重庆地区鼻咽癌患者血浆EB病毒LMP1基因检测及N端XhoI酶切位点变异分析

目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白l(LMP1)基因存在情况及N端XhoI酶切位点变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中所起的作用.方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌患者外周血40例,提取DNA后,用聚合酶链反应技术(PCR)特异性地扩增LMP1基因的N端区,PCR产物经XhoI酶切后用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析.结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出267bp的特异性LMP1基因条带,阳性率为100%.40例非鼻咽癌者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%.与B95-8原型LMP1比较,全部PCR产物酶切电泳分析、测序及软件序列分析未发现一例存在XhoI酶切位点缺失变异.结论:我国重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆携带的EB病毒LMP1基因XhoI酶切位点无缺失变异;LMP1基因N端XhoI酶切位点缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究.     

重组质粒pLMP1-p53mt的构建与表达

目的构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的双基因真核表达质粒,为研究突变型p53基因和EB病毒LMP1基因在鼻咽癌发生中的相互作用奠定基础.方法通过分子克隆技术,构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1-p53mt;培养HeLa细胞,采用脂质体lipofectAMINETM 2000将该质粒转入HeLa细胞中,转染后48h,利用免疫细胞化学法研究突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的表达情况.结果重组质粒限制性内切酶酶切及PCR鉴定结果与预期一致;观察到转染细胞中突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的高效表达.结论成功构建了含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的双基因真核表达质粒.     

含突变型p53和LMP1双基因重组质粒的构建与鉴定

目的构建一种双基因真核表达载体，使之表达人突变型p53蛋白(p53mt)和EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)，为研究这两个蛋白在鼻咽癌变中的交互作用奠定基础。方法通过基因重组技术，构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1-p53mt；采用脂质体LipofectAMINE^TM 2000将此载体转入体外培养的HeLa细胞中，转染后48h，采用免疫细胞化学方法分析突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的表达。结果对重组载体进行限制性内切酶酶切及PCR鉴定分析，结果与预期相符合：转染试验观察到转染细胞中突变型p53基因和LMP1基因的阳性表达。结论成功构建了表达人突变型p53蛋白和EB病毒LMP1的真核载体pLMP1-p53mt，其研究思路可以为中医体质病机研究提供借鉴。     

鼻咽癌患者外周血EB病毒DNA检测与肿瘤细胞凋亡的关系

[摘要] 目的 探讨用PCR方法从鼻咽癌外周血中检测EB病毒DNA的意义,以及与鼻咽癌组织凋亡之间的关系。方法 分别收集58例健康人外周血和50例鼻咽癌病人的外周血及其相应的肿瘤组织活检标本,用PCR方法分别检测血浆和单个核细胞中的EB病毒DNA,用TUNEL方法检测鼻咽癌细胞的凋亡情况。 结果 鼻咽癌患者外周血单个核细胞和血浆中的EB病毒阳性率均明显高于健康对照组。鼻咽癌患者外周血单个核细胞EB病毒阳性者的癌细胞平均凋亡指数明显高于阴性者,提示外周血单个核细胞中的EB病毒DNA与肿瘤细胞的凋亡有密切的联系。结论 鼻咽癌患者外周血EB病毒DNA可能为来源于局部肿瘤细胞的分子标记物,本研究为其进一步的的临床应用提供了理论基础。 [关键词] 疱疹病毒4型,人 鼻咽肿瘤 外周血 凋亡     

牛pcDNA3—bFGF真核表达重组体的构建与鉴定

目的：构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因真核表达质粒。方法：设计含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的bFGFcDNA引物，采用PCR法从原核pET3c-bFGF中扩增bFGFcDNA片段，纯化PCR产物，EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切并连接至pcDNA3，转化感受态大肠杆菌DH5α，酶切鉴定阳性重组子，并进行序列测定。结果：经PCR能扩增出483bp的片段，与预期片段大小相符，构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段，测序结果与预期序列完全一致。结论：成功构建了牛bFGF真核表达重组体bFGF-pcDNA。     

