六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用，采用Wright—Giemsa染色观察细胞形态学变化，运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达，并进行细胞周期分析，半定量RT—PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明：HL-60细胞经不同浓度（0．5、1、2mmol/L）HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制，并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol／L HMBA处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，细胞停滞于G0／G1期；CD11b表达显著增高；c-myc、hTERT mRNA表达显著下调，mad1、p21、p27mRNA表达显著上调，而HDAC1 mRNA表达无明显变化。结论：HMBA能诱导HL-60细胞分化，其分子机制可能是通过调节c-myc／mad1开关引起p21、p27上调，并且下调hTERT mRNA表达，与HDAC1活性抑制无关。     

人脐带间充质干细胞增强全反式维甲酸对HL-60细胞的诱导分化作用

本研究探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)对全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化以及对HL-60增殖的影响。HL-60细胞分为4组:未经ATRA处理的对照组、与hucMSC细胞共培养的hucMSC组,经ATRA处理的ATRA组以及经ATRA处理并与hucMSC细胞共培养的ATRA+hucMSC组。在规定时间采用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测对照组和hucMSC组HL-60细胞增殖情况;在光学显微镜下观察各组细胞形态、NBT阳性细胞;应用real-timePCR方法检测c-myc基因表达水平以及流式细胞术检测CD11b表面标志以比较各组中HL-60细胞的分化情况。结果表明:共培养体系中hucMSC细胞能抑制HL-60的增殖,hucMSC∶HL-60为1∶1时,48小时时p0.05,72小时时p0.01;hucMSC∶HL-60为1∶5时,72小时时p0.05。在2μmol/LATRA的刺激下,ATRA+huc-MSC组与ATRA组相比,出现更多具有中性粒细胞形态的HL-60细胞和更高的NBT阳性率(p0.05);ATRA+hucMSC组中HL-60细胞c-myc基因表达更低(p0.05);ATRA+hucMSC组中HL-60细胞CD11b的表达更高(48小时p0.05,72小时p0.01)。结论:脐带间充质干细胞能抑制HL-60增殖并且增强ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用。     

吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有β-catenin/c-myc信号转导途径的抑制

目的：研究吲哚美辛对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导效应,从β-catenin信号转导途径揭示其分子机制。方法：以不同浓度的吲哚美辛(0,25,50,100,200,400μmol/LL)作用于HL-60细胞,以锥虫蓝染色确定干预后的HL-60细胞活力;分析HL-60细胞增殖能力;DNA梯状胶电泳鉴定细胞凋亡。Western印迹证明凋亡调节蛋白caspase-3的裂解激活以及β-catenin,c-myc蛋白质的表达。结果：吲哚美辛能明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡,并表现出浓度和时间依赖性;HL-60细胞凋亡伴有caspase-3蛋白的表达上调和裂解活化;β-catenin蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调和降解;c-myc蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调。结论：吲哚美辛能抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60细胞凋亡。β-catenin→c-myc信号转导途径受抑与吲哚美辛的抗白血病效应存在一定的联系。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

1,25-二羟基维生素D3诱导HL-60细胞向成熟单核细胞的分化

目的:观察1,25-二羟基维生素D3对白血病细胞株HL-60的分化诱导作用及其分子机制。方法:实验于2005-08/11在中南大学湘雅二医院中心实验室进行。将细胞浓度为2×108L-1HL-60细胞,分别以0,10-9,10-8,10-7,10-6mol/L的1,25-二羟基维生素D3孵育72h,对照组加入等量的无水乙醇。Western印迹技术鉴定维生素D受体在各组HL-60细胞的表达;Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞表面标志物CD14抗原的表达;反转录-聚合酶链反应法分析c-myc基因的表达。结果:①10-8mol/L1,25-二羟基维生素D3作用前后HL-60细胞均表达维生素D受体,且药物作用后维生素D受体的表达上调。②10-8mol/L1,25-二羟基维生素D3可明显诱导HL-60细胞向成熟单核细胞系分化,54.02%的细胞CD14表达阳性,对照组为5.23%(P<0.01)。③1,25(OH)2D3作用72h后,HL-60细胞的c-myc/β-actin比值为0.27,对照组为0.89,两者比较差异显著(P<0.01)。结论:①1,25-二羟基维生素D3可诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化,其受体维生素D受体参与了HL-60细胞代谢的调节。②1,25-二羟基维生素D3诱导细胞分化的同时伴随c-myc基因表达下调,表明c-myc基因表达下调是其诱导HL-60细胞分化的分子机制之一。     

