完全动脉化辅助性肝移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的　探讨辅助性肝移植门静脉动脉化加肝动脉血供对急性肝功能衰竭治疗作用。方法　切除85 %肝脏诱导大鼠肝衰 ,将 30 %肝脏移植于残肝下方 ,通过右肾动脉行移植肝门静脉动脉化并建立肝动脉血供。观察肝衰组和移植组大鼠存活率、肝功能和结构改变。结果　移植组 2周存活率为 73 3% ,肝衰组 4 8h存活率 0 % (P <0 0 5 )。移植术后 14d残肝明显增生 ,肝功恢复正常 ,移植肝萎缩纤维化。结论　辅助性肝移植门静脉动脉化为急性肝功衰竭提供了有效的支持作用 ,使原肝再生功能恢复而移植肝萎缩     

猪肝移植时无心跳供体耐受热缺血时间的实验研究

目的探讨心脏停搏供体猪肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限。方法建立小型猪原位肝移植动物模型并按移植前供肝经历心脏停搏时间0,15,30,45 min分为四组。观测肝移植术后各组肝功能、肝脏病理和肝脏能量代谢改变。结果肝脏能量代谢等指标的改变在供肝无心跳热缺血时间30 min前是可逆的,随无心跳热缺血时间的延长逐渐向不可逆演变。结论在本实验条件下,小型猪心脏停搏供体肝移植时供肝耐受无心跳热缺血损伤的安全时限约为30min。     

大鼠部分肝移植后早期肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下,肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子在大鼠部分肝移植后的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立Lewis大鼠50%部分原位肝移植模型。实验组分为：冷缺血1h、8h和16h组,每组20只。观察各组的生存率,并在术后90min、1、2、4和7d收集标本。检测不同冷缺血时间肿瘤坏死因子-α、白介素-6等细胞因子的表达。检测溴脱氧尿核苷摄取观察肝细胞DNA合成情况。【结果】共行60例大鼠部分肝脏移植,肝移植手术的成功率是100%。冷缺血1h、8h组的部分肝移植物存活率均为100%（〉7d）。冷缺血16h后部分肝移植组存活率为20%（〉7d）。与冷缺血1h相比,8h和16h的冷缺血损伤诱导大鼠部分肝移植物白介素-6（P〈0.05）和肿瘤坏死因子-α（P〈0.05）等因子表达增加。与冷缺血1h相比,冷缺血8h组的移植肝在移植术后24h摄取溴脱氧尿核苷明显增多（P〈0.05）。冷缺血16h组的移植肝在移植术后24h仅有少数溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞存在。【结论】肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子的上调表达在启动和完成部分肝移植后早期肝脏再生的过程中非常重要。轻度（1h）和中度（8h）的冷缺血损伤可以启动并完成部分肝移植物移植后的肝脏再生,但重度（16h）的冷缺血损伤即使在早期启动信号存在的情况下,不能完成移植后的肝脏再生。     

大鼠部分肝移植后早期肝内细胞因子的变化

 【目的】 研究不同冷缺血损伤条件下，肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子在大鼠部分肝移植后的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】 建立Lewis大鼠50％部分原位肝移植模型。实验组分为： 冷缺血1 h、8 h和16 h组，每组20只。观察各组的生存率，并在术后90 min、1、2、4和7 d收集标本。检测不同冷缺血时间肿瘤坏死因子-α、白介素-6等细胞因子的表达。检测溴脱氧尿核苷摄取观察肝细胞DNA合成情况。【结果】 共行60例大鼠部分肝脏移植，肝移植手术的成功率是100％。冷缺血1 h、8 h组的部分肝移植物存活率均为100％(＞ 7 d）。冷缺血16 h后部分肝移植组存活率为20％(＞ 7 d）。与冷缺血1 h 相比，8 h和16 h的冷缺血损伤诱导大鼠部分肝移植物白介素-6（P<0．05）和肿瘤坏死因子-α（P<0．05）等因子表达增加。与冷缺血1 h相比，冷缺血8 h组的移植肝在移植术后24 h摄取溴脱氧尿核苷明显增多（P<0．05）。冷缺血16 h组的移植肝在移植术后24 h仅有少数溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞存在。【结论】 肿瘤坏死因子-α和白介素-6等细胞因子的上调表达在启动和完成部分肝移植后早期肝脏再生的过程中非常重要。轻度（1 h）和中度（8 h）的冷缺血损伤可以启动并完成部分肝移植物移植后的肝脏再生，但重度（16 h）的冷缺血损伤即使在早期启动信号存在的情况下，不能完成移植后的肝脏再生。     

