金属硫蛋白-1在小鼠肾脏的表达*

目的观察金属硫蛋白-1（MT-1）在小鼠肾脏各部位的表达及细胞内定位。方法选取成年雄性CD-1小鼠,剖腹取出肾脏,应用Western blot法检测小鼠肾皮质和髓质中MT-1蛋白的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光技术观察MT-1在小鼠肾小管和集合管的定位;应用免疫荧光双标共聚焦显微扫描技术观察MT-1在小鼠肾小管和集合管上皮细胞内的亚细胞定位。结果 MT-1在小鼠肾脏皮质和髓质均有表达。在皮质迷路,主要表达于近曲小管和远曲小管;在髓放线和髓质,主要表达于近直小管、远直小管和集合管。近端小管表达最强,远端小管次之,集合管最弱。在近端小管位于上皮细胞游离面刷状缘及胞浆内;在远端小管位于上皮细胞胞浆内;在集合管位于上皮细胞基底侧。亚细胞定位在溶酶体。结论 MT-1在小鼠肾脏近端小管、远端小管和集合管的细胞定位不同,可能决定了其在肾脏各结构中发挥的作用是不同的。     

芪麦汤对糖尿病模型小鼠降血糖作用的实验研究

目的 观察芪麦汤对糖尿病模型小鼠的降糖及降糖增效作用,初步探索该方在糖代谢调节方面的药效.方法 四氧嘧啶高血糖模型小鼠随机分为芪麦汤低、中、高剂量组,芪麦汤低、中、高剂量+二甲双胍组,二甲双胍对照组,模型对照组及正常对照组.给药30 d,结束后测空腹血糖及糖负荷后2h血糖.结果 中、高剂量芪麦汤组对糖尿病模型小鼠空腹血糖[( 15.56±9.32) mmol/L,t =2.43;(17.16±8.03) mmol/L,t=2.19]、糖负荷后2h血糖[(15.57±8.13) mmol/L,t =3.83;( 16.41±8.15) mmol/L,t =3.63]均有明显的降低作用(P＜0.05 ～0.01);中、高剂量芪麦汤+二甲双胍组明显降低模型小鼠空腹血糖[(12.18±7.32) mmol/L,t =2.68;( 12.97±6.95) mmol/L,t =2.54]、糖负荷后2h血糖(15.19±7.52) mmol/L,t=2.68;( 12.96 ±5.93) mmol/L.t=3.25]与单用二甲双胍差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).芪麦汤单用或与二甲双胍合用均可减少模型小鼠饮水量与进食量(P＜0.05或P＜0.01),对模型小鼠体质量均无明显影响.结论 芪麦汤具有明显降低糖尿病模型小鼠空腹血糖及糖负荷后2h血糖的作用,具有增强二甲双胍降糖的作用.能减轻模型小鼠多饮多食状况.     

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经元HSP70表达的影响

目的研究黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元热休克蛋白质(HSP)70表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50，100和200 mg·kg^-1)以及尼莫地平0.4 mg·kg^-1组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型，通过HE染色、流式细胞术、免疫组织化学以及RT-PCR等方法，观察黄芩苷对缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理形态学改变、神经细胞凋亡率以及HSP70表达的影响。结果黄芩苷可明显改善缺血再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,降低神经细胞凋亡率，促进HSP70基因的转录与翻译。结论黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与黄芩苷促进HSP70表达、抑制神经细胞凋亡有关。     

钙结合蛋白-D28K在神经退行性疾病中的作用

维生素D依赖型钙结合蛋白-D28K(calbindin-D28K)是一种具有较高钙离子亲和力的钙调蛋白,可调节胞内钙离子浓度,通过上调calbindin-D28K在神经细胞中的表达对神经退行性疾病有积极作用。本文综述了国内外calbindin-D28K在阿尔采末病、帕金森病、亨廷顿病等神经退行性疾病中相关作用的研究进展,旨在为研究以calbindin-D28K为靶点治疗神经退行性疾病提供线索。     

黄芩苷对孤养小鼠的抗焦虑作用

目的研究黄芩苷(baicalin)对孤养小鼠的抗焦虑作用。方法制备孤养小鼠模型,应用小鼠高架十字迷路实验、小鼠明暗箱实验、小鼠孔板实验和隔离小鼠攻击实验考察黄芩苷对孤养小鼠的抗焦虑作用。结果黄芩苷可以对抗孤养小鼠在高架十字迷路实验、明暗箱实验和孔板实验中所表现出的焦虑样行为,在隔离小鼠攻击实验中表现抗攻击作用。结论黄芩苷对孤养小鼠有显著的抗焦虑作用。     