ED-L2-LMP1-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建及鉴定EB病毒LMP1基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体。方法应用DNA重组技术，将EB病毒ED-12启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上，筛选阳性克隆，经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后，以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMVΔ8．9、包膜基因VSVG和带目的基因ED-12-LMP1-EGFP载体共同转染到293FF包装细胞内包装病毒，荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况，收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度。PCR和免疫组化鉴定LMP1表达。结果融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782bp的ED-12和1300bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒载体中。转染重组ED-12-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光；对该细胞PCR可以扩增出404bp大小的LMP1基因片段和370bp的EGFP基因片断；免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性。结论成功构建了ED-12-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体，为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础。     

Epstein-Barr病毒RPMS1基因的克隆及其编码区序列分析

目的：克隆Epstein—Barr(EB)病毒的RPMS1基因，并分析其编码区序列的变异情况。方法：从7例高发区鼻咽癌组织中分别提取总RNA，以RT—PCR扩增出RPMS1基因编码序列，克隆入pGEM—T载体，构建重组质粒pGEM—T／RPMS1，重组质粒经PCR、BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定，并进行序列测序。结果：成功克隆了高发区鼻咽癌的RPMS1基因，该基因编码序列第151nt发生G→A替换，导致相应第51位氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰氨。该变异位于DNA第Ⅴ外显子的155849nt，变异频率为6／7。结论：高发区鼻咽癌EB病毒RPMS1基因的编码序列存在变异；RPMS1基因可能参与高发区鼻咽癌的发生。     

爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2A cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆爱泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因，研究其基因工程疫苗，方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增出EBV B95．8株LMP2A全部编码蛋白的基因，并克隆至载体pGEM-T中，通过α－插入失活，PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒，采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸 序列。结果：克隆出LMP2A第1个外显子到第8个外显子的全部编码蛋白的cDNA，测序结果与EB病毒B95．8原型株LMP2AcDNA作同源比较，完全一致，结论：本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。     

牛pcDNA3-bFGF真核表达重组体的构建与鉴定

【目的】构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因真核表达质粒。【方法】设计含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的bFGFcDNA引物 ,采用PCR法从原核pET3c bFGF中扩增bFGFcDNA片段 ,纯化PCR产物 ,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切并连接至 pcDNA3 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,酶切鉴定阳性重组子 ,并进行序列测定。【结果】经PCR能扩增出 4 83bp的片段 ,与预期片段大小相符 ,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段 ,测序结果与预期序列完全一致。【结论】成功构建了牛bFGF真核表达重组体bFGF pcDNA3 。     

ED-L2-LMPl-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建及鏊定EB病毒LMPl基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体.方法 应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV△8.9、包膜基因VSVG和带目的 基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度.PCR和免疫组化鉴定LMP1表达.结果 融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782 bp的ED-L2和1 300 bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒栽体中.转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404 bp大小的LMP1基因片段和370 bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性.结论 成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。     

2004年邹城市中小型饮食行业餐具消毒效果调查

为确保消费的饮食安全，更好地了解饮食业餐具消毒效果卫生状况，从而为进一步加强监督管理提供依据，于2004年4～7月对邹城市所属中小型饮食业进行餐具消毒效果检测，共检测876份，现将结果报告如下。     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2007～2009年铜陵市人民医院产科抗生素应用分析

目的了解产科抗生素的应用情况并评价其合理性以加强临床使用的管理。方法随机抽查铜陵市人民医院2007～2009年产科出院患者病历中的抗生素使用情况,进行回顾性的调查统计分析。结果抗生素使用率达67%,头孢类药物是主要种类,以单独用药情况最多;多数品种DUI接近1。结论该院产科抗生素使用基本合理,但尚须建立有效的监管制度,控制过度使用。     

