长链非编码RNA PCGEM1对肝癌Huh7细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA) PCGEM1对肝癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法构建LncRNA PCGEM1慢病毒沉默表达载体,培养人肝癌细胞系Huh7细胞至对数生长期,分为空白对照组、阴性对照组和观察组,空白对照组细胞未进行转染,阴性对照组细胞应用空慢病毒载体进行转染,观察组细胞应用LncRNA PCGEM1慢病毒沉默表达载体进行转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组肝癌细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达,细胞计数试剂盒-8检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果 3组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA相对表达量比较差异有统计学意义(F=4.328、5.473、4.198,P<0.05);观察组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9mRNA相对表达量均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),空白对照组与阴性对照组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染24、48、72、96 h时,3组细胞增殖能力比较差异有统计学意义(F=4.126、4.572、5.218、5.379,P<0.05);观察组细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),空白对照组与阴性对照组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组细胞迁移细胞数、细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=6.873、6.844,P<0.05),观察组迁移细胞数及细胞凋亡率显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);空白对照组与阴性对照组迁移细胞数、细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝癌Huh7细胞中存在LncRNA PCGEM1表达,下调LncRNA PCGEM1的表达能抑制肝癌细胞增殖、侵袭及凋亡。     

shRNA Twist基因对人绒毛膜癌细胞JEG-3增殖、侵袭和凋亡的影响

目的观察shRNA Twist基因对人绒毛膜癌细胞JEG-3增殖、侵袭和凋亡的影响。方法以人源性绒毛膜癌细胞为种子细胞,构建shRNA-Twist小干扰RNA载体,通过慢病毒转染绒毛膜癌细胞,根据转染慢病毒质粒的不同分成3组,即空白对照组、空白质粒组和shRNA干扰组。RT-qPCR和Western Blot检测Twist和凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的表达。Transwell法检测人绒毛膜癌细胞侵袭能力,CCK-8法检测人绒毛膜癌细胞增殖能力,AV-PI试剂盒检测人绒毛膜癌细胞凋亡水平。结果 RT-PCR结果显示,空白质粒组的Twist的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(1.011±0.125);shRNA干扰组的Twist的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(0.377±0.021),高于空白质粒组的mRNA表达水平(P <0.05)。Caspase-3和Caspase-9的mRNA含量具有同样的趋势。Western-Blot结果显示,空白质粒组和shRNA干扰组的的Twist蛋白相对表达量(与空白对照组相比)分别为(7.211±0.934... 更多     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组；收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组；RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的：探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果：与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<...     

LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤中的表达和临床意义及对肿瘤生物学的影响

摘要：目的：探讨LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤患者中的表达、临床意义及对肿瘤生物学的影响。方法：回顾性收集2012年1月到2014年1月于我院骨科诊治的骨肉瘤66例患者病理组织样本和临床资料,qRT-PCR法检测病理组织中LncRNA CBR3-AS1表达,并将患者分为LncRNA CBR3-AS1高低表达两组,卡方检验LncRNA CBR3-AS1表达情况与骨肉瘤临床参数的相关性,Kaplan-Meier 生存分析法比较LncRNA CBR3-AS1高低表达骨肉瘤患者生存率的差异。体外实验敲低LncRNA CBR3-AS1表达对骨肉瘤细胞系U-2 OS肿瘤生物学行为影响。结果：LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤组织和细胞系中高表达（P<0.001）;LncRNA CBR3-AS1表达与Enneking分期（P<0.001）、远处转移（P=0.004）和组织学分级（P=0.036）显著性相关;LncRNA CBR3-AS1高表达与骨肉瘤患者总生存率呈负相关（P <0.01）;LncRNA CBR3-AS1高表达是骨肉瘤患者的不良预后因素（HR= 1.558, 95％CI:1.041-2.641,P=0.013）;敲低LncRNA CBR3-AS1表达可抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞增殖、迁移和侵袭、并促进细胞凋亡（P<0.001）;骨肉瘤组织中LncRNA CBR3-AS1和CBR3mRNA表达之间正相关（r=0.44,P=0.036）,敲低LncRNA CBR3-AS1对骨肉瘤细胞CBR3 mRNA和蛋白质表达降低。结论：LncRNA CBR3-AS1具有调节骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的致癌作用,是骨肉瘤患者预后独立危险因素。     