肝移植供肝来源的现状与进展

肝脏移植已经成为治疗终末期肝病最有效的治疗措施。随着等待肝脏移植的患者数量的不断增加,供肝短缺的问题越来越严重,已成为目前制约肝移植进一步发展的最关键因素,因此,拓展供肝来源成为目前肝移植临床的重点。活体肝移植在尸体供肝受限的情况下可以很好地扩展供肝来源,且活体供肝具有活力强、冷缺血时间短等优势;劈裂式肝移植可增加15~28%的供肝数量,有望成为解决供肝短缺的主要手术方式之一;脑死亡供者在西方国家是移植器官的主要来源,而在我国由于受传统观念的影响及尚未确立脑死亡法,脑死亡供者器官移植的开展尚有许多问题亟待解决;此外,边缘供肝,包括脂肪变性肝脏、HBs Ag阳性肝脏、超过60岁的高龄供者捐献的肝脏、冷缺血时间超过14 h的肝脏等均可用以缓解日益突出的供肝短缺矛盾。本文就目前移植供肝来源的现状与进展做一综述。     

辅助性肝移植门静脉动脉化治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的 探讨门静脉动脉化异位辅助肝移植对大鼠急性肝功能衰竭的治疗作用和肝动脉血供对移植肝早期功能的影响。方法 将切除85％肝脏的急性肝功能衰竭大鼠随机分为三组：A组（n=20)，异位辅助肝移植门静脉动脉化加肝动脉血供建立；B组（n=20)，异位辅助肝移植门静脉动脉化；C组（n=10)，为对照组。观察肝衰组和移植组大鼠生存情况、肝功能变化、残肝和移植肝病理结构改变以及肝动脉血供对移植肝早期功能影响。结果 A组和B组大鼠2周生存率分别是85．7％和64．3％，C组大鼠48h存活率为0。移植肝再灌注后，A组胆汁分泌率比B组明显增高（P＜0．05），术后2周内，A组血清ALT、GGT、Tbil值显著降低（与B组比较，P＜0．05）。移植术后14天，A组和B组残肝细胞都明显增生，肝功能恢复正常，而移植肝开始萎缩，肝细胞变性，汇管区有淋巴细胞浸润。结论 辅助肝移植门静脉动脉化为急性肝功能衰竭提供了有效的支持作用，使原肝再生，肝功能恢复正常，而移植肝逐渐萎缩丧失功能。在大鼠辅助肝移植中，肝动脉血供有助于改善移植肝早期功能，防止术后胆道并发症的发生。     

辅助性肝脏移植的免疫状态与血流动力学研究

目的 :探讨辅助性肝脏移植免疫学与血流动力学特点 ,从成功的辅助性肝脏移植中寻找解决移植物萎缩问题的对策。方法 :分析 3例辅助性肝脏移植患者的免疫学指标、病理学资料、血流动力学参数。结果 :辅助性肝脏移植患者免疫抑制剂浓度相对较低 ,排斥反应次数少 ,强度低。存活良好的辅助性肝移植患者移植肝无明显萎缩 ,移植肝门静脉流速和肝动脉流速略高 ,自身肝门静脉流速升高 ,肝动脉流速降低。结论 :辅助性肝脏移植术后处于免疫低反应状态。辅助性肝脏移植的移植物不萎缩的重要因素是保证充分的门静脉血供和肝动脉血供 ,血流重建的关键是吻合口径的控制和吻合部位的选择 ,不排除低浓度免疫抑制剂对移植肝脏副作用较小的可能     

热休克蛋白70对大鼠心脏停搏供体肝移植的保护作用

目的：采用心脏停搏供体大鼠原位肝移植模型,观察热休克蛋白70（HSP70）对心脏停搏后不同时间的供肝缺血再灌注损伤的影响。 方法：以缺血预处理方法诱导大鼠肝脏组织产生HSP70,以预处理(IP)与否及供体心脏停搏45 min或60 min的不同,将供体大鼠分为4组(IP-45,IP-60,C-45和C-60)。于肝移植术后1 h采血检测肝功能,术后1 h及7 d切取肝脏,观察肝脏病理学改变,并观察各组大鼠术后存活时间。结果：缺血预处理后24~48 h,肝组织HSP70表达明显增强;肝移植术后1 h,血清ALT和AST水平IP组明显低于对照(C)组（P<0.05）;术后7 d,IP组移植肝光学显微镜下肝小叶结构完好,汇管区有少量淋巴细胞浸润,C组移植肝则出现了较多的肝细胞坏死和气球样变。C-45和C-60组1周存活率分别为12.5%和0;而IP-45和IP-60组1周存活率分别为62.5%和37.5%。 结论：HSP70明显改善术后肝脏功能和减轻肝脏病理学改变,显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率,HSP70对心脏停搏供体肝移植缺血再灌注损伤具有明显保护作用。     

