管增生。结论 急性半影区周边出现血管增生，并逐渐向中心区延伸，于缺血后7d达高峰，整个半影区可见明显血管增生。结论 急性局灶性脑缺血早期VEGFmRNA及FLT-1，FLK-1mRNA在神经细胞。胶质细胞，血管内皮细胞均有表达，可促进缺血半影区的血管增生。对改善急性局灶性脑缺血早期缺血半影区血供有重要作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。     

P-选择素在大鼠全脑缺血再灌注微血管内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨P-选择素（P-selectin)在大鼠全脑缺血再灌注血管内皮细胞损伤过程中的作用。方法 将大鼠随机分为假手术组和脑缺血30min再灌注1h,3h,6h,12h,24h,48h,72h组，动物模型采用全脑缺血模型三血管阻塞法，用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注不同时间点FⅧ相关抗原（vWF)的表达以标记内皮细胞损伤与修复过程，同时用原位杂交方法检测P-选择素mRNA的表达变化。结果 假手术对照组未见P-选择素mRNA表达，脑缺血再灌注后1h表达出现上调，12-24h达高峰，72h仍有表达，FⅧ相关抗原在假手术组呈强阳性表达，脑缺血再灌注后3h表达下降，24-48h表达最低，72h表达开始恢复，结论 脑缺血再灌注微血管内皮细胞损伤主要发生在早期，此过程中P-选择素mRNA表达上调，说明P-选择素参与了脑缺血后内皮细胞的损伤过程。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

大鼠局灶性缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA的表达

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）与脑缺血再灌注损伤的关系。方法采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，阻断血流2h进行再灌注。应用免疫组织化学法和RT—PCR法检测不同时间段大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA的表达，并进行动态观察。结果正常大鼠大脑皮质有ADM及其mR—NA的表达，假手术组ADM及其mRNA表达略高于正常组，P〉0．05；大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质ADM及其mRNA过表达，与正常对照组及假手术组相比差异显著，P〈0．05。动态观察发现，脑缺血2h再灌注2h，大脑皮质ADM及其mRNA即表达，再灌注22h达高峰，至1w仍明显多于正常对照组，P〈0．05。结论脑缺血再灌注后ADM及其mRNA呈现规律性过表达。     

葛根素对实验性脑缺血GAD67mRNA表达变化的影响

目的观察葛根素对实验性脑缺血谷氨酸脱羧酶(GAD67)表达变化的影响。方法应用原位杂交方法检测大鼠永久大脑中动脉闭塞(MCAO)模型GAD67mRNA在脑缺血后不同时间的表达。结果正常组及假手术组GAD67mRNA在脑组织中表达较弱。对照组和治疗组GAD67mRNA在脑缺血后6h即开始表达增强,在72h 达高峰,后逐渐下降,GAD67mRNA表达至第2周仍高于正常,治疗组GAD67mRNA表达高于对照组。结论葛根素可以促进实验性脑缺血后GAD67mRNA的表达,具有神经保护作用,有助于神经功能的恢复。     

糖尿病脑梗死大鼠血管内皮生长因子及其受体表达水平的变化

目的 研究糖尿病脑梗死(DMCI)早期半暗带等值区血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(FLT-1,FLK-1)表达水平的变化.方法 建立DMCI大鼠模型,在脑缺血后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h,采用原位杂交方法测定大鼠大脑缺血半暗带等值区VEGF、FLT-1、FLK-1 mRNA的表达水平;并与无糖尿病的脑梗死(NDMCI)大鼠比较.结果 DMCI组在脑缺血后各时间点脑缺血半暗带等值区VEGF mRNA的表达水平均显著低于NDMCI组(P＜0.05～0.01),FLK-1 mRNA表达水平在脑缺血后12 h显著低于NDMCI组(P＜0.01),FLT-1 mRNA表达水平在脑缺血后各时间点(除6 h)与NDMCI组差异无统计学意义.结论 DMCI早期VEGF和FLK-1 mRNA表达水平降低,这可能是DMCI血管、神经病变重的原因之一.     

