PIK3CA基因沉默对宫颈癌生物学特性影响及机制

目的 探讨磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)基因沉默对宫颈癌生物学特性的影响及其机制.方法 选取188例宫颈癌病人癌组织及癌旁组织标本,采用SP免疫组化法检测PIK3CA蛋白表达阳性率.取宫颈癌细胞株并细胞转染分为6组:空白(Blank)组、阴性对照(NC)组、上调PIK3CA表达(HA-PIK3...     

miR-152-5p对肝癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制

目的 探讨miR-152-5p对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 采用RT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞HepG2中miR-152-5p差异表达。将HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC mimics组、miR-152-5p mimics、NC inhibitor组和miR-152-5p inhibitor组,采用RT-PCR检测细胞中miR-152-5p的表达水平,采用CCK-8法和EdU法检测各组细胞的活力及增殖能力,利用流式细胞术及Western blotting检测各组细胞凋亡率以及细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3的表达水平。HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC inhibitor组、miR-152-5p inhibitor组、miR-152-5p inhibitor+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组,应用Western blotting、EdU法和流式细胞术检测细胞PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K(p-PI3K/PI3K)、AKT(p-AKT/AKT)的磷酸化水平、增殖...     

PIK3CA相关过度生长谱研究新进展

PIK3CA相关过度生长谱（PIK3CA-related overgrowth spectrum,PROS）是由于胚胎时期PIK3CA基因激活突变导致的遗传性疾病,属于嵌合体突变,是引起节段性过度生长的常见原因之一。由于PROS的异质性,其发病率被严重低估,因而此病的临床表现、诊断、管理尤其困难。通过对PROS的早期识别、诊断、PI3K/AKT通路异常的发病机制以及围绕该信号通路的治疗方法等研究进展进行总结,为临床针对PROS患者的诊治提供参考。     

PIK3CA基因与肿瘤发生发展的研究进展

PIK3CA是新近发现的一种体细胞突变的癌基因,其可能通过参与PI3K/AKT细胞信号转导途径调节细胞的生长和凋亡。目前关于癌基因PIK3CA与肿瘤的关系及其致瘤机制都成为人们研究肿瘤的一个热点。本文将就PIK3CA与肿瘤发生发展的关系及其致肿瘤机制的研究现状进行综述。1 PIK3CA基因及其蛋白1.1 PIK3CA PIK3CA基因是由Volinia等[1]1994年利用原位杂交技术检测到的,其定位于3q26·3,长34 kb,包含20个外显子,编码1 068种氨基酸,该组氨基酸产生一组长124 kD的蛋白。PIK3CA编码I类磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylino-sitol     

IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化

目的：探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法：50 ng/mL IL-6刺激 胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达, Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单 独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激 酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果：外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降 低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及 p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152 能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论：IL-6可能是通过 下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

PIK3CA基因的生物信息学分析

目的:应用生物信息学方法分析PIK3CA基因及其编码蛋白结构,为深入研究PIK3CA的生物学功能奠定基础.方法:利用在线生物信息学分析工具,分析PIK3CA结构和功能.结果:PIK3CA蛋白二级结构以α螺旋为主;三级结构有5个保守结构域包括C2、p85B、rbd、PI3Ka和PI3Kc,其他区域包括ATP结合位点、Ras结合位点、催化位点和激活位点.结论:PIK3CA无跨膜区为亲水蛋白,保守结构域及特殊位点参与细胞信号转导,某些区域突变参与肿瘤的发生,这些是研究PIK3CA参与肿瘤发生的机制及药物靶点筛选的结构基础.     