黄芩苷对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的建立氨基半乳糖联合脂多糖（D-GalN.L-1PS）所诱导的小鼠肝损伤模型,探讨黄芩苷对肝损伤的保护作用。方法给予小鼠黄芩苷7d后,腹腔注射D-GalN.L-1PS造模,测定小鼠的ALT、AST、GSH、TNF-a的含量;结论黄芩苷对D-Ga1N.L-1Ps所诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

用高效液相色谱法测定人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率

用高效液相色谱法对人血浆中黄芩苷进行了测定 .在 5、15、2 5 μg/mL范围的回收率为95 .0 %、88.7%、94.2 % .人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率测定 ,为设计合理的给药方案提供了实验依据 .     

Caco-2细胞模型比较黄芩苷和黄芩苷滴丸在小肠的吸收

目的：比较黄芩苷和黄芩苷滴丸在小肠的吸收。方法：采用Caco-2细胞单层模型研究黄芩苷和黄芩苷滴丸由绒毛面到基底面的跨膜转运过程。通过测定黄芩苷和黄芩苷滴丸在Caco-2细胞模型的转运百分率及表观渗透系数（Papp）,比较二者的跨膜转运能力。结果：在细胞转运实验中,135min时,黄芩苷和黄芩苷滴丸的转运百分率分别为1.00%和6.25%,Papp分别为（0.664±0.103）×10-6cm·s-1和（4.462±1.10）×10-6cm·s-1,黄芩苷滴丸的Papp是黄芩苷的6倍。在跨膜转运180min内,黄芩苷滴丸的转运百分率与时间成正比。结论：将黄芩苷制成滴丸可能提高黄芩苷在小肠的吸收。     

黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响

目的：研究黄芩苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生理机能的影响。方法：实验小鼠随机均分为7组,分别为对照组、模型组、香菇多糖（200mg/kg）组,黄芩苷低、中、高（50、100、200mg/kg）3个剂量组及黄芩苷（100mg/kg）＋香菇多糖（100mg/kg）组。在灌胃给予上述药物24d后,对实验小鼠的学习记忆能力进行测试,同时测定小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）等酶的活性,及丙二醛（MDA）的含量。结果：高、中剂量的黄芩苷能提高衰老小鼠的学习记忆能力（P〈0.05）,能在一定程度上提高组织或血浆中SOD、GSH-Px的活性,升高血浆中CAT的活性,并降低MDA的含量,但较香菇多糖组效果略差,而黄芩苷＋香菇多糖组效果最佳（P〈0.05））。结论：黄芩苷可延缓D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的衰老进程,其作用机制可能与其调节氧化代谢酶系统有关,可作为抗氧化衰老辅助药物。     

山茱萸环烯醚萜苷通过介导胞外信号调节激酶信号通路对急性脑梗死小鼠的神经保护作用

目的 研究山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对急性脑梗死小鼠的神经保护作用,并探讨其可能机制.方法 将18只ICR小鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组、实验组,每组6只.参考大脑中动脉栓塞法对小鼠进行造模,实验组小鼠腹腔注射150 mg/kg CIG,连续给药7 d,对比三组小鼠的神经损伤评分,并观察小鼠的脑梗死体积,使用TUNEL检测测定小鼠神经元的凋亡率,使用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测脑组织中磷酸化胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白及mRNA的表达情况.结果 与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、Bax mRNA及其蛋白和p-ERK1/2蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低(P<0.05),其中神经元凋亡率(79.678±7.203)％、Bax mRNA(3.84±0.29)及其蛋白表达(1.01±0.07)、p-ERK1/2蛋白表达(0.90±0.08)高于对照组的(1.983±1.071)％、(1.04±0.09)、(0.21±0.07)、(0.41±0.08),Bcl-2 mRNA(1.00±0.07)及其蛋白表达(0.50±0.07)低于对照组的(3.86±0.32)、(1.29±0.08).与模型组相比,实验组小鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、Bax mRNA及其蛋白降低,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达和p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05),其中神经元凋亡率(49.171±10.914)％、Bax mRNA(2.04±0.23)及其蛋白表达(0.51±0.08)低于模型组,Bcl-2 mRNA(2.58±0.24)及其蛋白表达(0.93±0.34)、p-ERK1/2蛋白表达(1.52±0.09)高于模型组.结论 CIG可能是通过ERK信号通路发挥对急性脑梗死小鼠的神经保护作用.     

