Rho激酶抑制剂对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺血管重构的作用

目的：探讨先天性膈疝（congenital diaphragmatic hernia,CDH）大鼠模型胎仔肺Rho激酶的表达及其抑制剂法舒地尔对肺血管重构的影响。方法：将定时配种成功的SD雌鼠随机分为对照组（5只）、膈疝组（6只）和法舒地尔干预组（6只）。分别给予膈疝组和干预组除草醚（100 mg/只）一次性灌胃建立CDH动物模型,对照组灌等量橄榄油。孕16.5 d给予干预组腹腔注射法舒地尔（15 mg/kg,1次/d,连续３ d）,对照组和膈疝组予等量生理盐水腹腔注射。定时剖宫产取出胎肺,光镜下进行肺血管重构观察,采用RT-PCR法和Western blot法观察肺组织Rho激酶表达变化;Western blot法检测Rho激酶底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态。结果：膈疝组肺小动脉管壁厚度占血管外径百分比（WT%）和肺小动脉中膜厚度百分比（MT%）均明显高于对照组[（26.88±2.41） vs. （13.50±1.45）;（25.59±2.57） vs. （16.47±2.07）,P=0.000];管腔面积与血管总面积百分比（LA%）明显低于对照组[（39.22±2.23） vs. （61.20±3.23）,P=0.000]。法舒地尔干预组WT%、MT%显著低于膈疝组[（15.38±2.14） vs. （26.88±2.41）;（17.69±1.79） vs. （25.59±2.57）,P=0.000],LA%明显高于膈疝组[（58.67±3.06） vs. （39.22±2.23）,P=0.000]。与对照组相比,膈疝组Rho激酶mRNA和蛋白质表达明显升高,肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也明显增高（P=0.000）。法舒地尔干预后Rho激酶mRNA和蛋白、肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平均较膈疝组明显降低（P<0.01）。结论：先天性膈疝胎仔肺内存在肺血管重构,Rho/Rho激酶信号通路参与此过程,产前给予法舒地尔明显改善CDH胎仔的肺血管重构。     

血晶素对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺发育肺血管重构的影响

目的 探讨血晶素对先天性膈疝(CDH)动物模型胎仔肺发育不良和肺血管重构的影响.方法 将6只SD大鼠配种后第9.5天随机分为对照组、膈疝组和干预组.以除草醚诱导建立大鼠CDH动物模型,并以血晶素进行干预,第21天剖宫取出胎鼠及其肺,进行HE、弹力纤维染色观察,并进行图像分析.结果 除草醚诱导膈疝的发生率达63.6%(28/44),干预组胎肺发育接近对照组,其右肺重/体重值[(16.6±1.0)mg/g]和肺泡面积比[(45±6)%]均大于膈疝组[(14.6±1.7)mg/g、(28±6)%,P=0.03、P＜0.01],而肺泡间隔面积比[(44±6)%]低于膈疝组[(64±8)%,P＜0.01];同时腺泡前/内动脉(PAPA/IAPA)的平均中膜厚度百分比[(21.2±2.2)%、(18.2±2.1)%]低于膈疝组[(24.3±4.0)%、(21.9±3.9)%,P=0.03、P=0.006];单位视野内腺泡内动脉(IAPA)非肌型血管的比例[(78.2±3.0)%]高于膈疝组[(72.8±3.2)%,P=0.001],小动脉的肌化受到抑制.结论 血晶素产前干预虽不能降低CDH大鼠模型胎仔膈疝的发生率,但有助于促进CDH胎仔肺的发育,抑制其血管重构.     