甲异靛对K562和HL-60细胞Wnt信号通路的影响

本研究探讨甲异靛对K562细胞和HL-60细胞Wnt信号通路的影响。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测甲异靛处理的K562和HL-60细胞中GSK-3β及其下游相关基因及蛋白的表达水平。结果表明:甲异靛可使HL-60细胞中β-catenin和c-myc基因表达下降,但对K562细胞的这两种基因表达无明显影响;甲异靛略能增加HL-60细胞中GSK-3β蛋白表达,但明显降低K562细胞和HL-60细胞中p-GSK-3β和c-MYC蛋白表达水平;甲异靛对K562细胞中β-catenin表达没有明显影响,但能使HL-60细胞中β-catenin表达下降。结论甲异靛可抑制K562细胞和HL-60细胞中Wnt信号通路的传导,降低癌基因和相关蛋白的表达,从而发挥治疗白血病的作用。     

1,25-二羟基维生素D3诱导HL-60细胞向成熟单核细胞的分化

目的：观察1，25-二羟基维生素D3对白血病细胞株HL-60的分化诱导作用及其分子机制。 方法：实验于2005-08／11在中南大学湘雅二医院中心实验室进行。将细胞浓度为2&;#215;10^8L^-1-HL-60细胞，分别以0，10^-9，10^-8，10^-7，lO^-6mol／L的l，25-二羟基维生素D3孵育72h，对照组加入等量的无水乙醇。Western印迹技术鉴定维生素D受体在各组HL-60细胞的表达；Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化；流式细胞术检测细胞表面标志物CDl4抗原的表达；反转录-聚合酶链反应法分析c-myc基因的表达。 结果：①10^-8mol／Ll，25-二羟基维生素D3作用前后HL-60细胞均表达维生素D受体，且药物作用后维生素D受体的表达上调。②10^-5mol/L，25-二羟基维生素D3可明显诱导HL-60细胞向成熟单核细胞系分化，54．02％的细胞CDl4表达阳性，对照组为5、23％（P〈0．01）。⑨l，25（0H）：D3作用72h后，HL-60细胞的c-myc／f3一actin比值为0、27，对照组为0．89，两者比较差异显著（P〈0．01）。 结论：①l，25-二羟基维生素D3可诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化，其受体维生素D受体参与了HL-60细胞代谢的调节。②1，25-二羟基维生素D，诱导细胞分化的同时伴随c-myc基因表达下调．表明c-myc基因表达下调是其诱导HL-60细胞分化的分子机制之一。     

Myc基因表达与HL-60细胞分化的关系

目的:探讨Myc基因表达与HL-60分化的关系。方法:利用全反式维甲酸(ATRA)和小剂量三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞产生终末分化和部分分化模型,应用半定量RT-PCR分别检测药物处理前后细胞内c-MycmRNA的变化。结果:ATRA诱导的终末分化细胞c-MycmRNA表达明显下降,As2O3诱导的部分分化细胞c-MycmRNA呈现高表达。结论:Myc表达有助于阻止HL-60细胞从部分分化到终末分化转换。     

大萼香茶菜甲素对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 探讨大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)对白血病细胞系HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的MA处理HL-60细胞,锥虫蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的影响;以细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annex-in-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA诱导HL-60细胞的分化作用;用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas表达和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△Ψm)的变化.结果 HL-60细胞经MA作用后,MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞增殖,24、48、72 h的IC50值分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;形态学出现典型的凋亡细胞特征,亚G1期细胞和Annexin-V/PI标记阳性细胞显著升高;细胞发生部分分化,CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多;MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,线粒体膜电位(△Ψm)下降.结论 MA能抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、提高线粒体膜通透件和下调线粒体膜电位等有关.     

三氧化二砷对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞,应用MTS/PES方法检测细胞增殖,NBT实验测定细胞分化,流式细胞术检测细胞凋亡和分化相关抗原CD11b的表达,SYBR Green real-time RT-PCR方法检测C-FES、BCL-2、BAX、Survivin、P21和P27 mRNA水平变化。结果:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖,其效应呈剂量依赖和时间依赖性(r=-0.967;r=-0.954);低浓度(0.1、0.5和1.0μmol/L)As2O3能明显促进细胞分化,NBT阳性率和CD11b表达水平均有不同程度的增高;较高浓度As2O3(2.5和5.0μmol/L)能明显诱导细胞凋亡,抑制细胞分化。HL-60细胞经1.0和5.0μmol/L浓度As2O3处理后,C-FES mRNA表达均明显上调,但以1.0μmol/L组更为明显,证实C-FES mRNA表达水平与细胞分化程度成正比。此外,5.0μmol/L浓度As2O3显著下调了HL-60细胞BCL-2和Survivin的表达,相反明显上调了BAX、P21和P27的表达。结论:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖、促使细胞分化成熟及诱导细胞凋亡,其机制可能涉及C-FES以及细胞周期和凋亡相关基因的调控。     