脑缺血再灌注后IL-8与微血管炎症损伤关系的实验研究

目的 探讨白细胞介素-8(IL-8)在大鼠全脑缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)血管内皮细胞损伤过程中的作用。方法 将大鼠随机分为假手术组和脑缺血30min再灌注1、3、6、12、24、48、72 h组，动物模型采用全脑缺血模型三血管阻塞法，用免疫组化法检测脑组织IR不同时间点层粘连蛋白表达以标记锻血管损伤与修复过程，同时用原位杂交方法检测IL-8mRNA的表达变化。结果 IR后1hIL-8mRNA表达出现上调，24h达高峰。层粘连蛋白在假手术组呈强阳性表达，IR后3h表达下降，24～48h表达最低，72h表达开始恢复。结论 IR微血管炎症损伤主要发生在早期，此过程中IL-8mRNA表达上调，说明IL-8参与了脑缺血后微血管炎症损伤过程。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后XBP-1表达的变化

目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P ＜0.01);BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用.     

血红素氧合酶-1及血红素氧合酶-2在大鼠局灶性脑缺血中的意义

目的　研究血红素氧合酶 1(HO 1)及血红素氧合酶 2 (HO 2 )在局灶性脑缺血中的作用。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血模型 ,对 6 6只大鼠脑缺血后不同时间点进行HO 1、HO 2免疫组化染色及病理学研究 ,并用计算机图像分析技术计算两者表达水平。结果　栓塞后 30min大鼠皮质及海马即有HO 1阳性神经元及胶质细胞的表达 ,且随着时间推移HO 1的表达逐渐增强 ,到栓塞后 12h达峰值 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降 ,栓塞后 1周仍有HO 1表达。HO 2在正常大鼠及梗死大鼠脑组织内均有表达。栓塞后不同时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5 ) ,但HO 2表达呈动态变化 ,2 4h时最高 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降。结论　脑缺血时脑内HO 1、HO 2表达的不同变化 ,是脑组织对损伤恢复重要的机制之一。HO 1修复受损的神经元和胶质细胞 ,而HO 2在于维护正常细胞的稳定     

Reduced HO-1 protein expression is associated with more severe neurodegeneration after transient ischemia induced by cortical compression in diabetic Goto-Kakizaki rats.

Pronounced hyperglycemia provoked by extradural compression (EC) of the sensorimotor cortex was recently described in the non-insulin dependent Goto-Kakizaki (GK) diabetic rat. Compared with control Wistar rats, GK rats exhibited more extensive brain damage after cortical ischemia at 48 h of reperfusion (Moreira et al, 2007). We hypothesized that the enhanced brain injury in GK rats could be caused by differential regulation of the heme degrading enzyme heme oxygenase (HO)-1, known to interact with the expression of other target genes implicated in antioxidant defense, inflammation and neurodegeneration, such as superoxide dismutase (SOD)-1, -2, inducible nitric oxide synthase (iNOS), and tumor necrosis factor-alpha (TNFalpha). At 48 h after ischemia, relative mRNA expression of such target genes was compared between ipsilateral (compressed) and contralateral (uncompressed) hemispheres of GK rats, along with baseline comparison of sham, uncompressed GK and Wistar rats. Immunohistochemistry was performed to detect cellular and regional localization of HO-1 at this time point. Baseline expression of HO-1, iNOS, and TNFalpha mRNA was increased in the cortex of sham GK rats. GK rats showed pronounced hyperglycemia during EC and transient attenuation of regional cerebral blood flow recovery. At 48 h after reperfusion, HO-1 mRNA expression was 7- to 8-fold higher in the ischemic cortex of both strains, being the most upregulated gene under study. Heme oxygenase-1 protein expression was significantly reduced in diabetic rats and was found in perilesional astrocytes and rare microglial cells, in both strains.The reduced HO-1 protein expression in GK rats at 48 h after reperfusion combined with more extensive neurodegeneration induced by EC, provides further in vivo evidence for a neuroprotective role of HO after brain ischemia.     