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1（LncRNA FEZF1-AS1）对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用（EMT）的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β₁（TGF-β₁）作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组（A549细胞组）和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组（Blank组）、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）,N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）;模型组LncRNA FEZF1-AS1 基因相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）,miR-200c-3p 基因相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）。与Blank组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低（P <0.05）。与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p 基因相对表达量升高（P <0.05）。结论 LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。     

LncRNA PINK1-AS调节miR-134-5p/SERPINE1轴对胃癌细胞增殖凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨LncRNA PINK1-AS调节miR-134-5p/丝氨酸蛋白酶抑制剂分支E成员1(SERPINE1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR检测60例胃癌组织、癌旁组织中PINK1-AS、miR-134-5p、SERPINE mRNA的表达水平。体外培养胃癌细胞MKN28,将MKN28细胞分为control组、si-NC组、si-PINK1-AS组、pc-NC组、pc-PINK1-AS组、miR-NC组、miR-134-5p mimics组;qRT-PCR检测各转染组细胞PINK1-AS、miR-134-5p、SERPINE mRNA的表达水平,cck-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell实验细胞迁移和侵袭;western blot检测细胞SERPINE1、Ki-67、cleaved caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA PINK1-AS和miR-134-5p、miR-134-5p和SERPINE1的靶向关系。结果:胃...     

Caveolin-1与绒毛膜癌侵袭力之间的关系

目的:探讨小窝蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)的表达与绒毛膜癌高侵袭力之间的相关性,并了解RNA干扰沉默CAV-1基因对高侵袭力绒毛膜癌JEG-3细胞侵袭力的抑制作用.方法:(1)应用Matrigel体外侵袭试验和噻唑盐比色实验[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumro-mide,MTT]检测绒毛膜癌JEG-3细胞和JAR细胞之间侵袭能力和增殖能力的差异;(2)应用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transeriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测CAV-1 mRNA在人正常早孕绒毛组织、不同侵袭力人绒毛膜癌细胞株JEG-3及JAR表达的差异;(3)将CAV-1小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染至高侵袭力绒毛膜癌JEG-3细胞后,采用RT-PCR检测转染后JEG-3细胞CAV-1 mRNA表达的变化,并应用Matrigel体外侵袭试验和MTT法检测JEG-3细胞侵袭和增殖能力的变化.结果:(1)JEG-3细胞的侵袭能力显著高于JAR细胞(P<0.05),但JEG-3和JAR细胞之间增殖能力的差异无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR结果显示在人正常早孕绒毛组织、高侵袭性JEG-3细胞以及低侵袭性JAR细胞中均可检测到GAV-1 mRNA,将上述三者中CAV-1 mRNA的表达量进行两两比较,发现人绒毛膜癌细胞株中CAV-1 mRNA的表达明显高于人正常早孕绒毛组织,而具有高侵袭性JEG-3细胞中CAV-1 mRNA的表达明显高于JAR细胞,差异具有统计学意义(P<0.05),相关性分析显示CAV-1表达水平与绒毛膜癌细胞侵袭力呈正相关(r=0.86,P<0.05);(3)CAV-1 siRNA可有效抑制CAV-1 mRNA的表达,并削弱绒毛膜癌细胞的侵袭和增殖能力.结论:CAV-1基因表达可显著增强绒毛膜癌细胞的侵袭潜能,CAV-1 siRNA可抑制绒毛膜癌细胞的侵袭和增殖能力.     