白花蛇舌草注射液抑制HL-60细胞增殖及作用机理研究

本研究通过对白花蛇舌草注射液（hedyotic diffusa willd Injection，HDI）在体外抑制人白血病细胞株（HL-60）增殖作用的观察，以探讨HDI用于治疗白血病患者的作用机制。以白血病HL-60细胞株为靶细胞，采用MTT法观察不同浓度的HDI对HL-60细胞增殖的影响；用流式细胞术和DNA Ladder观察细胞凋亡、以及粒系细胞分化的表面标志（CD33、CD15）表达；RT—PCR检测HDI对survivin、bcl-2基因表达的影响。结果表明：低浓度的HDI（1．56ml／L）对HL-60细胞增殖无明显抑制作用（P〉0．05），但当HDI浓度提高至3．12—12．5ml／L时，细胞则出现明显的增殖抑制，且随浓度增加抑制作用增强（P〈0．05或P〈0．01）。Annexin-V／PI双参数和DNA Ladder检测发现，HL-60细胞经不同浓度HDI诱导24、48、72小时后均未出现典型的凋亡现象，而粒系细胞表面标志CD15的表达，经不同浓度HDI诱导1周后均显著增高，CD33表达无显著变化。HL-60经HDI（6．25ml／L）处理2周后，survivin、bcl-2基因表达无明显变化；当处理3周后，survivin、bcl-2基因表达均明显低于未经处理过的细胞，分别低于60％和44％？结论：白花蛇舌草注射液在一定浓度下能够直接抑制白血病细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞分化、凋亡。     

白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端对HL-60细胞增殖分化的影响

目的　探讨白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基胞内区远膜端对HL 60细胞增殖分化的影响。方法　构建LIF受体α亚基胞内区远膜端 (gp190CT3 )真核表达载体 ,利用脂质体转染HL 60细胞 ,G418筛选阳性细胞株 ,免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞的生长状态。以Westernblot及流式细胞仪分别检测野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞中细胞增殖核抗原 (PCNA)及CD15水平。 结果　转染有gp190CT3的HL 60细胞体积增大 ,与野生型HL 60细胞相比 ,转染有gp190CT3的HL 60细胞增殖速度减慢 ,PC NA的表达水平明显降低 ,而CD15水平明显升高 (转染有gp190CT3的HL 60细胞中CD15阳性细胞百分率为 89.98% ,野生型HL 60对照组中CD15阳性细胞百分率为 40 .79% )。结论　LIF受体α亚基胞内区远膜端参与LIF受体的信号转导 ,其效应是抑制细胞的增殖 ,促进细胞分化。     

丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化

为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。     

c-myb反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞HL-60的生物效应

为了研究c-myb在髓系白血病细胞的增殖和分化中所起的调控作用,合成了与c-myb mRNA翻译起始区域互补的一段反义寡脱氧核苷酸(18bp),将其作用于白血病细胞系HL-60细胞,观察到细胞生长抑制率平均为55%。经过c-myb反义寡脱氧核苷酸片段作用HL-60细胞,c-myb mRNA的表达不能被RT-PCR方法检测到,而在未加反义序列组和加随机序列组细胞中则能检测c-myb的表达。NBT染色后在Wright-Giemsa细胞涂片上可观察到未经处理和随机序列处理的95%HL-60细胞处于未分化阶段,经过c-myb反义寡脱氧核苷酸作用后的细胞中NBT阳性细胞占50％,部分细胞出现分化状态。     