大鼠局灶性脑缺血再灌后转录因子ATF4的表达变化

目的观察鼠脑缺血再灌注后ATF4mRNA及蛋白的表达变化。方法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,RT-PCR法、免疫组化染色分别测定鼠脑缺血半暗带区再灌注后不同时相ATF4mRNA及蛋白的表达变化。结果模型组ATF4mRNA与蛋白于再灌注后1h表达增加;ATF4mRNA表达于再灌注后6h达高峰,其蛋白表达于再灌注后24h达高峰。结论鼠脑缺血再灌注可诱导ATF4在缺血半暗带区表达,提示ATF4可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl-2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血模型；尼莫地平预处理；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其海马组织中Bcl-2和Bax mRNA。结果大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后，海马组织Bcl-2和Bax基因均被诱导表达，Bcl-2表达量持续升高，而Bax表达量在脑缺血24h达高峰，随后逐渐下降。在脑缺血后6h和24h，经尼莫地平预处理7d的大鼠，海马组织Bcl-2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调，而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl-2和Bax基因表达的水平，为干预脑卒中后基因表达提供依据。     

局灶脑缺血大鼠代谢型谷氨酸受体5mRNA表达及意义

目的观察局灶脑缺血大鼠脑组织中代谢型谷氨酸受体5mRNA(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5 mRNA)在脑缺血不同时段的表达及其动态变化的规律,探讨其在急性脑缺血中变化的意义。方法55只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血1、3、6、12及24h组(手术组)及其相对应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠MCAO模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术判断神经元阳性表达的强弱,用计算机图像分析系统检测各组mGluR5 mRNA表达的灰度值及阳性细胞数。结果各手术组mGluR5 mRNA表达均高于假手术对照组及正常对照组,与正常对照组相比,缺血1h其表达即有升高,至6h达高峰。而假手术对照组与正常对照组相比无统计学意义。结论急性脑缺血可引起mGluR5 mRNA表达上调,提示mGluR5参与了局灶性脑缺血损伤,可能促进了缺血性脑血管病的发展。     

阿托伐他汀钙对实验性脑缺血MMP-9表达变化的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,应用原位杂交和免疫组化法检测MMP-9mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),24h达高峰;阿托伐他汀钙干预治疗后能减少缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达(P<0.05);降低神经功能缺损评分(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达,减轻缺血再灌损伤。     

Reductions in mRNA of the neuroprotective agent, neuroserpin, after cerebral ischemia/reperfusion in diabetic rats

The aim of this study is to investigate disturbances in fibrinolytic components in diabetic rats with middle cerebral artery occlusion (MCAO). Comparison of cerebral injury at 23 h after reperfusion indicated that infarction volumes were increased in diabetic rats as compared with normal rats. Cerebral ischemia/reperfusion in normal and diabetic rats was accompanied by increased expression of tissue plasminogen activator (t-PA), urokinase plasminogen activator (u-PA), plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) and neuroserpin (NSP) mRNA after reperfusion. Most importantly, the expression of NSP mRNA, but not t-PA, u-PA and PAI-1 mRNA, was reduced to undetectable levels at 11 and 23 h after reperfusion in diabetic rats as compared with normal rats. Although activity of PA (t-PA and u-PA) and the ratio of PA/PAI were increased at 5 h after reperfusion in both ischemic brains of diabetic and normal rats, the levels in diabetic rats were lower than that in normal rats. We speculate that the exacerbation of ischemic injury in diabetic rats may be related to the reduction of fibrinolytic component and the neuroprotective role of NSP. Further study of the efficacy of NSP in the pathogenesis and treatment of cerebral ischemia may provide novel insights.     

Expression of the complement C3a and C5a receptors after permanent focal ischemia: An alternative interpretation

The receptors for the complement anaphylatoxins C3a and C5a are expressed by glial cells and neurons in normal and inflamed brain. Previous studies demonstrated modest elevations in mRNA expression of these receptors in a model of focal cerebral ischemia. Using a similar model system for both mice and rats, we report markedly different patterns of anaphylatoxin receptor mRNA expression in cerebral ischemia. C5a receptor expression was dramatically elevated within 3 h after middle cerebral artery occlusion, while C3aR expression was reduced to 25% of control animals. By 24 h post-occlusion, expression of both receptors was higher than at any other time point examined. This increased expression at late time points after occlusion is most likely the result of massive infiltration of leukocytes expressing the receptors. We also observed increased receptor mRNA expression in sham-operated animals, indicating that the procedures used for arterial occlusion affects mechanisms regulating receptor expression. This latter result highlights the importance of including this important control group in ischemic model systems for proper interpretation of changes in gene expression.