RNAi介导MeCP2基因沉默对HSC-T6细胞活化增殖的影响

目的探讨RNA干扰介导甲基CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖的影响。方法根据MeCP2的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,siR-NA),通过脂质体LipofectamineTM2000转染到HSC-T6细胞内,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖变化;Quantitative Real-Time PCR检测α-SMA、MeCP2 mRNA的表达;流式细胞术检测HSC-T6细胞周期的变化;Western blot检测α-SMA、MeCP2蛋白的表达。结果将MeCP2-siRNA转染进HSC-T6细胞内,MeCP2基因及蛋白水平明显降低;同时α-SMAmRNA及α-SMA蛋白的表达水平亦明显降低;靶向封闭MeCP2基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖。结论靶向封闭MeCP2的表达可明显抑制HSC-T6细胞活化增殖,MeCP2可能是潜在的肝纤维化治疗靶点。     

EZH2对HSC-T6细胞增殖活化的影响及其部分机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)表达沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖活化的影响,及其部分调控机制。方法应用EZH2的抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)作用于TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞,采用Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达;根据EZH2的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),通过脂质体LipofectamineTM2000转染到HSC-T6细胞内,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞的增殖变化,Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达。结果将DZNep加入TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞后,EZH2蛋白水平明显降低,同时p-ERK、pAKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低;将EZH2-si RNA转染活化的HSC-T6细胞内,HSC-T6细胞的增殖可明显被抑制,同时EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低。结论抑制EZH2的表达可明显抑制HSC-T6细胞的增殖活化,EZH2可能是潜在的治疗肝纤维化的靶点。     

RNAi介导大鼠腺苷A1和A2A受体基因沉默对乙醛诱导的肝星状细胞活化增殖的影响

目的研究大鼠腺苷A1受体(A1R)和腺苷A2A(A2AR)受体的siRNA分别转染大鼠肝星状细胞(HSC)对乙醛诱导的HSC活化增殖的影响。方法采用乙醛诱导HSC-T6建立离体的大鼠酒精性肝纤维化HSC模型,设计并合成A1R和A2AR小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,通过脂质体LipofectamineTM2000瞬时转染至HSC-T6细胞内,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖变化;利用Real-Time q PCR及Western blot法分别检测HSC-T6的A1R、A2AR、α-SMA、Collagen I mRNA及蛋白表达。结果将A1R和A2AR siRNA转染至HSC-T6细胞内,A1R和A2AR基因及蛋白的表达水平明显降低;同时α-SMA、Collagen I mRNA及蛋白表达水平亦明显降低;靶向封闭A1R或A2AR基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖。结论靶向封闭A1R或A2AR基因的表达可明显抑制HSC-T6细胞的活化增殖,A1R和A2AR可能是潜在的酒精性肝纤维化的治疗靶点。     

miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA（miR）-34a靶向基质金属蛋白酶（MMP）2对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导人绒毛膜滋 养层细胞 HTR-8/SVneo 迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/SVneo,利用 0.5 μg/L TNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧 光定量PCR（qPCR）检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组 细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的 靶向关系。结果 与对照组比较,TNF-α 诱导组细胞 miR-34a 表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）, MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和NC组比较,miR- 34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭 数目、细胞迁移率显著降低（P＜0.05）;与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、 细胞增殖抑制率显著降低（P＜0.05）,MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高（P＜0.05）; miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论 miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养 层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。     

翠云草提取物调控miR-145对肝星状细胞增殖、凋亡的影响

摘要：目的:探讨翠云草提取物对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:分别用12.5,25.0,50.0μg·ml-1翠云草提取物处理肝星状细胞HSC-T6,分别记为翠云草提取物低、中、高浓度组;未经任何处理的细胞作为对照组。将miR-145转染至HSC-T6细胞中,记为miR-145组;将miR-145转染至HSC-T6细胞后再用50.0μg·ml-1翠云草提取物处理,记为翠云草提取物+miR-145组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-145表达水平。结果:与对照组比较,翠云草提取物中、高浓度组肝星状细胞的吸光度（A）值、克隆形成数、Ki67表达水平显著降低,细胞凋亡率、caspase-3和miR-145表达水平显著升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。过表达miR-145可抑制肝星状细胞HSC-T6增殖,促进细胞凋亡,且miR-145增强了翠云草提取物对肝星状细胞增殖、凋亡的影响。结论:翠云草提取物可通过上调miR-145抑制肝星状细胞增殖、促进细胞凋亡。     

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的:研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果:鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论:鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移、侵袭的分子机制

