重组人α2b干扰素胶囊抗小鼠阴道HSV-2感染的研究

目的 研究新剂型重组人干扰素(interferon,IFN)α2b胶囊抗小鼠疱疹病毒性阴道炎的效果.方法 人工建造阴道感染HSV-2的小鼠模型,以不同剂量的IFNα2b对小鼠阴道局部用药,以阿昔洛韦(acyclovir,ACV)为阳性对照.观察药物干扰对模型小鼠发病率、死亡率及病程进展的影响.结果 试验药物能减少小鼠的病死数、发病数,减慢小鼠的病程进展,其中16000IU/天高剂量组效果最好,类似于ACV组的用药效果,4000IU/天的低剂量用药组效果最弱,8000IU/天中剂量组效果居中.结论 受试药物在小鼠体内具有良好的抗HSV-2感染所致阴道炎的作用.     

重组人干扰素α2b喷雾剂的抗病毒药效评价及临床观察

目的研究重组人干扰素α2b喷雾剂抑制单纯疱疹病毒、流感病毒、SARS冠状病毒有效浓度范围,为临床研究提供依据并进行治疗病毒性皮肤疾病临床验证。方法采用细胞病变抑制法研究重组人干扰素a2b喷雾剂抑制单纯疱疹病毒HSV-1及HSV-2攻击Vero细胞,抑制流感甲型及乙型病毒攻击人胚肾细胞,抑制SARS冠状病毒攻击Vero细胞的体外抗病毒作用。采用多中心、随机双盲临床试验评价重组人干扰素α2b喷雾剂对流感甲型及乙型病毒、尖锐湿疣的治疗效果。结果重组人干扰素a2b喷雾剂抑制单纯疱疹病毒HSV-1及HSV-2对Vero细胞的攻击的半数有效浓度（IC50）分别为81．2IU／ml和390．0IU／ml;重组人干扰素α2b喷雾剂抑制流感甲型及乙型病毒对人胚肾细胞攻击的IC50分别为534．1IU／ml和3645．5IU／ml;抑制SARS冠状病毒对Vero细胞攻击的IC50为11．77IU／ml。多中心、随机、双盲的临床研究表明,重组人干扰素α2b喷雾剂治疗单纯疱疹的有效率为89．09％,治疗尖锐湿疣有效率为22．0％,治愈率为17．0％,患者均未见明显不良反应。结论体外实验表明重组人干扰素α2b喷雾剂对单纯疱疹病毒、流感病毒、SARS冠状病毒有显著抑制作用,临床研究表明重组人干扰素α2b喷雾剂作为蛋白经皮给药制剂可用于单纯疱疹和尖锐湿疣的临床治疗。     

嗜酸乳杆菌对链霉素处理小鼠感染大肠杆菌O157：H7的预防和治疗作用的观察

目的 观察嗜酸乳杆菌对小鼠感染大肠杆菌0157：H7的可能治疗作用。方法 使用口服链霉素处理的BALB／c小鼠为模型，在大肠杆菌0157：H788-2364感染前或后，在不同时间经口给以嗜酸乳杆菌LAI，观察试验小鼠的临床症状、肠道和肾脏的病理改变、排菌时间以及粪便中志贺毒素对Vero细胞的毒性作用等。结果 发现口服嗜酸乳杆菌可以明显降低感染了大肠杆菌0157：H7小鼠的死亡率，降低通过粪便排泄病原菌的时间，以及降低粪便标本对Vero细胞的毒性作用。结论 口服嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O157：H7的小鼠有预防和治疗作用。     