Effect of Embelin on proliferation, differentiation and aopotosis of HL-60 cells

OBJECTIVE: To study the effect of embelin on proliferation, differentiation and apoptosis of HL-60 cells and explore its possible mechanism. METHODS: Different concentration of embelin were used to treat HL-60 cells. Cell growth curve was analysed by MTT assay, cell apoptosis by Annexin V/PI double staining and JC-1 dye. The differentiation of HL-60 cells was evaluated by expression of CD33, CD34, CD11b and CD14. Bone marrow cells (BMC) from nine patients with acute nonlymphocytic leukemia (ANML) were also studied. RESULTS: Embelin induced differentiation of HL-60 cells with significant increase of CD14 and CD11b expression at 33.97μmol/L for 3 days (P < 0.01). Embelin induced apoptosis of HL-60 cells in a time- and dose-dependent manner, the apoptosis rates were (9.23 ± 0.05)%, (25.86 ± 0.30)% and (39.03 ± 0.07)% respectively at 339.67 μmol/L of embelin for 12-, 24- and 48-hours treatment (P < 0.05); the apoptosis rates were (0.07 ± 0.03)%, (7.43 ± 0.30)%, (14.01 ± 0.01)%, (25.52 ± 0.03)% and (39.15 ± 0.01)% respectively at 10.19, 33.97, 101.90, 339.67 and 1019.02 μmol/L of embelin for 24-hours culture (P < 0.05). Clusters of differentiation antigen on BMC from three acute promyelocytic leukemia patients showed significant changes at 33.97 μmol/L of embelin treatment for 3 days. Embelin induced apoptosis of BMCs from all the nine ANML patients at 33.97 μmol/L for 24 hour. CONCLUSION: Embelin can inhibit proliferation and induce differentiation and apoptosis of HL-60 cells. The mechanism may be related to mitochondrial apoptosis pathway. Embelin at subtoxic concentration doesn't promote leukemia BMC differentiation, but at 339.67 μmol/L induces apoptosis of these cells.     

氯化锂抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡机理的研究

本研究旨在探讨氯化锂(LiCl)在体外抑制K562白血病细胞增殖和诱导凋亡的机制。在细胞培养体系中加入LiCl(30mmol/L)进行培养;以流式细胞术分析细胞周期;用半定量RTPCR检测bcr/abl融合基因mRNA的表达;用原子吸收光谱仪检测不同时间点细胞内Li 浓度及Na 、K 通道阻断剂TTX、FSK分别对细胞内Li 浓度的影响,并观察了Na 、K 通道阻断剂对LiCl抑制细胞生长的作用。结果显示:LiCl(30mmol/L)导致K562白血病细胞出现G2/M期阻滞,bcr/ablmRNA表达下降,细胞内Li 的浓度从30分钟开始增加,在2小时达高峰,以后逐渐下降,4小时达到平衡;Na 、K 通道阻断剂TTX(3.4×10-7mol/L)与FSK(5×10-5mol/L)分别阻断Na 、K 通道后可升高细胞内Li 的浓度,并增加LiCl对K562白血病细胞增殖的抑制作用。结论:LiCl诱导K562细胞增殖抑制和凋亡的机制可能与K562细胞G2/M期阻滞、下调bcr/ablmRNA的表达及Na 、K 通道被阻断后Li 通道的状态有关。     

1，25—二羟基维生素D3诱导HL—60细胞分化并下调nm23基因的表达

目的 观察1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）2D3]对白血病细胞株HL-60的诱导分化作用并探讨其机制。方法 通过MTT试验、细胞形态观察,表面标志分析和硝基四氮唑蓝（NBT）还原反应。观察1,25（OH）2D3作用后HL-60细胞增殖的改变和分化情况;通过流式细胞仪和RT-PCR检测细胞周期和nm23基因表达的变化。结果 HL-60细胞经1,25（OH）2D3作用后增殖受抑制,向成熟单核细胞系分化。细胞被阻滞在G1期、nm23基因的表达下调。结论 1,25（OH）2D3对HL-60细胞株具有诱导分化作用。其作用机制可能与下调nm23基因的表达有关。     

Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 研究Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的Embelin处理HL-60细胞,采用MTT法绘制生长曲线,通过Annexin V/PI 复染及JC-1染色,观察Embelin对HL-60细胞凋亡的影响;通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD33、CD34、CD11b和CD14表达的变化.在对HL-60细胞研究的基础上,选择9例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者的骨髓进行相应的研究.结果 Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性.24 h的,IC50值为429.98 μmoL/L.33.97 μmol/L的Embelin作用HL-60细胞3 d,流式细胞术检测结果 显示CD11b、CD14阳性细胞率均升高(P值均<0.01);339.67 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞后12、24及48 h的特异性凋亡率分别为(9.23 ±0.05)%、(25.86 ±0.30)%和(39.03±0.07)%,10.19、33.97、101.90、339.67及1019.02 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞24 h后特异性凋亡率分别为(0.07±0.03)%、(7.43±0.30)%、(14.01±0.01)%、(25.52±0.03)%和(39.15±0.01)%,其诱导凋亡的作用呈时间及剂量依赖性.33.97 μmol/L的Embelin作用于ANLL 患者骨髓细胞3 d,3例M3患者骨髓细胞表面分化抗原出现显著性改变;339.67 μmol/L的Embelin作用患者骨髓细胞24 h,9例均发生凋亡.结论 亚细胞毒浓度的Embelin可诱导HL-60细胞向单核细胞分化;高浓度的Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制及促进凋亡的作用.其促进凋亡的机制与线粒体凋亡途径有关.亚细胞毒浓度的Embelin对体外培养的M3患者骨髓细胞具有促进分化的作用;339.67 μmol/L的Embelin对ANLL骨髓细胞具有促进凋亡的作用.     

