浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的：确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β－内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法：肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为ESBLs细菌，PCR扩增其β－内酰胺酶编码基因片段，克隆后双脱氧链终止法测定苷酸序列并确定亚型，重组细菌表型鉴定。结果：E3株同时产SHV和TEM型两种β－内酰胺酶，其中SHV基因片段含812个核苷酸，编码266个氨基酸，为SHV－11型β－内酰胺酶；TEM基因片段含973个核苷酸，编码288个氨基酸，为TEM－1型β－内酰胺酶。含TEM－1和SHV－11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论：E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV－11和TEM－1两种广谱β－内酰胺酶，广谱β－内酰胺酶的种类和数量可影响ESBLs的表型检测结果。     

肺炎克雷伯菌TEM-1编码基因的克隆测序及基因定位

目的 以我院临床分离的一株肺炎克雷伯菌99—799株为研究对象，对其所产β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。方法 采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blaTEM扩增获得β-内酰胺酶编码基因的片段，克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GenBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。结果 肺炎克雷伯菌99—799株所含β-内酰胺酶基因型为TEM型，与TEM-1编码基因序列完全相同，且同时位于细菌150 bp和80bp的大、小质粒上。结论 重庆地区临床分离肺炎克雷伯菌有TEM—1-β内酰胺酶基因亚型的存在.     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因研究

目的了解大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因存在状况。方法采用PCR检测浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株21种β-内酰胺酶基因。结果检出TEM、SHV、LEN、CTX-M-1 cluster、CTX-M-9 cluster、OXA-1 cluster、OXA-10 cluster、LAP、DHA、ACT-1等β-内酰胺酶基因，并在国内外首次从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中发现LAPβ-内酰胺酶基因。结论浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因携带率高。存在新的β-内酰胺酶基因（LAP）。     

肺炎克雷伯菌16种β内酰胺酶基因检测研究

目的了解20株仅对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对20株KPN菌用PCR法进行16种13内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。结论该20株KPN菌β内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

鲍氏不动杆菌致呼吸机相关性肺炎的耐药性分析及其-内酰胺酶基因研究

目的探讨鲍氏不动杆菌（ABA）致呼吸机相关性肺炎（VAP）的耐药性,并对其β-内酰胺酶基因研究分析。方法收集明确诊断19例ABA致VAP的细菌,采用纸片扩散法测定32种抗菌药物的敏感性;采用三维试验检测ESBLs、AmpC酶、Metalloβ-内酰胺酶存在情况;采用PCR法检测β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶、碳青烯酶、AmpC酶等21种基因。结果19株ABA菌TEM阳性19株,OXM-23群阳性10株,ADC阳性14株,其余基因均为阴性;半数以上菌株同时携带TEM、OXM-23、ADC。结论ABA致VAP的耐药性强,多数同时携带3个β-内酰胺酶耐药基因,对β-内酰胺类抗生素高度耐药。     

氨苄西林耐药流感嗜血杆菌β-内酰胺酶基因分析

目的了解深圳市宝安区氨苄西林耐药流感嗜血杆菌β-内酰胺酶基因分布特征,为临床合理用药提供依据。方法用K-B法检测氨苄西林耐药性,头孢硝噻酚纸片法检测β-内酰胺酶,TEM型和ROB-1型基因采用PCR扩增和序列分析法。结果检出62株氨苄西林耐药流感嗜血杆菌,其中60株β-内酰胺酶阳性。60株β-内酰胺酶阳性株中58株检出TEM-1型基因,占96.7%,1株检出ROB-1型基因,占1.7%,1株未检出基因型。结论产TEM-1型β-内酰胺酶是流感嗜血杆菌主要耐药机制,但β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药株的出现更值得关注。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析

目的研究沈阳地区产超广谱β-内酰胺酶（extended—spectrumβ-lactamases,ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型分布。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增分离31株产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株的TEM型、SHV型及CTX—M-1型ESBLS基因,1％琼脂糖凝胶电泳,回收DNA片段,测序分析各基因型在耐药的产超光谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株中的分布。结果TEM-1、SHV-1、CTX—M-1基因扩增阳性率分别为58．0％、90．3％、16．1％。结论分离的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌存在多个耐药基因。     

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

目的 了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况.方法 收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR.法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCIL产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析.结果 经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶.携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种.结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播.     

儿童流感嗜血杆菌氨苄青霉素耐药基因的研究

目的研究儿童流感嗜血杆菌（HI）对氨苄青霉素的耐药状况，并从分子生物学的角度研究其耐药机制。方法对儿童痰标本及咽拭子中分离的55株HI菌株进行β-内酰胺酶检测，PCR扩增β-内酰胺酶基因TEM-1、ROB-1的编码基因，并进行核酸序列测定与分析。结果分离的55株HI有17株产生β-内酰胺酶，并对氨苄青霉素耐药，耐药率30．9％。未发现β内酰胺酶阴性而对氨苄青霉素耐药的菌株。PCR法检测产酶HI中β-内酰胺酶基因TEM-1阳性率为100％，不产酶HI中无TEM-1阳性者。在32株菌株（17株产酶菌和15株不产酶菌）中未检测到ROB-1基因。结论流感嗜血杆菌是急性下呼吸道感染的主要病原体之一，对氨苄青霉素的耐药率较高。流感嗜血杆菌对氨苄青霉素的耐药主要由质粒介导的TEM-1型β-内酰胺酶所致。