腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响.方法通过脂质体转染的方法,将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞),经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆,不同浓度的香烟提取物(CSE)活化,测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度.结果与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较,经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8mRNA表达和蛋白释放显著增加.结论腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达,提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用.     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响。方法 通过脂质体转染的方法，将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞)，经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆，不同浓度的香烟提取物(CSE)活化，测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度。结果 与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较，经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8 mRNA表达和蛋白释放显著增加。结论 腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达，提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用。     

和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择最适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原最适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.     

单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白对香烟烟雾提取物刺激A549细胞后产生效应的影响

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激的小鼠肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响。方法将A549细胞分为过表达SIGIRR组和对照组。构建含有SIGIRR c DNA全长的真核表达载体pc DNA3.1(+),瞬时转染小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用半定量Western blot和RT-PCR法检测其表达。以CSE刺激对照组及过表达SIGIRR组中A549细胞后,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)水平,双荧光素酶报告系统检测环氧化酶2(COX-2)表达水平,化学发光法检测活性氧(ROS)释放水平的变化。结果转染SIGIRR表达载体的A549细胞其SIGIRR表达量显著上升。对照组经CSE刺激后,COX-2表达、ROS释放、IL-6释放水平均显著增高,而过表达SIGIRR组的A549细胞经CSE刺激后,COX-2表达较对照组降低,ROS释放较对照组降低,IL-6释放水平也明显低于对照组(P0.05)。结论 SIGIRR表达上调可以抑制CSE诱导的A549细胞产生ROS、COX-2及IL-6,提示SIGIRR表达上调可能对吸烟所致呼吸道炎症具有抑制作用。     

肺炎支原体诱导A549细胞分泌白细胞介素-8及核因子-κB阻断剂的抑制作用

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞产生细胞因子白细胞介素-8(IL-8)的水平以及核因子-κB(NF-κB)阻断剂二硫氨基甲酸吡啶(PDTC)对IL-8产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8的含量;用不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中IL-8的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,IL-8的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且IL-8的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。NF-κB抑制剂PDTC一定程度上可抑制Mp诱导的A549细胞IL-8的产生(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生炎性细胞因子IL-8,NF-κB阻断剂可有效降低Mp诱导的IL-8的产生,抑制NF-κB活化有望成为新的治疗靶点。     

结核杆菌表面ManLAM诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞中IL-37表达的研究

目的:使用A549细胞系来探究ManLAM对人Ⅱ型肺泡上皮细胞中IL-37产生的可能作用以及相关分子机制。方法:通过从H37RV结核杆菌中提取并纯化ManLAM,将纯化的ManLAM用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染分析。使用TRIzol法提取人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞中的总RNA。用逆转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA。使用单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(Santa Cruz Biotechnology)对A549细胞中表达出来的IL-37进行检测。使用MAPK抗体试剂盒(Cell Signaling Technology)通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)对磷酸化的和总的p38和ERK1/2 MAPKs进行检测。针对TLR2或TLR4的siRNA或者抑制性siRNA,每5×10~5个A549细胞转染60pmol siRNA;ELISA法和流式细胞术检测A549细胞中表达出来的IL-37水平,用以评估ManLAM诱导A549细胞中IL-37表达的能力以及观察p38和ERK1/2等抑制剂对ManLAM诱导产生的IL-37表达的影响。结果:由于ManLAM是水相的主要成分,笔者发现ManLAM诱导IL-37 mRNA及蛋白表达具有时间和剂量依赖性,然而这种活性几乎可以全部被ERK1/2(U0126)和p38(SB203580)抑制剂所消除。在A549细胞中,ManLAM刺激主要是诱导ERK1/2和p38磷酸化以及细胞表面TLR2的表达。TLR2表达受到干扰后,ERK1/2和p38磷酸化水平也显著下降,同时IL-37的产物也大大减少。虽然ManLAM也能促进A549细胞中TLR4的表达,但是干扰TLR4对ManLAM诱导IL-37的表达没有影响。结论:ManLAM通过上调TLR2/p38或ERK1/2信号通路来诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞中IL-37的产生,而且,这为解释ManLAM促进结核杆菌持久性的病理学作用提供了一个重要的依据。     