假单胞菌表达重组人干扰素α-2b蛋白纯化用离子交换树脂的筛选

目的研究用于分离纯化假单胞菌表达重组干扰素α-2b蛋白的离子交换树脂。方法利用工程菌假单胞菌发酵获得的菌体进行裂解,经离心、沉淀、盐析、疏水层析、超滤、透析等步骤,获得重组人干扰素α-2b蛋白溶液,通过对比8种商品化离子交换树脂(DE 52、DEAE FF、Fractogel DEAE、Bio-sep DEAE、CM 52、CM FF、Fractogel COO-、Bio-sep CM)的动态载量、洗脱条件及纯化后的重组人干扰素α-2b蛋白的活性回收率,采用安捷伦2100生物分析仪比较纯化后的重组人干扰素α-2b纯度,考察离子交换树脂用于假单胞菌表达重组干扰素α-2b蛋白分离纯化的适用性。结果 FractogelDEAE和Fractogel COO-的动态载量最高,分别为183.04 mg/mL和107.00 mg/mL;Fractogel DEAE和CM 52洗脱效果较好;DEAE FF和CM FF纯化后的干扰素α-2b蛋白活性回收率较高,分别为82.38%和49.46%。结论 DEAE FF和CM FF适用于假单胞菌重组干扰素α-2b蛋白的分离纯化。     

卡介菌多糖核酸联合重组人干扰素α-2b乳膏治疗面部扁平疣的临床观察

目的探讨卡介菌多糖核酸联合重组人干扰素α-2b乳膏治疗面部扁平疣的临床疗效。方法 83例面部扁平疣患者,年龄20～43岁,平均32.8岁,男28例,女55例,随机分为2组:治疗组隔日1次肌注卡介菌多糖核酸注射液1ml;每天清洁患处后使用重组干扰素α-2b乳膏,每日涂抹患处4次;对照组给予肌注卡介菌多糖核酸注射液1ml,隔日1次。8周后对疗效进行观察判定。结果治疗组有效率79.55%,对照组有效率56.41%。结论卡介菌多糖核酸联合重组人干扰素α-2b乳膏治疗面部扁平疣的临床疗效显著,治疗过程中无严重不良反应,值得临床推广。     

嗜酸乳杆菌对链霉素处理小鼠感染大肠杆菌O157∶H7的预防和治疗作用的观察

目的　观察嗜酸乳杆菌对小鼠感染大肠杆菌O15 7∶H7的可能治疗作用。方法　使用口服链霉素处理的BALB c小鼠为模型 ,在大肠杆菌O15 7∶H788 2 36 4感染前或后 ,在不同时间经口给以嗜酸乳杆菌LAI,观察试验小鼠的临床症状、肠道和肾脏的病理改变、排菌时间以及粪便中志贺毒素对Vero细胞的毒性作用等。结果　发现口服嗜酸乳杆菌可以明显降低感染了大肠杆菌O15 7∶H7小鼠的死亡率 ,降低通过粪便排泄病原菌的时间 ,以及降低粪便标本对Vero细胞的毒性作用。结论　口服嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O15 7∶H7的小鼠有预防和治疗作用。     

TLR2及TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达

目的 研究Toll样受体(TLR)2和TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达,探讨TLR2和TLR4在侵袭性肺曲霉病中的作用. 方法 将小鼠分为3组:A组为正常对照组;B组为未免疫抑制但感染烟曲霉菌组;c组为侵袭性肺曲霉病(IPA)模型组,给予免疫抑制并感染烟曲霉菌.在感染后8、24、48和72 h时相点,处死小鼠,取肺组织,采用组织病理学方法观察肺组织的病理损伤,RT-PCR法检测肺组织各个时相点的TLR2、TLR4、TNF.ot和β-tublin的表达.TLR2、TLR4、TNF-α的PCR产物电泳条带的扫描密度值与同时扩增的β-tublin电泳条带的扫描密度值的比值用以表示TLR2、TLR4和TNF-α的相对表达水平. 结果 病理观察结果显示,对照组小鼠的肺组织结构正常;正常小鼠感染烟曲霉菌后,小鼠的肺组织有炎症细胞浸润、出血等炎症反应,但未见孢子萌芽生成菌丝;而IPA模型小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润、肺泡塌陷伴随出血,孢子聚积并萌芽生成菌丝.8、24、48 h 3个时间点的TLR4和24、48 h两个时相点的TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05),而TLR2在烟曲霉菌感染的正常小鼠和IPA模型小鼠肺组织中呈现低表达,但24、72 h时相点的TLR2在IPA模型小鼠的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05). 结论 TLR4及其下游分子TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中低表达,在组织病理镜检中可见肺曲霉病典型肺组织病理损伤和孢子生成菌丝.     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。     