冷缺血损伤后大鼠移植肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下,肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)等细胞因子在大鼠移植肝内的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立大鼠原位肝移植模型。实验分为:冷缺血1h组、冷缺血16h组、假手术对照组。观察各组的生存率,并在术后0、1、2、4、16、24、48、72h收集标本,检测TNF-α、IL-6等细胞因子的表达。免疫组化检测肝细胞摄取溴脱氧尿核苷情况。对冷缺血1h组和冷缺血16h组在移植后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数进行分析。【结果】冷缺血损伤1h、16h肝移植组和假手术组存活率均为100%(>14d)。与冷缺血1h相比,冷缺血16h组大鼠移植肝内TNF-α、IL-6等细胞因子表达明显增加,持续的时间也延长到移植后24h以上。移植术后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数也明显增多(P<0.05)。【结论】重度冷缺血损伤启动大鼠肝移植后的肝脏再生,修复组织损伤。与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似,TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中也非常重要。     

供肝原位灌注、快速切取及修整技术在临床肝移植中的应用

目的　探讨具有临床应用价值的供肝快速切取及修整方法。方法　在 4例猪动物实验基础上 ,共进行 9例人原位灌注供肝快速切取。结果　成功获取可以利用的 9个肝脏 ,修整后行临床肝移植 9例。供肝热缺血时间平均为 4min ,冷缺血时间平均为 10h。 9例肝移植通血后 10min内有金黄色胆汁流出 ,肝移植术后短期无严重并发症发生。结论　原位灌注供肝快速切取的方法 ,可充分利用供体器官 ,缩短热缺血时间 ,提高移植器官的保存质量及功能。     

供体肝缺氧时间对肝移植大鼠生存率的影响

目的: 研究肝移植围手术期的缺氧损伤对肝移植大鼠生存率的影响.方法: SD大鼠随机分为4组,对照组:不进行低氧处理的原位肝移植组;A组:50只,供肝大鼠先进行10 min的低氧适应后在低氧处置下按传统的Kamada法行供肝切取;B组:40只,低氧处置同A组,但供肝切取按改进的取肝法,即不过度游离肝动脉,于灌肝后离断肝动脉.C组:15只,假手术组.观测各组大鼠手术后24 h和1 w的生存率.结果: 在低氧条件下,采用改进的快速取肝法手术的B组与采用常规的Kamada取肝法的A组大鼠相比,B组大鼠供肝切取时间显著缩短,一周生存率明显提高,但仍低于对照组的一周生存率.结论: 肝移植大鼠一周存活率与供肝的实际热缺血时间呈负相关.肝移植围手术期中各种因素引起的肝脏缺氧是导致供肝实际热缺血损伤的主要原因.     

实验性大鼠原位肝移植供肝热缺血损伤研究

目的:探讨肝移植中供肝热缺血再灌注损伤发生机制。方法:建立大鼠动脉化肝移植胆道外引流模型,测定术后24h移植肝组织学、肝功能和移植肝细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA转录水平的变化。结果:随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,血清ALT、AST、LDH、GGT、DBIL和ICAM-1mRNA转录水平显著升高。结论:肝移植中供肝热缺血主要损伤肝细胞,血清ALT、AST、LDH是反映供肝热缺血造成肝细胞损伤的指标。ICAM-1可能是导致移植肝缺血再灌注时肝细胞损伤的主要因素。     