PIK3CA基因异常扩增对胶质瘤患者预后预测价值的研究

目的 探讨胶质瘤患者PIK3CA基因突变和扩增与临床结局相的相关性,为临床胶质瘤预后提供参考.方法 使用直接测序和实时定量PCR的方法,检测PIK3CA基因突变和异常扩增,并利用回归分析和相关性分析的方法分析二者与临床病例特性及结局的相关性,探讨二者与胶质瘤患者3年生存率的相关性.结果在50名胶质瘤患者中,有6例患者具有PIK3CA基因的突变,有41例患者具有PIK3CA基因的异常扩增.PIK3CA基因的异常扩增与磷酸化Akt有显著的相关性.在胶质瘤患者中,未发现PIK3CA基因的突变与其临床病例特性及临床结局的相关性.PIK3CA基因的异常扩增与胶质瘤患者的生存率具有显著的正相关性.胶质瘤患者的3年生存率分析显示,PIK3CA基因异常扩增的患者的3年生存率显著的低于无PIK3CA患者.结论 PIK3CA基因的异常扩增可能是胶质瘤患者中PI3K/Akt途径被激活的主要机制.PIK3CA基因异常扩增与胶质瘤患者预后差生存率低呈显著的正相关性.因此,PI3K/Akt途径可能成为胶质瘤治疗的有效治疗靶点.     

miR-365a-3p靶向调控JAK-STAT信号通路抑制三阴性乳腺癌细胞的恶性生物行为研究

目的 针对三阴性乳腺癌(TNBC)探究微小RNA(miRNA)-365a-3p对其恶性生物行为的影响并分析潜在的分子调控机制.方法 选取2018年6月至2019年12月该院收治的行外科手术切除治疗的TN-BC患者50例作为研究对象,收集TNBC组织和癌旁组织,并统计TNBC患者的肿瘤相关临床资料.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-365a-3p在组织和乳腺癌细胞中的表达水平,将miR-365a-3p模拟物(mim-ic)及阴性对照(NC)mimic转染至MDA-MB-453细胞后分别通过CCK-8实验、克隆平板形成、Transwell和划痕实验检测TNBC细胞的恶性生物行为.采用双荧光素酶报告基因实验预测miR-365 a-3 p靶通路,并对细胞质双面蛋白酪氨酸激酶(JAK)和信号传导及转录激活因子(STAT)蛋白进行定量检测.结果 TNBC组织及乳腺癌细胞系中miR-365a-3p表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且肿瘤越大、Ki67表达水平越高、浸润范围越深、存在淋巴结转移及TNM分期越差者miR-365 a-3 p表达水平越低,差异均有统计学意义(P<0.05).同时转染miR-365a-3p mimic后能显著抑制MDA-MB-468细胞株增殖、集落形成、迁移及侵袭能力.JAK与miR-365a-3p存在相同位点,且JAK-WT+miR-365a-3p共转染组荧光素酶活性与JAK-MUT+miR-365a-3p共转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05);此外miR-365a-3p mimics明显抑制JAK、STAT蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-365a-3p与TNBC肿瘤不良进展有关,并通过抑制JAK-STAT信号通路抑制TNBC细胞的恶性生物行为.     

MiR-31-3p脑胶质瘤靶基因预测及相关调控通路分析

目的 利用分子生物学和生物信息学技术平台对miR-31-3p脑胶质瘤靶基因及相关重要信号通路调节机制,进行分析,为了解miR-31-3p脑胶质瘤调控网络及后续功能验证提供理论基础.方法 利用荧光定量PCR技术,检测miR-31-3p在U87细胞中的表达量;合成miR-31-3p模拟物及抑制物,转染至U87细胞,进行链特...     

miRNA-375 靶向磷脂酰肌醇激酶-3 催化亚单位 α 对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨miRNA-375 靶向磷脂酰肌醇激酶-3 催化亚单位α（PIK3CA）对宫颈癌细胞增殖和 迁移的影响。方法 选取宫颈癌细胞系SiHa,分别转染miRNA-375 模拟基因、miRNA-375 抑制剂、对照模拟 基因及对照抑制剂,采用RT-PCR 法检测miRNA-375 表达,Western blot 检测PIK3CA 蛋白表达,MTT 法检 测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-375 与PIK3CA 的靶向 关系。结果 转染miRNA-375 模拟基因后miRNA-375 表达上调,PIK3CA 蛋白表达降低（P <0.05）;转染 miRNA-375 抑制剂后miRNA-375 表达降低,PIK3CA 蛋白表达增强（P <0.05）。转染miRNA-375 模拟基 因后SiHa 细胞增殖活性、迁移能力降低（P <0.05）;转染miRNA-375 抑制剂后SiHa 细胞增殖活性、迁移 能力增强（P <0.05）。miRNA 靶基因预测软件检测结果显示,miRNA-375 能作用于PIK3CA 3''-UTR。与转 染对照模拟基因比较,共转染miRNA-375 模拟基因与PIK3CA-WT 可使SiHa 荧光素酶活性降低（P <0.05）。 结论 miRNA-375 可抑制宫颈癌细胞增殖及迁移,其机制可能与靶向调控PIK3CA 有关。     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-485-3p调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性