小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响。方法培养人骨肉瘤Saos-2细胞,将细胞随机分为siRNA-PIK3CA组、siRNA对照组和空白对照组,siRNA-PIK3CA组细胞转染siRNA-PIK3CA序列,siRNA对照组细胞转染siRNA对照序列,空白对照组细胞正常培养,不作任何干预。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中PIK3CA mRNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中PIK3CA、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化-PI3K (p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和磷酸化-m TOR(p-mTOR)蛋白表达。结果 siRNA-PIK3CA组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞转染后24、48、72、96 h增殖能力均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞凋亡率高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNAPIK3CA组细胞中PI3K、Akt、m TOR蛋白相对表达量均高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05),而p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05)。siRNA对照组与空白对照组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数及PI3K、Akt、m TORp-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PIK3CA基因可减少人骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞迁移及侵袭能力,增加细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。     

长链非编码RNA CBR3⁃AS1在骨肉瘤中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA CBR3?AS1（LncRNA CBR3?AS1）在骨肉瘤患者中的表达及意义。方法：回顾性收集2012年1月—2014年1月本院收治的66例骨肉瘤患者组织标本和临床资料,qRT?PCR法检测组织中LncRNA CBR3?AS1表达情况,并将患者分为高表达组和低表达组,卡方检验分析LncRNA CBR3?AS1表达与临床参数的关系,Kaplan?Meier 法比较LncRNA CBR3?AS1的表达与总生存率的关系。将U?2 OS细胞系分成LncRNA CBR3?AS1沉默表达组（si?CBR3?AS1组）和阴性对照组（si?NC组）,经LipofectamineTM 3000分别转染LncRNA CBR3?AS1 siRNA和si?NC序列,MTT和集落形成试验测定细胞增殖,细胞迁移和侵袭试验测定细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术测定细胞凋亡。qRT?PCR和Western blot法检测羧基还原酶3（CBR3）的表达。结果：LncRNA CBR3?AS1在骨肉瘤组织和细胞系中高表达（P < 0.001）。LncRNA CBR3?AS1高表达与Enneking分期（P < 0.001）、远处转移（P=0.004）和组织学分级（P=0.036）显著相关;LncRNA CBR3?AS1高表达与骨肉瘤患者总生存率呈负相关（P < 0.01）,是骨肉瘤患者的不良预后因素（HR=1.558,95％CI：1.041~2.641,P=0.013）。si?CBR3?AS1组细胞增殖﹑集落形成能力、细胞迁移和侵袭能力显著低于si?NC组,si?CBR3?AS1组细胞凋亡率高于si?NC组。LncRNA CBR3?AS1和CBR3 mRNA表达呈正相关（r=0.44,P=0.036）,si?CBR3?AS1组CBR3 mRNA和蛋白表达量显著低于si?NC组（P < 0.001）。结论：LncRNA CBR3?AS1在骨肉瘤中高表达,LncRNA CBR3?AS1下调表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,是影响骨肉瘤预后的独立危险因素。     

以TAR RNA 为靶的HIV-1抑制剂的研究进展

艾滋病病毒于1983年首次由法国巴斯德研究所的Montagnier 教授和美国的Gallo教授研究组同时发现[1],距今已有二十多年的历史了.尽管人们想尽了各种方法、采取了各种手段去对抗艾滋病,但它还是以不可遏制的速度在全球范围迅速蔓延开来.它所引起的危害已经成为21世纪人类面临的最严重的挑战.由于HIV-1本身的特点(快速变异和遗传异质性)使得抗艾滋病药物研制遇到了难以克服的困难.目前临床上使用的抗艾滋病药物主要有蛋白酶抑制剂和逆转录酶抑制剂,这两类药物极易产生耐药性和毒性,所以研制新型的不易产生耐药性的抗艾滋病药物就成为迫在眉睫的任务.这就迫使人们又回到艾滋病病毒的基础研究中去寻找新的不易产生耐药性的靶点--在病毒的生命周期中高度保守的遗传基因以及在病毒转录及翻译中起关键调控作用的蛋白.     