冷缺血损伤后大鼠移植肝内细胞因子的变化

【目的】研究不同冷缺血损伤条件下，肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素-6（IL-6）等细胞因子在大鼠移植肝内的变化规律与肝脏再生的关系。【方法】建立大鼠原位肝移植模型。实验分为：冷缺血1h组、冷缺血16h组、假手术对照组。观察各组的生存率，并在术后0、1、2、4、16、24、48、72h收集标本。检测TNF-α、IL-6等细胞因子的表达。免疫组化检测肝细胞摄取溴脱氧尿核苷情况。对冷缺血1h组和冷缺血16h组在移植后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数进行分析。【结果】冷缺血损伤1h、16h肝移植组和假手术组存活率均为100％（〉14d）。与冷缺血1h相比，冷缺血16h组大鼠移植肝内TNF-α、IL-6等细胞因子表达明显增加，持续的时间也延长到移植后24h以上。移植术后48h溴脱氧尿核苷染色阳性的肝细胞计数也明显增多（P〈0．05）。【结论】重度冷缺血损伤启动大鼠肝移植后的肝脏再生，修复组织损伤。与大鼠肝切除后诱导肝再生的机制相似，TNF-α、IL-6等细胞因子在移植后肝脏再生的早期启动过程中也非常重要。     

新辅助性原位部分肝移植动物模型的建立

目的 建立一种新的猪辅助性部分原位肝移植模型。方法 将供肝左叶在体外修肝时切除,右叶供肝作为移植肝。切除受肝左外叶,右叶供肝肝上下腔静脉与受肝肝上下腔静脉行端侧吻合,供肝门静脉与受肝门静脉行端侧吻合,受体脾动脉在结肠后与供体肝动脉端端吻合,胆总管置管外引流。结果 共进行移植模型5例,成功4例,成功率达80％,模型血流动力学稳定。结论 本移植术式在体外转流下行全肝血流阻断,门静脉淤血明显减轻,阻断时间缩短,可以有效防止受体肝的缺血再灌注损伤。血管处理简单,吻合质量高。术后出血少。成功率高,值得推广。     

肝移植术后早期肝动脉缺血与胆道并发症及肝动脉介入治疗的价值

目的 探讨肝移植术后早期肝动脉缺血对胆道并发症发生和预后的影响,以及早期肝动脉介入治疗的价值.方法 自2003年10月至2007年6月,在中山大学附属第三医院收治720例原位肝移植(OLT)患者中,共有32例在移植术后4～65(25±15)d彩超发现肝动脉缺血并经肝动脉造影(DSA)和(或)CT肝动脉成像证实,其中肝动脉狭窄(HAS)30例,肝动脉血栓(HAT)2例.32例中,20例接受了肝动脉介入治疗.以再次肝移植及患者死亡为观察终点,随访32例患者的临床转归.结果 20例(62.5%)发生胆道并发症,包括单纯胆总管狭窄2例,肝内外胆管狭窄13例,肝内胆管狭窄5例,同时合并胆漏2例、胆汁瘤4例、胆源性肝脓肿3例.20例中,8例为HAS接受了成功的肝动脉介入治疗者,但治疗时间均在发现HAS 2周后;10例为HAS未接受肝动脉介入治疗者;1例为HAT溶栓开通者;1例为HAS支架治疗失败者.20例患者中位随访时间262 d(22～517 d),死亡10例,再次肝移植6例,健在4例;6、12、24个月移植肝累积存活率分别为60.0%、34.9%和0.12例未发生胆道并发症,其中9例为HAS接受了成功的肝动脉介入治疗者,其治疗时间均在发现HAS 2周内;2例为HAS病检提示急性排斥反应者,均及时应用抗排斥药物冲击治疗;1例为HAT溶栓失败接受再次肝移植者.该12例中位随访时间952 d(14～1398 d),死亡3例,再次肝移植1例,健在8例;6、12、24个月移植肝累积存活率分别为75.0%、66.7%和66.7%.结论 肝移植术后早期肝动脉缺血是引起胆道并发症的重要原因,早期成功的肝动脉介入治疗有助于减少胆道并发症、提高患者的预后.     

热缺血损伤对大鼠无心跳供体供肝质量及肝移植预后的影响

目的 探讨不同热缺血时间条件下,无心跳供体(NHBD)的供肝质量与耐受热缺血的安全时限。方法实验动物大鼠按供肝热缺血时问分别为0、10、15、20、30、45、60min,随机分为7组(n=12)。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察肝移植术后各组组织形态、肝脏功能状态和能量代谢的恢复性变化,并统计生存时间。结果在热缺血30min以内,肝组织损伤仍处在可复性阶段,复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能。供肝热缺血损伤的时问与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。供肝经受30min以内热缺血损伤,各组移植术后生存天数无明显差异。热缺血时间超过45min后,虽仍可获较短期的存活,但移植术后的长期存活时间明显缩短。热缺血60min以后,供肝已发生不可逆性损伤。结论供肝组织三磷酸腺苷(ATP)含量、能荷(EC)水平和肝糖原含量、酶组织化学活性的变化以及移植术后上述指标恢复性的潜能叮作为衡量供肝质量的重要标准。大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。     