盐酸氨溴索对大鼠膈疝模型肺发育的影响

目的 探讨盐酸氨溴索(沐舒坦)对大鼠先天性膈疝模型及其肺发育的影响及可能机制.方法 9只孕9.5 d的大鼠分为3组:对照组(2只)仅给予橄榄油灌胃,膈疝组(2只)及沐舒坦干预组(沐舒坦组,5只)给予除草醚200 mg灌胃.孕18.5、19.5、20.5 d,对照组及膈疝组分别腹腔注射生理盐水,沐舒坦组每日腹腔注射盐酸氨溴索100 mg/kg.孕21 d行剖宫产,观察各组膈疝发生率,取胎肺称重,行HE、弹力纤维EVG染色及肿瘤转化生长因子(TGF)-β1免疫组化染色,检测双肺湿重/体重、平均终末支气管密度(MTBD)、肺泡面积百分比(PLAA)、中小动脉中膜厚度百分比(MT%)和TGF-β1在肺的表达强度.结果 对照组30只子鼠无膈疝发生;膈疝组19只子鼠发生膈疝13只,沐舒坦组43只子鼠发生膈疝28只,两组间膈疝发生率差异无统计学意义(P=0.502).对照组肺发育成熟,膈疝组处于假腺体期,沐舒坦组发育居中.膈疝组双肺湿重/体重、PLAA均低于对照组[(45±6)mg/g比(60±7)mg/g,(50.1±4.0)%比(58.4±3.0)%,均P=0.001];MTBD、MT%均高于对照组[(14.0±1.8)比(8.5±1.1),(45±6)%比(29±6)%,均P=0.001];而沐舒坦组PLAA[(54.0±2.0)%]高于膈疝组(P=0.001),MTBD、MT%[12.2±2.1,(39±4)%]均低于膈疝组(P=0.006,P=0.002).膈疝组TGF-β1在肺的表达强度与对照组比较,差异有统计学意义(13 594±3113比9447±1355,P=0.001),沐舒坦组(10 015±818)低于膈疝组(P=0.01).结论 沐舒坦不影响膈疝的发生率,但在一定程度能促进膈疝大鼠胎肺发育、改善肺小动脉发育不良;抑制TGF-β1的表达、抗氧化可能是其下游的作用.     

先天性膈疝大鼠胎肺体外培养模型的建立

目的：建立先天性膈疝大鼠胎肺体外培养模型。方法：孕鼠Nitrofen灌胃,图像分析方法统计先天性膈疝大鼠胎肺体外培养模型的肺胚芽的发育参数（面积和周长）,统计数值以x^-±s表示,并对结果进行t检验。结果：对照组与肺胚芽发育明显比Nitrofen组成熟,培养96h后,可见胚芽发育并增殖;Nitrofen组肺胚芽发育差,培养72h后肺胚芽逐渐出现发育停止和坏死的情况;96h后,两组肺发育参数肺面积[（2．535±0．423）mm^2 vs（1．053±0．033）mm^2]及周长[（6．544±0．710）mm vs（4．862±0．458）mm]相比均有统计学意义（P〈0．05）。结论：Nitrofen在胚胎发育早期导致肺发育不良,适于先天性膈疝大鼠胎肺体外培养模型建立。     

汉防己甲素对大鼠先天性膈疝模型胎仔肺发育影响的电镜观察

目的探讨产前应用汉防己甲素（TET）对先天性膈疝（CDH）大鼠模型肺发育不良的影响。方法6只雌性SD大鼠孕后9．5d随机分为对照组、膈疝组和治疗组,各2只。膈疝组和治疗组给予除草醚125mg／只灌胃,对照组给予等量食用花生油。11．5d,治疗组给予30mg／kgTET灌胃（1次／d,连续3d）,膈疝组和对照组给予等量生理盐水。第21天剖宫取出胎鼠两侧肺组织,记录胎鼠膈疝形成情况,分别用光镜和透射电镜进行组织学观察,并对Ⅱ型肺上皮细胞进行记数和比较。结果膈疝组与治疗组共32只胎鼠有膈疝形成,致畸率为78％（32／41）,两组之间致畸率差异无统计学意义（P=0．645）。光镜与透射电镜观察下可见膈疝组无论在组织结构还是细胞亚微结构方面均存在肺发育不良,其发育明显滞后于正常对照组,通过TET治疗后的治疗组肺发育较膈疝组成熟,形态结构接近于正常对照组。各组Ⅱ型肺上皮细胞数量差异无统计学意义（P=0．779）。结论产前应用TET干预治疗对CDH大鼠肺发育不良具有明显的改善作用,使其肺内结构无论在组织结构还是细胞结构上,都更接近于成熟形态。故产前应用TET可促进CDH大鼠胎肺发育,为临床治疗CDH提供新的思路。     

汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型肺组织内皮素表达的影响及意义

目的探讨汉防己甲素对先天性膈疝动物模型肺发育及肺动脉高压的影响及意义。方法25只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组5只。定时配种成功后,于配种后第9．5天,正常对照组孕鼠每只给予食用油灌胃,膈疝组每只给予Nitrofen灌胃。配种后第18．5天,正常对照组每只腹腔内注射生理盐水;各膈疝组分别给予相应的干预措施;配种后第21天对所有孕鼠行剖宫产,取出胎鼠肺组织,将肺组织进行内皮素免疫组化染色和图像分析。结果正常对照组4只雌鼠共产仔38只,均无膈疝形成。膈疝组雌鼠19只共产仔126只,有膈疝形成者57只,致畸率45．2％。图像分析及数据统计结果显示各膈疝组之间内皮素在肺小动脉、细支气管中的表达强度差异有统计学意义。而且肺小动脉和细支气管之间内皮素表达强度以及肺小动脉相对血管壁厚度、相对血管壁面积和肺小动脉相对积分光密度之间存在正相关（r=0．847、0．851、0．844,均P〈0．01）。结论汉防己甲素能明显改善先天性膈疝大鼠模型的肺组织发育不良、减轻肺动脉高压,同时能降低内皮素在肺内的表达强度。汉防己甲素可能是通过抑制肺组织内皮素的合成与释放,抑制内皮素与相应受体结合而发挥其作用的。     

法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化及Rho激酶表达的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂-法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化的防治作用及其相关机制.方法 以普通饮食喂养大鼠作为对照组(n=10);链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠内膜损伤存活后,高脂饮食8周,分为动脉硬化组、瑞舒伐他汀组及法舒地尔组(n=10),继续高脂饮食4周,药物干预2个月,行血脂、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及Rho激酶mRNA检测.结果 与对照组相比,动脉硬化组大鼠血脂增高,VCAM-1、ICAM-1及Rho激酶mRNA表达增加(P<0.05);与动脉硬化组对比,瑞舒伐他汀组各指标均改善,而法舒地尔组除对血脂无明显影响外,与瑞舒伐他汀具有相似的抗动脉粥样硬化作用(P<0.05).结论 法舒地尔具有抗动脉粥样硬化作用,其机制可能在于通过干预Rho/Rho激酶信号通路表达,抑制动脉内皮的炎症反应.     

红景天苷对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的:探讨红景天苷对肺动脉高压大鼠的肺组织病理与RhoA/Rho激酶信号通路的影响。方法:将30只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为五组:正常对照组、模型对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组;除正常对照组注射对照溶剂外,其余组皮下注射60 mg/kg野百合碱,2~28d后,对低、中、高浓度组分别注射50、100、200mg/(kg·d)红景天苷,对照组注射生理盐水;实验结束,分别检测各组右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数;HE染色检测大鼠肺组织病理变化,RT-PCR检测肺组织ROCK1、RhoA mRNA表达水平,Western blot检测肺组织RhoA、ROCK1、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组RVSP及右心室肥厚指数显著上升,肺组织RhoA、ROCK1mRNA显著上调,ROCK1、RhoA、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平显著上调;不同浓度红景天苷干预后,各组RVSP及右心室肥厚指数出现变化,高浓度组显著下调;肺组织RhoA、ROCK1mRNA逐渐下调,RhoA、ROCK1、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平逐渐下调,呈浓度依赖,中、高浓度组变化显著。结论:一定剂量红景天苷能够缓解野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压,可能与其对RhoA/Rho激酶信号通路抑制有关。     

妊娠晚期维生素C干预对大鼠先天性膈疝模型中胎肺的作用

目的建立大鼠先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)模型,检验妊娠晚期维生素C干预对先天性膈疝的发生率以及胎肺发育的作用。方法妊娠S-D雌鼠12只采用抽签法随机分为4组,对照组(C)、维生素C组(W)、膈疝组(N)及治疗组(T)。N、T组除草醚(nitrofen)灌胃建立胎鼠先天性膈疝模型;孕晚期W、T组维生素C干预。正常孕期前一天(孕21天)剖腹取出胎鼠,记录体质量及肺脏质量;检查胎鼠膈疝的发生率、发生部位、膈肌缺损程度;采用免疫组织化学技术显示ki-67的表达,计算机软件分析计算胎肺组织中增生细胞的比例。结果膈疝组与治疗组膈疝发生率差异无统计学意义。治疗组胎鼠平均体质量高于另3组,差异有统计学意义。维生素C组及治疗组的平均胎肺质量均高于对照组,对照组高于膈疝组,差异有统计学意义。膈疝组增生细胞比例低于另3组,差异有统计学意义。结论通过除草醚的应用,成功建立了大鼠的先天性膈疝模型。膈疝组胎鼠的肺脏质量降低,增生细胞比例减少,可能存在肺脏发育不良。维生素C不能明显改变胎鼠先天性膈疝的发生率,但可提高胎鼠肺脏质量,提高增生细胞的比例,促进胎肺发育。     