重组人干扰素α-2b阴道泡腾片联合微波治疗慢性宫颈炎伴HPV感染的临床研究

目的:探讨重组人干扰素α-2b阴道泡腾片联合微波治疗慢性宫颈炎伴HPV感染患者的临床效果.方法:选取2018年6月-2020年6月就诊于淅川县人民医院的90例慢性宫颈炎伴HPV感染患者的临床资料,按随机数字表法分为对照组(n=45例)与观察组(n=45例).所有入院患者均给予常规治疗,在常规治疗基础上给予对照组患者重组人干扰素α-2b阴道泡腾片治疗,观察组在对照组基础上联合微波治疗.两组均治疗3 m,观察两组患者临床效果,比较治疗前、治疗3 m的炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素细胞-6(IL-6)]、及HPV转阴情况.结果:与对照组相比,观察组治疗总有效率更高,且差异有统计学意义(P＜0.05);治疗3 m,两组TNF-α、IL-6水平较治疗前降低,且观察组比对照组更低,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗3 m,观察组HPV转阴率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:微波联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾片治疗可减轻慢性宫颈炎伴HPV感染患者的炎症,提升HPV转阴率,疗效显著.     

表达HIV-1 gag蛋白重组乳酸乳球菌株的建立及其在小鼠体内定植的研究

目的 构建表达HIV-1 gag的重组乳酸乳球菌,并分析重组菌在小鼠体内的定植情况.方法 将HIV-1 gag克隆至原核表达质粒pMG36e,重组质粒pMG36e-gag电转乳酸乳球菌,SDS-PAGE和Western blot法检测其在乳酸乳球菌中的表达.以109个重组菌给小鼠口服,对照组口服PBS.口服后第1、3、5、7、9、11天分别取小鼠的胃、小肠和大肠,采用稀释滴种法测定小鼠胃、肠道内重组菌的数量.结果 酶切和DNA测序表明gag已克隆入pMG36e.SDS-PAGE在预期位置检测到蛋白条带,Western blot分析证实其为gag蛋白.重组菌定植实验表明,第1、3天在胃肠均有一定量重组菌,且大肠中重组菌数量多于胃和小肠,随后胃肠中重组菌均迅速减少,仅在大肠中仍有一定量的重组菌,第11天时胃肠仅分离到极少量的重组菌.结论 本研究获得胞内表达HIV-1 gag前体蛋白Pr55的重组乳酸乳球菌,其可在胃肠中短期存活,可作为预防HIV-1感染的候选疫苗.     

反义肿瘤坏死因子α对小鼠眼内单疱病毒感染影响的实验研究

目的观察局部使用肿瘤坏死因子α反义寡核苷酸（TNF-α-ASON）对小鼠眼内单纯疱疹病毒（herpes simplex virus,HSV）-1感染的影响。方法将HSV-1注入小鼠前房建立动物模型。分别于建模前1d,建模后1d和4d结膜下注射TNF-α-ASON和PBS。8d和10d后观察两组小鼠眼部的炎症改变,测定病毒复制和眼内TNF-α含量。结果与对照组相比,8d时实验组葡萄膜炎发病率和眼内TNF-α含量显著降低（P〈0.01）,眼内HSV-1滴度无明显改变;10d时葡萄膜炎发病率和眼内HSV-1滴度都显著升高。结论局部使用TNF-α-ASON可以显著降低HSV-1感染小鼠眼内TNF-α含量,降低视网膜炎发病率。TNF-α在眼内具有抑制HSV-1复制的作用。     