目的 研究长链非编码RNAMALAT1对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响机制。方法 运用紫杉醇浓度梯度诱导法检测紫杉醇耐药乳腺癌细胞SK-BR-3;将si-NC组（转染si-NC）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、pc DNA组（转染pc DNA）、pcDNAMALAT1组（转染pc DNA-MALAT1）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-485-3p组（转染miR-485-3p mimics）、si-MALAT1+antimiR-NC组（共转染si-MALAT1和anti-miR-NC）、si-MALAT1+anti-miR-485-3p组（共转染si-MALAT1和anti-miR-485-3p）,均用脂质体法转染SK-BR-3/PR细胞;MTT法检测细胞IC50;Western blot检测细胞中P-gp、Bax、Bcl-2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MALAT1与miR-485-3p的结合力。结果 与紫杉醇敏感SK-BR-3细胞相比, SK-BR-3/PR细胞的IC50、MALAT1均上调,miR-485-3p下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。沉默MALAT1或过表达miR-485-3p均可下调SK-BR-3/PR细胞的IC50,下调P-gp和Bcl-2表达,上调Bax表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-485-3p是MALAT1的靶标。抑制miR-485-3p可逆转沉默MALAT1对SK-BR-3/PR细胞的IC50、P-gp、Bcl-2和Bax表达的影响,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 长 链非编码RNAMALAT1可调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与靶向miR-485-3p下调P-gp、Bcl-2,上调Bax有关。     

miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor）,YWHAQ干扰组（si-YWHAQ）,以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶...     

壳聚糖纳米粒介导的PIK3CA基因干扰对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的观察PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子处理胃癌细胞BGC823后,胃癌细胞BGC823侵袭能力的变化,研究壳聚糖纳
米粒子介导PIK3CA干扰在抑制胃癌侵袭转移中的应用价值。方法使用壳聚糖包被PIK3CA siRNA制备纳米粒子,纳米粒子
粒径在350 nm。用其处理胃癌细胞,通过western blot及PCR检测PIK3CA沉默情况,并通过Transwell实验观察细胞侵袭性的
变化。结果PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子可显著下调胃癌细胞BGC823中PIK3CA的表达（P<0.01）,并且可明显抑制胃癌
细胞的侵袭性（P<0.001）。结论通过壳聚糖纳米粒子介导的PIK3CA基因干扰可以显著降低胃癌细胞的侵袭能力。
     

miR-214-3p通过靶向调节p53增强胃癌细胞的转移能力

目的 观察miR-214-3p在胃癌组织中的表达情况,探讨其对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其分子机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测41对胃癌及癌旁正常组织中miR-214-3p的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系;将胃癌细胞MGC-803接种于培养皿,每组设3个复孔,分3组:miR-214-3p上调组(转染miR-214-3p模拟物)、miR-214-3p下调组(转染miR-214-3p抑制剂),以及阴性对照(NC)组;qPCR法分别检测各组p53表达水平,Transwell实验检测转染miR-214-3p抑制剂对MGC-803细胞的迁移和侵袭能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶活性测定以确定p53是否为miR-214-3p的靶基因.结果 相比于癌旁组织,miR-214-3p在胃癌组织中上调,并且与肿瘤淋巴结转移相关;qPCR检测分析显示,相比于NC组,miR-214-3p上调组p53的表达下降,miR-214-3p下调组p53的表达上升;Tr-answell实验结果显示,与NC组相比,miR-214-3p下调组胃癌细胞的迁移和侵袭能力降低;生物信息学分析和荧光素酶活性测定结果显示miR-214-3p通过靶向结合p533′UTR从而抑制其表达.结论 miR-214-3p在胃癌发生发展过程中可能发挥了重要作用,miR-214-3p可作为胃癌的潜在靶向标志物.     

miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的 研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇（PTX）药物敏感性中的作用。方法 构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照（miR-NC）组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况（未转染组设置亚组：空白组和对照组）,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测色素框同源物2(CBX2) mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果 CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇（0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10μmol/L）作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组（P<0.05）;Wes...     

circPUM1靶向调控miR-144-3p对宫颈癌细胞放射抵抗的影响

目的：探讨环状RNA?pumilio?RNA结合家族成员（circPUM）1对宫颈癌细胞放射抵抗的影响及其可能的作用机制。方法：收集2019年8月至2020年2月郑州大学第二附属医院收治的47例宫颈癌患者的癌组织及其相应癌旁组织（距离癌组织5?cm处正常组织）标本。定量反转录聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中circPUM1、miR-144-3p的表达量;Pearson法分析宫颈癌组织中circPUM1与miR-144-3p表达量的相关性。将circPUM1慢病毒短发夹RNA（sh-circPUM1）及其阴性对照（sh-NC）、miR-144-3p寡核苷酸模拟物（miR-144-3p?mimic）及其阴性对照（miR-NC）、sh-circPUM1与miR-144-3p抑制物（anti-miR）、sh-circPUM1与anti-miR阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至人宫颈癌细胞SiHa,并通过0、4?Gy照射剂量照射,采用细胞计数试剂盒（CCK-8法）、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测活化的胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达量;Starbase平台分析及细胞实验检测circPUM1与miR-144-3p的靶向关系。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circPUM1的表达量增加（P<0.05）,miR-144-3p的表达量减少（P<0.05）;circPUM1与miR-144-3p呈负相关（r=–0.9282,P<0.01）;转染sh-circPUM1或miR-144-3p?mimic后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平升高（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数减少（均P<0.05）;circPUM1可靶向结合miR-144-3p;共转染sh-circPUM1与anti-miR后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平降低（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数增多（均P<0.05）。结论：沉默circPUM1可通过靶向调控miR-144-3p表达而抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及诱导细胞凋亡,从而减弱细胞放射抵抗性。     

PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建靶向PIK3CA（P110α）基因的RNA干扰慢病毒载体。方法针对PIK3CA—mRNA（NM_006218）设计4个RNA干扰靶点序列和一个阴性对照靶点,构建慢病毒转移质粒pGCL—GFP。构建成功的RNA干扰质粒与PIK3CA表达质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观测转染效果,Western Blot检测PIK3CA蛋白表达,筛选出干扰效果最好的RNA干扰质粒。将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒并检测其滴度。结果4个靶点和阴性对照靶点的RNA干扰质粒均构建成功;通过Westem Blot检测获得最有效干扰靶点,并成功包装成滴度为2×10^8TU／ml的慢病毒。结论成功构建可供感染的PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体,为进一步研究PIK3CA功能和用慢病毒进行卵巢癌基因治疗奠定了基础。     

血浆miR-152-3p作为肺癌诊治指标的临床价值

目的 探讨血浆中miR-152-3p浓度相对水平在肺癌早期诊断中的应用价值.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测我院和广州医科大学呼吸疾病研究所收集的2014年5~10月55例Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者和53例健康人群血浆中miR-152-3p浓度相对水平,并对检测结果进行统计学分析,比较两组结果之间是否存在差异性,同时运用ROC曲线分析评价miR-152-3p对肺癌早期诊断的价值.结果 肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平为(4.71±2.18),健康组为(7.34±4.15),肺癌患者明显低于健康组,差异有统计学意义(t=4.223,P<0.05);血浆miR-152-3p浓度ROC曲线下面积(AUC)为0.689;当血浆中miR-152-3p浓度相对水平在最佳临界值5.6时,血浆miR-152-3p对肺癌诊断的特异性为67.3%,敏感性为62.3%;不同年龄、性别、吸烟和不吸烟、I期和II期肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平明显低于健康人群,但对肺癌早期诊断的准确性较低,需结合其他生物标记物联合检测.     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。