胎儿先天性膈疝产前超声诊断意义

目的探讨超声诊断胎儿先天性膈疝的声像图特点及临床价值。方法分析经产前常规超声检查诊断为先天性膈疝的8例胎儿的超声声像图特点。结果本组8例病例中,6例为左侧膈疝,1例为右侧膈疝,1例为双侧膈疝。其典型的声像图特点均表现为胎儿胸腔内占位性病变及胎儿心脏移位。结论全面、细致的产前超声检查可对胎儿先天性膈疝做出较明确的诊断,并对疾病的预后评估有重要的临床意义。     

11例胎儿先天性膈疝的产前诊断和围生期处理

目的：探讨胎儿先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)产前诊断和围生期管理,完善此类疾病的临床处理路径,达到优生优育的目的。方法：超声诊断为胎儿CDH的孕妇11例,依据超声明确孕龄,并行胎儿染色体核型分析检查,排除染色体异常。诊断明确后综合评估胎儿宫内风险、出生后风险、膈疝修补术后预后情况等,根据患者及家属意见确定是否继续妊娠,统计妊娠结局。结果：本组中,除1例孕期拒绝行染色体核型分析外,其余10例行染色体核型分析均未见异常;11例中,10例确诊为CDH,1例未见异常,孕期超声诊断CDH准确率为90.9%;对于确诊病例进行产前咨询和评估,与家属沟通后,4例(40.0%)自愿选择引产终止妊娠,其中1例尸检证实膈疝合并脊柱畸形,其余3例均拒绝尸检;另外6例(60.0%)选择继续妊娠,其中1例新生儿出生后即出现重度窒息,家属放弃抢救,5例产后即转入小儿心胸外科。转科的5例中,其中1例因先天性膈疝的症状轻,暂无手术指征,继续观察正常后出院,其余4例待其呼吸循环功能改善后(3～5d),行膈疝修补术,5例随访均良好。结论：通过早期准确诊断、多学科协作并且充分评估,患者配合完善产前各项检查,及时进行医患沟通,适宜的产时、产后处理与监护,定期随访,尽可能完善此类疾病的临床处理路径,才能改善CDH胎儿的围生期和婴幼儿期结局,降低新生儿的病死率。     

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织Rho激酶的表达及意义

目的 探讨低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺组织小G蛋白Rho相关激酶(Rho激酶)的表达及其抑制剂法舒地尔对HPH的影响. 方法 24只雄性SD大鼠随机均分为对照组,低氧模型组和法舒地尔干预组.测各组大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot),从基因、蛋白质水平观察肺组织Rho激酶表达变化;免疫印迹法检测其底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态,作为该激酶功能活化的标志. 结果 低氧模型组Rho激酶mRNA和蛋白明显升高,肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也较对照组显著增高,并与mPAP及RVHI均呈明显正相关(均P＜0.01).法舒地尔干预后mPAP、RVHI、Rho激酶mRNA和蛋白、肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平均明显降低.结论 Rho/Rho激酶信号通路在HPH发病中具有重要作用,法舒地尔通过抑制Rho激酶的表达,对低氧所致的肺动脉高压、右心室肥厚具有较好的预防和逆转作用.     

先天性膈疝和创伤性膈疝的临床诊治研究

目的通过临床病例分析总结先天性膈疝和创伤性膈疝的诊治区别。方法回顾性分析我院2001年1月-2011年5月收治的78例膈疝患者的临床诊治,其中先天性膈疝42例,创伤性膈疝36例,均行膈疝修补术。经腹手术修补35例,经胸手术修补40例,经胸腹联合手术修补3例。结果先天性膈疝42例中39例治愈,治愈率为93％,死亡1例,2例复发;创伤性膈疝36例中35例治愈,治愈率达97％,死亡1例。结论膈疝是一种临床急症,病因不同,诊治应有所区别,关键是抓住重点,抓住时机为患者手术,解决患者的病痛,抢救患者的生命。