以沙门氏菌菌毛为载体的重组HIV-1 447-52D表位疫苗的构建和毒力检测

目的 构建菌毛上表达HIV-1 447-52D表位的减毒Salmonella typhimurium ST14028-3b aroA-44752D,并对其毒力进行检测.方法 利用同源重组技术,将447-52D表位整合至沙门氏菌细聚合菌毛上,Western blot检测其表达情况,通过刚果红结合实验分析外源表位对菌毛吸附能力的影响.感染动物后检测重组菌的毒力及其在小鼠体内的分布.结果 重组菌的嵌合基因片段测序结果和嵌合蛋白的表达分析表明,重组菌菌毛上成功表达外源447-52D表位.重组菌携带外源表位后对刚果红吸附的能力没有改变,不影响菌毛的正常生物学活性.动物感染实验结果显示,重组菌灌胃感染BALB/c小鼠的LD50为1.45×109 CFU,与野生型减毒株相似,且重组菌可以有效地分布于感染小鼠的派氏淋巴结和脾脏中.结论 成功构建菌毛携带HIV-1 447-52D表位的减毒Salmonella typhimurium ST14028-3b aroA-44752D.菌毛携带外源表位后不影响减毒菌的毒力和并在体内分布,有望作为为口服HIV-1疫苗的候选并对其他病原体表位疫苗的研究提供了新的思路.     

烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活

目的研究天然免疫NOD1信号通路在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中是否得以激活。方法小鼠分为正常对照组和感染组,感染组小鼠经鼻滴入烟曲霉菌孢子24 h、48 h、72 h后分别处死,碾碎肺组织平板培养以检测其肺组织烟曲霉菌负荷,观察肺组织病理学改变,RT-PCR检测NOD1及RIP2 mRNA表达量、Western Blot检测胞核NF-κBp65和胞浆TNF-α在小鼠肺组织中的含量。结果①感染组小鼠肺组织48 h时Af负荷达最高且可见严重的充血和出血,有大量的炎症细胞浸润,72 h时Af负荷迅速下降且未见菌丝形成,仅见轻微的充血、出血和炎症反应;正常组烟曲霉菌培养阴性且肺组织结构正常;②RT-PCR及Western Blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点NOD1 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κBp65和TNF-α的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),前三者均在48 h表达最高,TNF-α在72 h表达最高(P<0.05)。结论NOD1信号通路在烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中得以活化,其介导的天然免疫对抗烟曲霉菌感染和保护小鼠肺组织起了一定的作用。     

单纯疱疹病毒2型糖蛋白D和CCL19佐剂融合重组DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果

目的通过比较简单混合和融合重组的单纯疱疹病毒2型糖蛋白D(herpes simplex virus type 2 glycoprotein D, HSV-2 gD)联合分子佐剂CCL19的DNA疫苗对免疫小鼠的免疫应答及免疫保护效果的差异, 揭示融合重组疫苗的保护作用。方法利用基因重组技术构建HSV-2 gD和CCL19单独表达及融合表达的DNA疫苗, 经测序、Western blot和ELISA验证后, 肌肉注射免疫BALB/c小鼠两次, 免疫后定期收集血清和阴道灌洗液, 分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞及直肠组织。通过终点法ELISA、体外中和试验、免疫组织化学染色、趋化试验、阴道攻毒试验、荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度, 比较两种形式的疫苗免疫后小鼠的体液免疫、细胞免疫应答和免疫保护作用的差异。结果融合重组的pgD-IZ-CCL19质粒可在体外正常表达gD蛋白和CCL19蛋白, 但pCCL19-IZ-gD质粒的CCL19蛋白表达量比pgD-IZ-CCL19少。免疫pgD-IZ-CCL19的小鼠能产生比pgD+pCCL19组更高水平的血清IgG抗体、阴道灌洗液IgA...     

小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-Ⅱ核酸疫苗中的应用

目的：构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）DNA疫苗免疫效果的影响.方法：以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA.采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性.然后用其与HSV-ⅡgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-Ⅱ DNA疫苗免疫效果的影响.结果：成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-ⅡgDNA疫苗的免疫效果.结论：小鼠MIP-1α可作为HSV-Ⅱ gD DNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-Ⅱ DNA疫苗提供一定的依据.     