纳米氧化锌对人呼吸道上皮细胞白细胞介素-8表达的影响

目的:探讨纳米氧化锌对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及肺泡上皮细胞(A549)内炎症相关因子白细胞介素-8(IL-8)表达的影响.方法:以BEAS-2B及A549细胞作为靶细胞,应用荧光定量PCR技术及ELISA法检测分析不同剂量纳米氧化锌(0、1、2和4μg/cm2)对细胞内IL-8 mRNA和蛋白表达的影响.结果:纳米氧化锌作用2、4 h,BEAS-2B细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为31.985、54.648,P均＜0.001;蛋白:F分别为128.686、65.486,P均＜0.001);A549细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达亦随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为37.652、9.173,P均＜0.01;蛋白:F分别为l27.299、76.354,P均＜0.001).结论:纳米氧化锌可提高人支气管和肺泡上皮细胞内IL-8 mRNA及蛋白的表达水平.     

PM诱导支气管上皮细胞炎症反应及内质网应激机制研究

目的探讨细颗粒物（PM）诱导气道炎症中支气管上皮细胞内质网应激（ERS）现象和氧化应激的调控机制。方法雄性C57BL/6小鼠用4mg/kgPM连续气道滴注2d,构建动物模型。获取空白组和PM组小鼠肺组织进行病理分级评分;采用Westernblot法检测肺组织葡萄糖调节蛋白前体78（GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）的相对表达量,采用免疫组化法检测GRP78和CHOP的累计光密度值,采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定肺组织中丙二醛（MDA）质量摩尔浓度。获取肺泡灌洗液,ELISA法检测IL-6、IL-8和前列腺素E2（PGE2）的分泌水平。用100、200、400mg/LPM和2.5mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）、200mg/LPM与支气管上皮细胞BEAS-2B共培养,构建细胞模型。检测各组细胞活性氧（ROS）变化。Westernblot法检测NAC干预下的BEAS-2B中GRP78和CHOP表达变化,ELISA法检测炎症介质分泌水平。结果气道滴注PM诱导C57BL/6小鼠支气管病理形态学改变,肺组织GRP78、CHOP表达升高（P＜0.05）,肺组织MDA质量摩尔浓度升高（P＜0.05）,伴随肺泡灌洗液中IL-6、IL-8和PGE2分泌增多（P＜0.05）。细胞模型中,PM作用下各组细胞ROS表达水平均升高（均P＜0.05）。NAC干预后细胞ROS表达水平降低（P＜0.05）,CHOP/GRP78相对表达量降低（P＜0.05）,IL-6、IL-8和PGE2分泌水平降低（P＜0.05）。结论PM诱导的支气管上皮细胞炎症中存在内质网应激现象,其调控机制为氧化应激。     

铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子的研究

目的：通过研究经铜绿假单胞菌生物被膜作用后,肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子水平的变化,探讨铜绿假单胞菌生物被膜在感染性肺纤维化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞菌形成生物被膜,应用乙醇沉淀法提取细菌被膜并纯化;选用人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,采用ELISA法定量检测在铜绿假单胞生物被膜藻酸盐作用后上皮细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平。结果：铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐作用后,A549细胞分泌IL-1β和TNF-α能力在48 h内持续升高,但IL-6和IL-8则在24 h达到高峰,此后下降。结论：铜绿假单胞菌生物被膜能诱导A549细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α能力增强或一过性增强,可能与其诱导肺泡炎症,进而促进成纤维细胞活化、增殖及转化有关。     

沙尘暴PM2.5对大鼠呼吸系统免疫损伤机制研究

目的探讨沙尘暴细颗粒物(PM2.5)染毒对大鼠呼吸系统的炎症免疫损伤情况及其损伤机制。方法将40只正常成年雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组和各染毒组低、中、高剂量4个组,每组10只。采用气管直接注入染毒法,分别给大鼠灌注0、1.5、7.5、37.5mg/kg剂量的颗粒物悬浮液。灌注24h后处死大鼠,并对其肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)水平及免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量进行检测。结果高剂量组大鼠BALF中IL-1、IL-6、IL-8、TNF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4、IL-10及IL-13在各剂量组间表达水平差异无统计学意义;高剂量组大鼠BALF中IgG与IgM的含量与对照组比较显著升高(P<0.01),各组IgA含量的变化差异无统计学意义。结论沙尘暴细颗粒物PM2.5可引起大鼠呼吸系统显著的免疫损伤,其中以高剂量的PM2.5染毒对机体的损伤尤为显著,机体暴露于高剂量沙尘暴细颗粒物PM2.5环境可增加呼吸系统疾病发生的危险。     