摘要：目的:阐明下调miR-374a靶向转录因子21（TCF21）调控宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法:采用Realtime PCR法检测微小RNA（miR）-374a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中的表达变化。在宫颈癌细胞Si Ha中转染miR-374a inhibitor,MTT检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞侵袭以及迁移能力变化,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达变化。在线靶基因预测软件预测miR-374a的靶基因可能为TCF21,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在宫颈癌细胞Si Ha中共转染miR-374a inhibitor和TCF21 siRNA,检测细胞增殖、侵袭、迁移变化。结果:miR-374a在正常宫颈上皮细胞中的表达水平明显低于宫颈癌细胞。转染miR-374a inhibitor后的宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移和侵袭能力下降,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达减少。miR-374a靶向负调控TCF21表达。TCF21 siRNA逆转miR-374a inhibitor对宫颈癌细胞Si Ha增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:下调miR-374a通过靶向TCF21抑制宫颈癌细胞Si Ha增殖、迁移、侵袭。     

Mir-181a通过靶向c-fos基因抑制肺癌细胞迁移

目的:利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-181a的直接靶基因c-fos,探讨miR-181a促进肺癌细胞迁移的可能机制。方法:Transwell小室检测miR-181a对肺癌细胞迁移的影响;应用生物信息学预测软件TargetScan对miR-181a靶基因进行预测,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-181a对靶基因c-fos的3’UTR区的调控作用;通过Westernblot方法检测miR-181a对c-fos蛋白表达的影响;结果:A549细胞转染miR-181a后,细胞的迁移能力降低;生物信息学预测c-fos是miR-181a的靶基因,构建融合c-fos的3’UTR区表达质粒pMIR-c-fos,在此基础上对c-fos的3’UTR"种子区"进行定点突变。双荧光素酶报告基因分析表明miR-181a能够作用于c-fos的3’UTR。Western blot方法进一步证实c-fos是miR-181a的靶基因。结论:Mir-181a可能通过靶向c-fos基因,抑制肺癌细胞迁移。     

丹参酚酸B和姜黄素抑制大鼠肝星状细胞细胞外信号调节激酶的磷酸化

目的研究丹参酚酸B(SAB)和姜黄素(Cur)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、活化和细胞外信号调节激酶(ERK)的作用。方法培养大鼠HSC-T6,使用SAB和Cur处理细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响。收集裂解细胞并抽提细胞总蛋白,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,采用Western blot法检测药物对细胞表达α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原、ERK和磷酸化ERK的影响。结果Cur剂量依赖性地抑制大鼠HSC的增殖和活化,SAB和Cur显著降低α-SMA的表达水平(P<0.01);SAB对I型胶原的分泌无影响(P>0.05)而Cur显著减少I型胶原的分泌(P<0.05)。SAB和Cur对ERK表达水平都没有显著影响(P>0.05),但是显著降低了磷酸化ERK的表达水平(P<0.01 vs.P<0.05)。结论SAB和Cur能够抑制HSC的增殖、活化和ERK的磷酸化。     

丹参酚酸B和姜黄素抑制大鼠肝星状细胞细胞外信号调节激酶的磷酸化

目的研究丹参酚酸B(SAB)和姜黄素(Cur)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、活化和细胞外信号调节激酶(ERK)的作用。方法培养大鼠HSC-T6,使用SAB和Cur处理细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响。收集裂解细胞并抽提细胞总蛋白,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,采用Western blot法检测药物对细胞表达α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原、ERK和磷酸化ERK的影响。结果Cur剂量依赖性地抑制大鼠HSC的增殖和活化,SAB和Cur显著降低α-SMA的表达水平(P<0.01);SAB对I型胶原的分泌无影响(P>0.05)而Cur显著减少I型胶原的分泌(P<0.05)。SAB和Cur对ERK表达水平都没有显著影响(P>0.05),但是显著降低了磷酸化ERK的表达水平(P<0.01 vs.P<0.05)。结论SAB和Cur能够抑制HSC的增殖、活化和ERK的磷酸化。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

复发性耳廓假性囊肿的治疗

目的 探讨不同方法对复发性假性耳廓囊肿的治疗效果.方法 对2008年5月至2012年2月在我科就诊的58例复发性假性耳廓囊肿分成2组,穿刺抽液+冷冻+加压包扎组(19例),手术切除囊肿前壁软骨+对穿缝合组(39例),随访3个月到1年,观察2组治愈率、复发率,有效率、并发症等情况.结果 对照组1次治愈后痊愈5例,复发14例,治愈率为26.3％,复发率为73.7％,有效率为78.9％,其中耳廓增厚6例,1例并发化脓性软骨膜炎.观察组治愈38例,复发1例,经过1次穿刺后治愈,治愈率为97.4％,复发率为2.6％,有效率为100.0％.所有患者无耳廓变形、增厚,无化脓性耳廓软骨膜炎的并发症.结论 囊肿前壁软骨切除+对穿缝合是治疗复发性假性耳廓囊肿的高效、首选办法,值得推广.     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.