人乳头瘤病毒HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫的效果测定

为观察人乳头瘤病毒 6b型 (HPV6b )的重组减毒沙门菌载体疫苗粘膜免疫小鼠的免疫效果及探讨研制治疗尖锐湿疣的治疗性粘膜疫苗的机制 ,我们用构建的HPV6b重组减毒沙门菌粘膜免疫BALB/c小鼠 ,检测了阴道冲洗液中特异的SIgA、血清中IgG、T淋巴细胞增殖以及载体疫苗在机体内的稳定性。结果表明 ,粘膜免疫后 ,实验组与对照组相比较 ,阴道冲洗液中抗HPV6bL1的SIgA差异显著 ,实验组血清中抗HPV6bL1IgG水平低 ,T淋巴细胞增殖明显 ,疫苗在小鼠体内持续存在4 0d以上。研究结果提示我们所构建的重组减毒沙门菌粘膜免疫小鼠后 ,阴道粘膜局部能分泌特异的抗人乳头瘤病毒HPV6bSIgA ,也能激发细胞免疫 ,且此疫苗在小鼠体内能稳定存在。     

重组人干扰素α-2b喷雾剂联合卡介菌多糖核酸穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣疗效观察

目的评价重组人干扰素α-2b喷雾剂外用联合卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣的临床疗效及安全性。方法120例颜面部多发性扁平疣患者,其中男性42例,女性78例;年龄12～48岁,平均年龄24.5岁。根据随机化原则分为A、B、C 3组各40例,A组为穴位内注射卡介菌多糖核酸注射液组,B组为外用重组人干扰素α-2b喷雾剂组,C组为卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射联合外用重组人干扰素α-2b喷雾剂组。6周、3个月后分别进行对比疗效观察及复发率观察。结果3组总有效率分别是57.5%、52.5%、95.0%;复发率分别是33.33%、50.00%、3.85%,C组疗效最高、复发率最低,优于A、B组（P〈0.05）;观察期间未见严重的不良反应。结论重组人干扰素α-2b喷雾剂外用联合卡介菌多糖核酸注射液穴位内注射治疗颜面部多发性扁平疣疗效显著,复发率低,不良反应少,值得临床推广使用。     

重组BCG联合抗痨药物对小鼠结核病治疗作用的实验研究

目的：探讨携带编码人天然颗粒溶素（Granulysin，GLS）和小鼠IL-12基因的重组BCG与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法：将结核分枝杆菌H37Rv感染的BALB／c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组卡介苗（BCG）、INH＋PZA和重组BCG联合INH＋PZA治疗，于第一次治疗后3个月，处死小鼠，检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-7．肺、脾组织中GLS表达，同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果：重组BCG联合INH＋PZA治疗组肺、脾组织荷菌量（10gCFU／g）比重组BCG和INH＋PZA治疗组显著降低；重组BCG和INH＋PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低。重组BCG组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组。重组BCG联合INH＋PZA治疗组和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组。重组BCG组用免疫组化检测到小鼠肺及脾组织中GLS的表达。重组BCG和INH＋PZA组病变轻且局限，生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主，病变广泛。重组BCG联合INH＋PZA治疗组肺组织病变最轻。结论：GLS／IL-12重组BCG对小鼠结核病有一定免疫治疗作用；重组BCG联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效。     

重组人干扰素α-2b抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及迁移作用

背景:重组人干扰素α-2b是具有抗病毒、抗增殖活性、抗肿瘤、免疫调节等功能活性的细胞因子,对瘢痕组织具有一定的预防及治疗作用.目的:探索重组人干扰素α-2b作用于瘢痕成纤维细胞的效果,观察其对瘢痕成纤维细胞增殖及迁移能力的影响.方法:体外培养瘢痕成纤维细胞至对数增长期,采用0,5000,10000,20000 IU/m...