Regulation of renal calbindin-D28K

Calbindin-D28k is an intracellular protein with high affinity for calcium. In the kidney, this protein is exclusively localized in the distal tubule and in the proximal part of the collecting ducts. Functionally, calbindin-D28k is supposed to be involved in the regulation of the reabsorption of calcium and possibly magnesium in the distal nephron though the exact regulatory mechanisms are not yet known. Thus, several theories regarding the functional role of calbindin-D28k have been proposed: The carrier theory describes calbindin-D28k as a transport protein which binds calcium and then transports it from the luminal to the basolateralcell membrane. The buffer theory assumes that calbindin-D28k functions by binding calcium ions to prevent intracellular calcium concentrations from reaching toxic levels. The activator theory describes that calbindin-D28k increases the activity of calcium channels or the enzymatic activity of the Ca++-Mg++-ATPase in the luminal membrane and thereby increases the tubular reabsorption of calcium. The renal calbindin-D28k is dependent upon vitamin D. Pharmacological doses of the active vitamin D metabolite 1,25-(OH)2D increases the concentrations of renal calbindin-D28k, whereas the concentration of calbindin-D28k is low in conditions with reduced levels of circulating 1,25-(OH)2D. Likewise, plasma calcium concentrations, uremia and hypertension affect calbindin-D28k expression. However, several studies have rendered probable the effect of additional factors in the regulation of renal calbindin-D28k. The aim of the present dissertation therefore was to examine the regulation of renal calbindin-D28k in a series of physiological and pathophysiological conditions established in vivo in the rat. A possible correlation between hypertension and calbindin-D28k was examined in three models of experimental hypertension: the genetically defined spontaneous hypertensive rat, the salt-sensitive Dahl rat and the renovascular hypertensive rat. These three models clearly demonstrated three separate patterns in the calcium metabolism, but the studies were unable to support a role for calbindin-D28k in the development of hypertension. In all three models the development of hypertension caused an increased plasma 1,25-(OH)2D. This increase was accompanied by either unaltered or reduced levels of renal calbindin-D28k possibly secondary to a cellular resistance against 1,25-(OH)2D. Magnesium binds to calbindin-D28k with a relatively high affinity. The regulation of urinary magnesium excretion takes place in the distal tubule where calbindin-D28k is found in high concentrations. Therefore, a possible relation between magnesium and calbindin-D28k was examined. The studies demonstrated not previously known connections between magnesium intake, urinary magnesium excretion and renal calbindin-D28k which suggests that this protein is involved in the regulation of magnesium homeostasis by the kidney. Calcitonin increases the reabsorption of calcium in the distal tubule. Therefore, the effect ofcalcitonin on renal calbindin-D28k was examined both by eliminating the endogeneous calcitonin production by a selective thyroidectomy followed by an autotransplantation of the parathyroid glands and further by infusion of calcitonin. These studies demonstrated unchanged concentrations of renal calbindin-D28k. It was concluded that the increased calcium reabsorption induced by calcitonin in the distal tubule is not mediated by calbindin-D28k. Urinary calcium excretion is in part regulated by the action of PTH on calcium reabsorption in the distal nephron. Previous reports of increased expression of renal calbindin-D28k in uremic rats led us to suggest that secondary hyperparathyroidism associated with uremia induced the synthesis of renal calbindin-D28k. Therefore, the effect of PTH was examined in a study comprising selective parathyroidectomy and infusions of PTH, PTHrP, 1,25-(OH)2D and calcium. (ABSTRACT TRUNCATED)     

逍遥丸对抑郁模型大鼠海马突触素mRNA表达的影响

目的研究逍遥丸(舒肝解郁中药方剂)抗抑郁作用的分子机制。方法以原位杂交和RT-PCR方法,研究慢性应激抑郁模型大鼠的海马突触素mRNA表达以及逍遥丸对其影响。结果模型组大鼠海马突触素mRNA表达量明显上升,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);氟西汀组、逍遥丸组大鼠海马突触素mRNA表达量显著下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论模型大鼠海马神经元内突触素表达上调,逍遥丸能下调其表达。     

