厄洛替尼对非小细胞肺癌脑转移细胞PC14/B侵袭转移能力的抑制作用北大核心CSCD

目的研究厄洛替尼对非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移细胞PC14/B侵袭转移能力的抑制作用。方法 PC14/B细胞随机分为对照组及3个浓度实验组(厄洛替尼,1,5,25μmol·L^(-1)),噻唑蓝法和迁移小室法分别检测细胞活力及侵袭能力,免疫印迹法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素、波形蛋白的表达及蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果与对照组(0.75±0.09)比较,小中大3个浓度实验组均能显著抑制PC14/B细胞活力,比值分别为(0.63±0.06),(0.52±0.04),(0.38±0.03)。与对照组比较,3个浓度实验组均能显著降低侵袭力,上调E-钙黏附素表达,下调MMP2、MMP9及波形蛋白表达,并降低AKT磷酸化水平。结论厄洛替尼能显著的抑制PC14/B细胞侵袭转移能力,与下调MMPs表达、抑制EMT生成及降低AKT磷酸化水平有关。     

阿帕替尼上调miR-324-5p表达抑制结肠癌细胞的研究

目的 探讨阿帕替尼对结肠癌细胞生物学行为的影响和机制。方法 将结肠癌细胞HCT116分为对照(NC)组,低、中、高剂量组(0.5,1.0和2.0μmol·L^-1阿帕替尼),转染1组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-NC),转染2组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-324-5p)。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖率;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;荧光定量聚合酶链反应法检测miR-324-5p表达。结果 NC组,低、中、高剂量组、转染1组、转染2组HCT116细胞增殖率分别为(100.00±2.79)%,(94.29±1.74)%,(76.48±1.65)%,(51.48±1.75)%,(51.58±0.88)%和(93.64±3.90)%;迁移细胞数分别为(206.27±9.30),(163.23±3.84),(133.83±4.26),(104.32±5.72),(107.93±3.14)和(194.51±3.96)个;侵袭细胞数分别为(153.47±4.37),(121.4...     

阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤的抑制作用及机制研究

目的探讨抗血管生成药物阿帕替尼与常用化疗药物阿霉素联合应用对外周T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的抑制作用以及相关分子作用机制,为开发外周T细胞淋巴瘤治疗新方法提供实验依据。方法将Hut78细胞分为不同浓度药物处理组:阿帕替尼单药(10、20、40、60μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2、4μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1],分别作用72 h,采用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后对Hut78细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度阿帕替尼(10、20、40μmol·L^-1)作用24 h后对Hut78细胞周期的影响。采用蛋白印迹法检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后,Hut78细胞中PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bcl-2、Casepase-3、Bax的表达变化。结果不同浓度(10、20、40、60μmol·L^-1)的阿帕替尼作用72 h后,细胞抑制率分别为(13.42±2.19)%、(19.52±4.16)%、(31.49±3.16)%、(52.88±3.37)%,72 h的IC₅₀值为(59.34±0.31)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.116,P=0.018);不同浓度(1、2、4μmol·L^-1)的阿霉素分别作用72 h后,细胞抑制率分别为(15.82±3.23)%、(31.70±4.79)%、(42.34±5.23)%,72 h的IC₅₀值为(5.52±0.18)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.532,P=0.015);阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1]作用72 h的细胞抑制率分别为(51.70±2.09)%、(56.62±4.83)%、(61.35±1.79)%、(65.13±3.88)%。两药的联合指数(CI)<1,说明二者具有药物协同作用。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)作用24 h的细胞凋亡率分别为(15.65±0.75)%、(13.85±2.15)%、(23.60±1.30)%,阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24h的细胞凋亡率分别为(27.00±1.90)%、(33.20±2.30)%,各药物处理组与对照组[(6.10±0.90)%]比较,差异有统计学意义(χ²=16.251,P=0.006)。不同浓度(10、20、40μmol·L^-1)的阿帕替尼作用24 h后,G₀/G₁期细胞比例随浓度升高而升高[(49.27±0.45)%、(50.34±1.24)%、(59.16±1.23)%],S期细胞比例随浓度升高而降低[(42.81±2.22)%、(39.19±2.71)%、(34.08±1.01)%],各药物处理组与空白对照组[G₀/G₁期(39.26±0.65)%,S期(49.40±2.52)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)以及阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24 h后,PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、p-Akt和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平呈下降趋势,促凋亡蛋白Casepase-3和Bax的表达水平呈上升趋势,Akt蛋白的表达水平无明显变化,各药物处理组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2、Casepase-3及Bax蛋白表达水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿帕替尼可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,同时具有细胞周期阻滞作用,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活实现的。阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤细胞具有协同抑制作用。     