干扰素α-2b对人类早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的抑制增殖与促进凋亡的作用

背景:儿童急性白血病复发的主要根源是微小残留白血病细胞的存在,在试图清除微小残留病的众多治疗方法中,免疫生物治疗越来越受重视。以前的研究发现干扰素α-2b能有效抑制神经母细胞瘤和恶性淋巴瘤患儿体内肿瘤细胞的增长,其能否抑制白血病细胞的增长?目的:通过体外实验观察干扰素α-2b对白血病细胞的影响。设计:以人类早幼粒白血病细胞株HL-60为观察对象,对比观察实验。单位:青岛大学医学院附属医院儿科研究所细胞培养室、免疫实验室、细胞室。材料:HL-60细胞系由山东省医学科学院基础所提供。干扰素α-2b购自Megagene公司,FITC-兔抗鼠Ig工作液(CatEK001)和CD13抗人单克隆抗体工作液(Cat.DK013Y)购自协和干细胞基因工程有限公司。方法:体外建立HL-60细胞培养体系,调整细胞浓度为1×10~9 L~(-1),分为对照组和实验组,各实验组中加入终含量分别为5×10~5,1×10~6,2×10~6,5×10~6,1×10~7U/L的干扰素α-2b,对照组加入等量生理盐水,继续培养48 h。光镜下采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化,采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色观察细胞凋亡,通过CD13蛋白表达测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化,通过MTT实验检测HL-60细胞增殖活性。主要观察指标:根据HL-60细胞核染色质是否均匀一致及着色情况,判断细胞是否发生凋亡;根据酶标仪检测的吸光度(A值)判断HL-60细胞增殖情况;根据CD13阳性细胞数量判断HL-60细胞成熟程度。结果:①HL-60细胞凋亡:培养48h,当干扰素α-2b为5×10~5U/L时,以早期凋亡细胞为主,当干扰素α-2b含量为1×10~7 U/L时,以晚期凋亡细胞为主,HL-60细胞凋亡率均高于对照组,差异有显著性意义(X~2= 23.79.29.57,P<0.01)。②HL-60细胞增殖情况:当干扰素α-2b含量为2×10~6 U/L和1×10~7 U/L时,A值均低于对照组,差异有显著性意义(t=5.65,11.31,P<0.01)。③HL-60细胞成熟程度:当干扰素α-2b含量为1×10~6U/L和1×10~7 U/L时,CD13~ 细胞百分比均低于对照组,差异有显著性意义(x~2=6.89,14.73,P<0.01)。结论:干扰素α-2b有促进HL-60细胞凋亡、抑制HL-60细胞增殖和促进分化成熟的作用。     

人成纤维样基质细胞系对HL-60细胞增殖和VEGF表达的影响

为了观察正常人骨髓成纤雏样细胞系(HFCL)对白血病细胞系HL-60细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响，用免疫组织化学对HFCL细胞进行组织学鉴定；建立HL-60细胞和HFCL细胞共培养体系，台盼蓝柜柒法测定生长曲线；既染色和瑞-姬姆萨染色后进行分裂指数(MI)测定；流式细胞术检测细胞周期的变化；Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达；ELISA双抗体夹心法检测HL-60细胞表达VEGF水平。结果发现。与HFCL细胞共培养后HL—60细胞生长受抑，且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用跨室共培养组，其分裂指数表现为单独HL-60细胞组大于用跨室共培养组，更大于与HFCL细胞直接接触组。同时发现HL-60细胞与HFCL细胞共培养后G1期细胞增多，S期细胞减少，且PCNA表达下调，以直接接触组为甚。HL-60细胞与HFCL细胞共培养后，培养上清的VEGF水平减低，直接接触组和跨室共培养组下降程度一样，而与HL-60细胞共培养，HFCL细胞增殖无明显变化。结论：正常人骨髓成纤维样细胞能抑制白血病细胞系HL-60的增殖，抑制细胞周期，降低VEGF因子的表达。