血管活性肠肽对肺炎支原体诱导的人肺上皮细胞分泌TNF-α的影响

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞(人肺腺癌上皮细胞株)产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平以及血管活性肠肽(VIP)对TNF-α产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;用不同浓度的VIP预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,TNF-α的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且TNF-α的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。VIP不同浓度的干预,A549细胞TNF-α的分泌浓度较无VIP干预组有不同程度的降低(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生TNF-α,VIP可有效降低Mp诱导的TNF-α的产生,提示VIP对肺上皮细胞有直接抗炎作用。     

丹蒌片对Aβ1-40致脑微血管内皮细胞损伤模型活性的影响

目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ_(1-40)造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后用CCK8染色法检测细胞活性,并检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的漏出量。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活性降低,细胞培养上清液中LDH释放量增加(P0.01)。与模型组比较,12 h后各剂量丹蒌片含药血清组细胞活性显著升高,12 h细胞活性高于24 h的细胞活性(P0.05);丹蒌片含药血清各组细胞培养上清液中LDH水平降低,12 h上清液中LDH水平显著低于6 h、24 h(P0.05);高剂量、中剂量含药血清组细胞上清液LDH水平显著降低(P0.05)。结论:丹蒌片能提高Aβ_(1-40)致BMEC损伤后细胞的活性,减少细胞LDH的漏出量,起到保护脑微血管内皮的作用。     

丹蒌片对Aβ_(1-40)致脑微血管内皮细胞损伤模型活性的影响

目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ_(1-40)造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后用CCK8染色法检测细胞活性,并检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的漏出量。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活性降低,细胞培养上清液中LDH释放量增加(P<0.01)。与模型组比较,12 h后各剂量丹蒌片含药血清组细胞活性显著升高,12 h细胞活性高于24 h的细胞活性(P<0.05);丹蒌片含药血清各组细胞培养上清液中LDH水平降低,12 h上清液中LDH水平显著低于6 h、24 h(P<0.05);高剂量、中剂量含药血清组细胞上清液LDH水平显著降低(P<0.05)。结论:丹蒌片能提高Aβ_(1-40)致BMEC损伤后细胞的活性,减少细胞LDH的漏出量,起到保护脑微血管内皮的作用。     

PM2.5对大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体表达及细胞凋亡的影响

目的:初步探讨大气细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)诱导大鼠肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化及细胞凋亡的潜在分子机制.方法:采用中流量采样器收集PM2.5颗粒物,经超声提取制成混悬液,作用于大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后,MTT法检测细胞存活率,Western blot检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)及凋亡相关蛋白[Bax、Bcl-2及半胱天冬酶-3(Caspase-3)]的表达水平,ELISA检测PM2.5诱导的细胞上清液中半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白介素(in-terleukin,IL)-18和IL-1β的含量.结果:随着PM2.5浓度的增加和刺激时间的延长,NR8383细胞存活率降低(24 h:F=17.253,P=0.000;48 h:F=18.678,P=0.000;72 h:F=256.104,P=-0.000);PM2.5诱导NR8383细胞内NLRP3 (F=437.166,P=0.000)和Cathep-sin-B(F=42.062,P=0.000)蛋白的表达上调;PM2.5上调细胞内促凋亡蛋白Bax(F=72.827,P=0.000)表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2(F=390.322,P=0.000)表达,下调Caspase-3(F=169.833,P=-0.000)蛋白的表达;PM2.5上调细胞培养液中Caspase-1(F=629.866,P=0.000)、IL-18(F=587.165,P=0.000)和IL-1β(F=68.472,P=0.000)的水平.结论:PM2.5可通过溶酶体模式诱导肺泡巨噬细胞内NLRP3炎性小体活化,促进IL-18和IL-1β分泌,并引起肺泡巨噬细胞发生凋亡.     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