瑞香素调节Shh/Gli1信号通路对乳腺癌增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的 探究瑞香素调节音猬因子(Shh)/胶质细胞瘤转录因子1(Gli1)信号通路对乳腺癌增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法 将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞分为对照组、瑞香素组(40μmol/L瑞香素)、GANT61组(10μmol/L GANT61)、瑞香素+GANT61组(40μmol/L瑞香素和10μmol/L GANT61);CCK-8实验检测MDA-MB-231细胞增殖;划痕试验检测MDA-MB-231细胞迁移情况;在上述各分组细胞中加入1 mg/L阿霉素(Dox)处理48 h后CCK-8实验检测细胞化疗敏感性;流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞Shh/Gli1通路及凋亡相关蛋白表达水平。结果 与0μmol/L比较,随着瑞香素的剂量增加MDA-MB-231细胞存活率显著降低(P<0.05),而与40μmol/L比较,50μmol/L瑞香素处理MDA-MB-231细胞存活率无差异(P>0.05),因此选择40μmol/L瑞香素作为后续实验的干预条件;与对照组比较,瑞香素组和GANT61组OD4...     

安罗替尼通过调控NF-κB信号通路对脑胶质瘤细胞恶性表型的影响

目的 探究安罗替尼通过调控核因子κB(NF-κB)信号通路对脑胶质瘤细胞恶性表型的影响。方法 体外培养人脑胶质瘤T98G细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照药物,考察不同浓度（5、10、20μmol/L）安罗替尼对该细胞增殖、黏附、迁移、侵袭能力和上皮间质转化（EMT）相关蛋白[上皮钙黏着蛋白（E-cadherin）、神经钙黏着蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、纤维连接蛋白（FN）]表达的影响,并通过加入NF-κB信号通路抑制剂（BAY 11-7082）和激活剂（prostratin）来验证安罗替尼上述作用的可能机制。结果 5、10、20μmol/L的安罗替尼均可显著降低细胞的增殖活力（5μmol/L安罗替尼组除外）和迁移率,显著减少黏附细胞数和侵袭细胞数,显著上调E-cadherin蛋白的表达并下调N-cadherin、vimentin、FN蛋白的表达（P<0.05）,且20μmol/L安罗替尼的作用与阳性对照药物相当（P>0.05）;与10μmol/L安罗替尼比较,通路抑制剂可使细胞增殖、黏附、迁移、侵袭能力以及N-cadherin、vimentin...     

瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用及其机制研究

目的 探讨瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株 MDA-MB-231 的增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其潜在机制。方法 体外培养 MDA-MB-231 细胞,随机分为对照组和瑞香素 10,20,40 μg·mL^–1组。以 MTT 法检测细胞的增殖情况;通过克隆形成试验检测各组 MDA-MB-231 细胞克隆形成情况;划痕试验及 Transwell 观测细胞迁移和侵袭情况;Western blotting检测 Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4 蛋白表达量。结果 与对照组相比,瑞香素组(10,20,40 μg·mL^–1)显著抑制细胞增殖(P<0.05 或 P<0.01);瑞香素组(10,20,40 μg·mL^–1)可以抑制人乳腺癌细胞株 MDA-MB-231 的克隆形成(P<0.01);瑞香素组(20,40 μg·mL^–1)细胞的迁移能力和侵袭能力显著下降(P<0.01);瑞香素组(20,40 μg·mL^–1)细胞 Vimentin、...     

扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

筋骨草和茯苓配伍合用抑制乳腺癌细胞侵袭转移作用及初步机制研究

目的研究筋骨草和茯苓联合用药对高转移性乳腺癌MDA-MB-231(三阴型乳腺癌)和SK-BR-3(HER-2过表达乳腺癌)细胞侵袭转移的作用及分子机制。方法以筋骨草有效部位——总环烯醚萜类化合物和茯苓有效部位——三萜类化合物为研究对象。采用细胞黏附实验、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力。Western blot法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白和MAPK通路蛋白表达。结果筋骨草和茯苓合用对MDA-MB-231和SK-BR-3细胞的黏附、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用,配伍比例为10∶1时具有较好的协同效应。两药合用还可逆转乳腺癌细胞EMT,主要表现在上皮性标志物β-catenin、E-cadherin、ZO-1表达增加,间质性标志物Vimentin表达降低。进一步研究发现,两药合用明显降低p-ERK1/2、p-JNK和p-p38的蛋白表达。结论筋骨草和茯苓合用能有效地抑制高转移性乳腺癌MDA-MB-231和SK-BR-3细胞的侵袭和转移,作用机制可能与其调控MAPK通路,逆转肿瘤细胞EMT有关。     

丹参超临界提取物对肿瘤细胞的体外抑制作用及其机制

目的:研究丹参超临界提取物对肿瘤细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法研究丹参超临界提取物对HeLa细胞和MDA-MB-231细胞的抑制作用,ELISA法研究吉非替尼和丹参超临界提取物对HeLa细胞和MDA-MB-231细胞EGFR表达的影响。结果:MTT实验得出在用0.40,2.0,10.0,50.0μmol·L-1丹参超临界提取物干预2种细胞,抑制率分别为对HeLa细胞株的抑制率(%)分别为(5.5±0.15),(13.2±1.2),(22.4±2.0),(32.8±2.6),对MDA-MB-231细胞株的抑制率(%)分别为(10.2±0.9),(18.2±1.7),(28.1±2.2),(38.9±3.4);ELISA实验得出丹参超临界提取物对2种细胞EGFR的表达均有抑制作用,且成剂量依赖关系,并均弱于吉非替尼的抑制作用。结论:丹参超临界提取物能够抑制HeLa细胞和MDA-MB-231细胞的增殖,并且初步得出丹参超临界提取物抑制肿瘤细胞增殖与EGFR有关。     

滴滴涕对人大肠癌DLD1细胞上皮间充质转化的影响

目的探究滴滴涕(DDT)对人结直肠腺癌上皮细胞(DLD1)上皮间充质转化的影响及机制。方法DLD1细胞用DDT 0.01,0.1,1.0,10.0和100.0 nmol·L~(-1)处理48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR法检测E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA表达。Western蛋白质印迹法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路主要蛋白STAT3和p-STAT3的蛋白水平。用STAT3抑制剂WP1066(5μmol·L~(-1))处理,通过Western印迹法和实时荧光定量PCR法检测其对DDT诱导的STAT3/Snail1信号通路中p-STAT3、STAT3的蛋白水平和上皮间充质转化关键因子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA水平的影响。结果与正常对照组相比,DLD1细胞在DDT处理48 h后,细胞形态由卵圆形逐渐变为长梭形,E-钙黏着蛋白mRNA相对表达显著降低(P<0.01),为正常对照组的(42.4±2.8)%。N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA相对表达显著提高(P<0.01),为正常对照组的1.91±0.1倍和(1.5±0.2)倍。STAT3信号通路蛋白STAT3和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.01),为正常对照组的2.1和1.8倍。锌指转录因子Snail1的mRNA相对表达显著升高(P<0.01),是正常对照组的(1.5±0.1)倍。STAT3抑制剂WP1066 5μmol·L~(-1)处理后,锌指转录因子Snail1 mRNA的表达明显下调(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(56.3±0.9)%,同时抑制DDT诱导的E-钙黏着蛋白mRNA表达升高(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的2.5±0.1倍,N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA表达降低(P<0.01),分别为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(50.2±2.9)%和(61.6±6.1)%。结论 DDT可能通过STAT3/Snail1信号通路改变上皮间充质转化子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达,进而促进大肠癌细胞上皮间充质转化。