肝移植肝肾联合快速切取体会

目的：探讨提高和完善供肝切取修整与保存技术,提高器官利用率,减少肝移植术后近、远期并发症的发生。方法：2000年1月～2010年5月我院实施肝肾联合快速切取手术32例,快速切取技术采用原位腹主动脉、门静脉系统UW或HTK液灌注,整块切取肝脏、双侧肾脏。结果：供肝热缺血时间为3～6min,平均4min,冷缺血时间3～17h,平均8h,肝动脉解剖变异4例,术中肠系膜上静脉插管26例,门静脉插管4例,肠系膜下静脉插管2例。供肝均进行了肝移植手术,无肝脏弃用。1例行肝肾联合移植,1例行劈离式肝移植。结论：脑死亡供者肝肾联合快速切取技术能够可最大限度地缩短热缺血时间,有效避免变异血管损伤,为移植手术的成功提供了可靠的保证。     

多米诺肝移植术的临床应用

目的：介绍一种新的术式—多米诺肝移植手术（Domino liver transplantation）,也称为连续性肝移植（Sequential liver transplantation）,为解决供肝缺乏的问题开辟一条新路。方法：该术式是将供体肝脏移植到第一个受体,第一个受体的肝脏,再移植到第二个受体,第二个受体的肝脏,再移植到第三个受体（多米诺供肝和受体）,因多米诺供肝尽管存在某些代谢性障碍,但肝脏本身形态、结构、解毒、合成等大致正常,故特别适合先天性代谢性疾病、硬化性胆管炎、原发性肝癌的治疗。第一组：先天性代谢性疾病患者得到供肝,而其肝脏做为供肝,移植给硬化性胆道炎患者,该患者肝脏做为供肝,移植给原发性肝癌患者;第二组：布加氏综合征患者得到供肝,而其肝脏做为供肝,移植给肝硬化患者,该患者肝脏做为供肝,移植给肝癌患者;第三组：胆汁性肝硬化患者得到供肝,而其肝脏做为供肝,移植给酒精性肝硬化患者,该患者肝脏做为供肝,移植给原发性肝癌患者。结果：手术时间供者和受者手术时间分别为584min;680min;650min全部受者均顺利康复,受者出现肝动脉栓塞1例,胆道并发症1例,感染3例,急性排斥反应4例,无围手术期死亡。结论：多米诺肝移植术对解决供肝的缺乏非常有效,值得进一步临床探索。     

改良快速法供肝切取技术在大鼠肝移植中的应用

目的探讨能改善供肝质量的快速法供肝切取技术。方法 Sprague-Dawley大鼠60只,采用改良快速法切取供肝。观察术后1周存活率、供肝大体观和灌洗后肝脏病理形态学改变。结果共完成30次行改良快速法供肝切取的大鼠原位肝移植手术。供肝热缺血和冷缺血时间分别为0和8 min,供肝切取手术时间(24.2±1.2)min,供肝修整时间(16.8±1.5)min;受体手术时间(46.3±4.8)min,无肝期(21.6±2.3)min;手术成功率93.3%(28/30);术后1周存活率86.7%(26/30)。供肝灌注后质地柔软,色泽均匀呈土黄色,光镜下肝窦内未见红细胞。结论改良快速法供肝切取技术能够提高供肝质量和术后存活率。     

供肝的切取与修整技巧

目的 探讨肝移植术供肝的选择，切取和修整方法，方法 2001-12/2002-04月第四军医大学西京医院进行3例全肝移植术，供肝来源于颅脑外伤死亡的患者，根据国内外供体处理经验，采用合适的方法灌洗，切取供体肝脏，经修整后移植给受体，结果 3例供肝的热缺血时间分别为3，1.5和1min，切取时间分别为28，25和21min，肝脏保存时间分别为7.5,6.5和7.9h，术后1wk内肝脏功能恢复正常。结论 供肝的灌洗，修整及保存都是肝移植术中应重视的问题，我们设计的供肝处理方法，在实际应用中取得满意的效果，为移植手术的成功提供了可靠的保证。