百事乐胶囊对抑郁模型大鼠海马GR/p-GR/SGK1表达的影响

目的：探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠学习记忆的保护作用。方法：将SD大鼠随机分为6组,即空白对照组、抑郁模型组、氟西汀组及百事乐胶囊高、中、低（2.88,1.44,0.72 g·kg^-1）剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方法建立抑郁模型,造模同时灌胃给药,连续21 d Morris水迷宫测定对大鼠行为学的影响,放射免疫法观察大鼠血浆CORT含量的变化,Western-blotting观察大鼠海马GR,p-GR,SGK1蛋白表达的变化。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期（EL）、目标象限潜伏时间显著增长（P<0.01）;穿越目标象限的次数显著降低（P<0.05）;CORT含量显著增高（P<0.01）,海马GR、p-GR的表达下调（P<0.01）,SGK1的表达增加（P<0.01）。与模型组比较,百事乐胶囊高剂量能缩短模型大鼠的EL（P<0.05）,并能缩短目标象限潜伏时间（P<0.05）,增加目标象限的穿越次数（P<0.05）;同时高、中剂量组大鼠血浆CORT的含量显著下降（P<0.05或P<0.01）;高、中剂量组海马GR、p-GR的表达显著增加（P<0.05或P<0.01）,高剂量组SGK1的表达显著降低（P<0.05）。结论：百事乐胶囊可能通过GR/p-GR/SGK1信号级联增加应激抑郁模型大鼠海马学习记忆的功能,进而实现抗抑郁的作用。     

越鞠甘麦大枣汤对产后抑郁小鼠海马AKT/mTOR信号通路的影响

目的以慢性孕前应激诱导建立产后抑郁症小鼠模型,研究越鞠甘麦大枣汤(越甘)对产后抑郁母鼠的快速抗抑郁作用,并从海马AKT/m TOR信号通路角度探讨产后抑郁的发病机制以及中药越甘快速治疗产后抑郁症的作用机制。方法将32只Bal b/c母鼠随机分为2组,空白对照组,不给予任何刺激;孕前应激组,小鼠给予慢性束缚刺激。3周后慢性孕前应激组小鼠♀♂合笼交配怀孕,于分娩后3周检测母鼠悬尾测试(tail suspension test,TST)。将产后抑郁模型组母鼠随机分为3组:模型组、越甘组(YG)、氯胺酮组。检测药物对产后抑郁母鼠的干预作用,并取母鼠海马检测AKT、m TOR磷酸化蛋白(phosphorylation protein)以及总蛋白的表达。结果产后3周,与对照组比较,PPD模型组在悬尾测试中的绝望状态不动时间明显增加(P<0.01)。与对照组相比,PPD模型组母鼠海马AKT、m TOR磷酸化蛋白表达均下调,且差异具有显著性(P<0.01,P<0.01)。单次给予越甘或氯胺酮24 h之后,PPD模型母鼠悬尾测试的绝望不动时间明显降低(P<0.01,P<0.01),并且海马AKT、m TOR磷酸化蛋白表达均明显上调(P<0.01,P<0.01),(P<0.01,P<0.01)。结论慢性孕前应激可诱导Balb/c母鼠表现出产后抑郁样症状,其发病机制可能与下调海马AKT/m TOR信号通路的蛋白表达有关。在此产后抑郁模型上,中药越甘具有与西药氯胺酮一致的快速抗抑郁作用,其作用机制可能与上调AKT/m TOR信号通路有关。     

黄芩苷对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50,100和200 mg.kg-1),以及尼莫地平0.4 mg.kg-1组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,通过HE染色、流式细胞术、免疫组化及RT-PCR等方法,观察黄芩苷对缺血再灌注大鼠脑组织形态学改变、神经细胞凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3表达的影响。结果黄芩苷50,100和200 mg.kg-1iv均可明显改善缺血再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,神经细胞凋亡率从模型组的(20.6±5.4)%分别降至(14.5±3.1)%,(11.12±4.2)%及(10.2±2.6)%,促凋亡基因caspase-3 mRNA表达比模型组分别降低23.2%,36.5%及41.0%,其蛋白表达比模型组分别降低25.6%,41.2%及49.3%。结论黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制caspase-3表达有关。     