长链非编码RNA NEAT1在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNAs(IncRNAs)是一类长度超过200个核苷酸,不能编码蛋白质的RNA分子,研究表明其能在多个水平调控基因表达,从而广泛参与细胞内复杂的生物学过程。lncRNAs与多种恶性肿瘤关系密切,在不同肿瘤的发生发展中发挥致癌或抑癌作用。随着分子生物学技术的不断发展,越来越多的lncRNAs被人们所认知。NEAT1是近些年被发现的一个长链非编码RNA,除了在亚核体paraspeckles的结构形成及维持过程中有着重要作用外,研究人员还发现其可通过不同的信号通路在多个肿瘤中扮演重要角色。     

液态芯片的高敏感性检测HIV-1 RNA

目的建立高敏感的液态芯片检测血液HIV-1 RNA的方法。方法抽提NASBA（nucleic acid sequence-based amplification）确定HIV-1 RNA载量的患者血浆RNA，对HIV-1引物进行生物素标记，行一步法RT-PCR扩增靶HIV-1 gag区片段。PCR产物与两个交联HIV-1特异探针的微球杂交，同时对于HIV-1病毒载量在100-790拷贝/ml样本进行荧光定量PCR检测。结果对NASBA确定阳性的上海108例（载量170-3 300 000）、COBAS定量的北京86例阳性（载量477-2 040 000）以及5例NIH的HIV标准品（〈100；273；1 610；11 300；33 800）的结果进行液态芯片多区段检测HIV-1 RNA，总阳性率为96.98%（193/199），液态芯片检测的敏感性与NASBA、COBAS方法相当（P〉0.05），对于HIV-1 RNA载量在180-790拷贝/ml的13个样本的荧光定量PCR未检测到信号，液态芯片检测结果为阳性。结论多区段液态芯片法检测HIV-1 RNA灵敏度高、特异性强、重复性好，降低漏检率，而且具有操作简便、快速、低成本的特点，将液态芯片技术应用于血液筛查将有助于提高HIV-1阳性血液的检出率和输血的安全性。     

流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

目的 将流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基进行亚克隆、表达，获得重组的亚克隆多肽，为进一步研究PBl亚基功能奠定基础。方法 以FB1亚基cDNA为模板，用PCR方法扩增出PB1-1片段，应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组，阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定，IPTG诱导各亚克隆系高效表达；优化表达条件。结果 PCR法扩增出487bp的片段，酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒，在E．coli M15中表达得到相对分子量约为20KD的重组蛋白，获得蚕组多肽。结论 成功地亚克降及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基。     

靶向分化相关基因NDRG1的siRNA表达载体的构建

水平降低.结论:成功构建了针对NDRG1基因的siRNA表达载体.     

小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系?方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ?BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆?将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达?以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量 RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系?结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确?载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率?转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P < 0.05)?结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化?     

RNA干扰抑制人食管鳞癌细胞PLK1基因的表达

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术,研究Polo样激酶l（PLK1）基因特异的siRNA对人食管鳞癌细胞Eca-109 PLKl基因表达的影响.方法将PLKI基因特异性siRNA转染入人食管鳞癌细胞Eta-109,采用RT、-PCR和Western-blot技术检测siRNA处理前后Eca-109细胞PLK1基因表达变化,并构建PI.K1基因特异性siRNA质粒表达载体.结果转染R后T-PCR和Western-blot结果均显示Eca-109细胞PLK1基因的表达明显下降,PLKI基因特异性siRNA质粒表达载体构建成功.结论 PLKl特异性siRNA对Eca-109细胞PLK1基因的表达有抑制作用.     

Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定

目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48 h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和Western Blot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(P《0.05).结论:成功构建Cdh1小干扰RNA载体,并能下调Hela细胞Cdh1的表达.     

以U1小核核糖核酸为靶向基因构建 HCV特异性嵌合体核酶

目的：以人类U₁小核核糖核酸为载体,构建特异性嵌合体核酶,以期用于HCV感染的基因治疗。 方法：将HCV特异性核酶序列设计为引物序列一部分,以人类U₁小核核糖核酸为模板,经PCR法及2次克隆得到嵌合体,使核酶序列替代U₁结构中第3个茎-环。 结果：经测序证实新建质粒中确实有核酶序列且替代了第3个茎-环。 结论：以U₁小核核糖核酸为靶向基因可以构建出HCV特异的U₁嵌合体核酶。