不可分型流感嗜血杆菌诱导A549细胞分泌和表达前炎症细胞因子及机制研究

目的 探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)作用于呼吸道上皮细胞株(A549),表达前炎症细胞因子的变化及其干预措施.方法 用NTHi、NTHi 红霉素(10 mg/L)、NTHi 庆大霉素(100 mg/L)、NTHi 地塞米松(100 μmol/L)分别感染A549细胞,用核因子κB(NF-κB)抑制剂二硫氨基甲酸吡啶(PDTC,200 μmol/L)预处理NTHi感染的A549细胞,24 h后观察细胞的形态学改变,并检测上清液中白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达.结果 NTHi作用A549细胞24 h后,引起部分上皮细胞变形、死亡.NTHi能显著诱导A549细胞株分泌IL-8、表达ICAM-1,红霉素能够抑制其诱导作用;庆大霉素具有杀灭NTHi作用,但不能抑制IL-8分泌和ICAM-1表达;地塞米松能抑制A549分泌IL-8,降低ICAM-1的表达,但不能杀灭NTHi.PDTC(200 μmol/L)能阻断A549细胞在NTHi作用后IL-8的高表达.TNF-α在各组培养上清中均不能检测到.结论 NTHi显著诱导人肺上皮细胞系表达前炎症因子,该作用可能通过NF-κB通路.红霉素在杀灭NTHi的同时还具有抗炎作用.     

谷胱甘肽过氧化物酶4介导的铁死亡在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用

目的 明确谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)介导的铁死亡在非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂(DDP)耐药中的作用.方法 采用蛋白质印迹技术检测GPX4在人NSCLC细胞株(A549)和人NSCLC DDP耐药株(A549/DDP)中的表达差异;在A549细胞中过表达GPX4,在A549/DDP细胞中用铁死亡抑制剂RSL-3抑制GPX4的表达,采用CCK8试剂盒检测GPX4的表达对DDP敏感性的影响;采用活性氧自由基检测试剂盒检测ROS、采用脂质过氧化试剂盒检测Lipid ROS、CCK-8检测细胞活力等铁死亡相关标记物.结果 GPX4在A549/DDP中高表达(P<0.05);DDP与RSL3均可激活A549/DDP细胞铁死亡发生,同时RSL3可抑制GPX4的表达;在A549细胞株中上调GPX4的表达,其对DDP的IC50升高(P<0.05).结论 在耐药株中抑制GPX4的表达,可促进铁死亡发生,并增强耐药株对DDP的敏感性.     

NF-kB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的 建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-kB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用.方法 以肿瘤坏死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子KB(NF-KB)p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中自细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,MTT法检测细胞存活率.结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-KB p65的表达,并增加NF-kB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低.预转染NF-kB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-kB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高(P＜0.05).结论 NF-kB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-kB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤.     

血管紧张素Ⅱ诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞表达IL-6和IL-8

目的观察血管紧张素Ⅱ对Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性因子表达的影响。方法用RT-PCR检测IL-6和IL_8mRNA的转录水平,用ELISA检测培养基中IL－6和IL－8的分泌量。结果IL-6和IL-8mRNA转录水平和蛋白分泌量在血管紧张素Ⅱ浓度范围（10^-9～10^-7M）内随着浓度的增加而增加,但是在血管紧张素Ⅱ10^-5M时,IL-6和IL-8mRNA转录水平和蛋白分泌量都出现了明显的下降。10^-7M的血管紧张素Ⅱ处理Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）不同时间（0,6h,12h,24h）后,发现在6h时IL06和IL-8 mRNA转录水平最高。结论血管紧张素Ⅱ能够诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）表达炎性因子,可能在机械通气诱导肺损伤的发病机制中起重要作用。     

褪黑素减轻高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的机制

目的 探究褪黑素(MLT)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能的分子机制。方法 培养HUVEC并分为3组：对照组、模型组和治疗组。对照组用葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的DMEM培养基处理,模型组用高糖(葡萄糖浓度为30 mmol/L)的DMEM培养基处理,治疗组用含有100μmol/L MLT的高糖DMEM培养基处理。MTT法检测高糖及MLT对HUVEC增殖的影响,试剂盒法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,流式细胞术检测活性氧(ROS)的生成,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡和坏死情况,Western blot检测高糖及MLT对HUVEC内质网应激和细胞焦亡相关蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,模型组的细胞增殖水平下降;细胞培养上清液中LDH释放量增加;HUVEC中ROS生成增加;双染试验显示,蓝色荧光和红色荧光增加,GRP78、ATF4、CHOP、IRE1α、PERK、ATF6α、NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β蛋白表达量增加。与模型组相比,治疗组的细胞增殖水平升高;细胞培养上清液中LDH释放量减...