广东高州市2005年医疗机构消毒质量监测分析

目的评价辖区内医疗机构消毒灭菌质量，督促各医疗单位提高消毒灭菌效果，防止医源性感染的发生。方法对辖区内的医疗单位已消毒或灭菌的用品进行抽样检测，将检测结果进行统计学分析。结果这次采集使用中消毒液、无菌器械、物体表面、手术室空气和医务人员手共3556份，检测达卫生标准2955份，符合率为83、10％，不同样品检测达卫生标准百分率依次为97．37％、95．56％、86．25％、75．41％和62、49％。结论高州市医疗机构消毒灭菌质量用卫生指标评价，卫生站的符合卫生标准率低于医院，手术室空气和医务人员手的监测合格率低于使用中消毒液和无菌器械。     

2004年海南省医疗机构消毒效果监测分析

目的 了解海南省医疗机构消毒工作质量，以防止医院感染。方法按《医院消毒技术规范》中《医院消毒与灭菌的效果监测》方法对医疗机构各科室的紫外线灯、高压蒸汽灭菌器、医护人员手、物体表面、使用中消毒液、室内空气的消毒效果进行监测。结果紫外线灯合格率为91．07％高压蒸汽灭菌器合格率为95．98％物体表面及医护人员手细菌总数合格率为84．78％，室内空气细菌总数合格率为66．4％，使用中消毒液细菌总数合格率为95．07％。结论医院消毒质量合格率与各级医护人员认真落实工作的制度化、规范化、标准化有密切关系，应加强乡镇级卫生院和个体诊所的监测工作，提高消毒质量。     

儋州市2005年餐具消毒状况分析

为了防止经餐具引起疾病的传播，引起人们对餐具传播疾病的重视，了解《食品卫生法》颁布发几年以来，餐饮餐具的消毒状况，儋州市于2005年对239家大中型宾馆酒店、中小型排档、个体饮食店进行抽查分析。     

惠州市车间空气中有毒物检测结果分析

目的 了解惠州市电子、五金、电镀等企业生产车间中有毒物污染情况，以便提出有效的预防措施。方法根据中华人民共和国国家标准中气相色谱法、原子吸收分光光度法、分光光度法对车间空气中有毒物质进行检测。结果2003～2004年共检测车间空气样品3625份，舍格3511份，总合格率为96．8％。其中锰尘舍格率最低，为82．2％；其次是三氯乙烯91．0％，氰化氢93．4％，甲苯97．1％，硫酸97．2％，铅烟98．2％，正己烷99．2％。苯99．3％，二甲苯99．6％，其他合格率为100％。结论惠州市部分电子、五金、电镀企业车间空气中有毒物的浓度较高，应改善生产车间的通风设施，做好工人的个人防护。     

2005年广东省碘缺乏病监测结果分析

目的进一步了解广东省消除碘缺乏病工作的进展情况,为落实 2010年实现消除碘缺乏病措施修订提供依据. 方法根据卫生部办公厅下发的《关于开展全国第五次碘缺乏病监测的通知》要求进行监测. 结果居民户合格碘盐食用率为75.0%,非碘盐率20.1%;8～10岁儿童甲状腺肿大率为5.3%;尿碘中位数为140μg/L,《20μg/L的比例为1.7%;8～10岁儿童智商平均为101.1. 结论广东沿海及珠江三角洲部分地区非碘盐冲销问题依然存在,碘缺乏病病情也未出现明显回升,非碘盐冲销严重地区学生的碘营养水平未达到消除碘缺乏病的标准,2010年实现全省消除碘缺乏病的目标十分艰巨.     

2009年海南省农村生活饮用水监测报告

目的了解海南省农村生活饮用水卫生状况,为提高农村水质提供科学依据。方法每个监测点一年分枯水期和丰水期各检测1次,每次采集出厂水、末梢水水样各一份。按现行《生活饮用水卫生标准》（GB/T5749-2006）进行评价。结果地面水58.90%比地下水33.20%合格率高;枯水期39.18%比丰水期25.95%合格率高,监测项目合格率最低的是总大肠菌群47.7%,菌落总数86.60%,不同处理方式水厂的监测结果 ,完全处理水厂合格率65.66%比未处理水厂合格率26.12%高。结论海南省农村饮用水微生物超标严重,农民饮用的绝大多数是未消毒处理的水,饮用水卫生安全隐患多。