抗抑郁药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经生长因子表达的影响

目的研究抗抑郁药物氟西汀与噻萘普汀对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经生长因子(NGF)表达的影响。方法将大鼠随机分为抑郁模型组、氟西汀组、噻萘普汀组和对照组。模型组、氟西汀组和噻萘普汀组给予21d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间氟西汀组每天灌胃氟西汀(10mg/kg),噻萘普汀组每天灌胃噻萘普汀(50mg/kg),模型组和对照组每天灌胃等体积的生理盐水。行为学检测应用开场法和液体消耗实验。采用Western Blot法检测各组大鼠海马NGF的表达情况。结果应激后模型组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数、糖水消耗百分比均显著低于对照组(P<0.01)。应激后氟西汀组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均高于模型组(P<0.05)。应激后噻萘普汀组糖水消耗百分比高于模型组(P<0.05),水平穿越格数、竖立次数和修饰次数也高于模型组,但差异无统计学意义。在Western-blotting法检测中,慢性应激后模型组大鼠海马NGF的表达水平显著低于对照组(P<0.01);氟西汀组大鼠海马NGF的表达水平高于模型组(P<0.01),与对照组差异无统计学意义(P>0.05);噻萘普汀组大鼠海马NGF的表达水平高于模型组(P<0.01),略低于对照组和氟西汀组但差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性应激可以导致大鼠海马NGF表达降低,氟西汀和噻奈普汀可以逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中NGF表达的降低。     

抗抑郁药物对慢性应激抑郁模型大鼠海马胱天蛋白酶-9表达的影响

目的研究氟西汀与噻萘普汀对慢性应激抑郁模型大鼠海马胱天蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响。方法将大鼠随机分为抑郁模型组、氟西汀组、噻萘普汀组和对照组。模型组、氟西汀组和噻萘普汀组给予21d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间氟西汀组每天灌胃氟西汀(10mg/kg),噻萘普汀组每天灌胃噻萘普汀(50mg/kg),模型组和对照组每天灌胃等体积的生理盐水。行为学检测应用开场法和液体消耗实验。采用Western blot法检测各组大鼠海马Caspase-9的表达情况。结果模型组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数、糖水消耗百分比均显著低于对照组(P<0.01)。氟西汀组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均高于模型组(P<0.05)。噻萘普汀组糖水消耗百分比高于模型组(P<0.05),水平穿越格数、竖立次数和修饰次数也高于模型组,但差异无统计学意义。慢性应激后模型组大鼠海马Caspase-9的表达水平显著高于对照组(P<0.01);氟西汀组大鼠海马Caspase-9的表达水平低于模型组(P<0.01),高于对照组(P<0.05);噻萘普汀组大鼠海马Caspase-9的表达水平低于模型组(P<0.01),高于对照组(P<0.01)。结论氟西汀和噻萘普汀2种抗抑郁药物均可以逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中Caspase-9表达的升高。     

Separate effects of 1,25-dihydroxyvitamin D and calcium on renal calbindin-D28k and intestinal calbindin-D9k

The effects of normal, low and high plasma concentrations of 1,25-(OH)2vitamin D (1,25-(OH)2D) combined with normal, low and high concentrations of plasma calcium on renal calbindin-D28k and intestinal calbindin-D9k were examined in rats. We found that the expression of renal calbindin-D28k was significantly (P<0.05) increased by high levels of 1,25-(OH)2D, but was not affected by a 50% reduction in 1,25-(OH)2D. In contrast the intestinal calbindin-D9k responded significantly (P<0.005) to both high and low 1,25-(OH)2D levels. The effect of 1,25-(OH)2D on intestinal calbindin-D9k was modulated by plasma calcium concentrations. Increased plasma calcium levels did not affect the renal calbindin-D28k concentrations, but suppressed intestinal calbindin-D9k (P<0.05). The effect of calcium was not mediated by calciotropic hormones. This suggests the existence of a calcium-sensing mechanism in the proximal duodenum. It is concluded that intestinal calbindin-D9k is more sensitive than renal calbindin-D28k to changes in 1,25-(OH)2D and that intestinal calbindin-D9k in contrast to renal calbindin-D28k is sensitive to changes in plasma calcium concentrations.