FBXL20对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的 观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20) 对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制.方法 采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减效率.利用CCK-8及集落形成实验观察FBXL20的下调对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot分析周期蛋白的改变,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA) 探究FBXL20可能参与的生物学过程.结果 干扰组FBXL20的蛋白表达(0. 36 ± 0. 02) 显著低于对照组(0. 58 ± 0. 01)(P＜0. 01) .与对照组相比,干扰组的增殖能力增强(P＜0. 05),形成的集落数目也显著增加(100 ± 20 vs 53 ± 6)(P＜0. 05),且停留在G2 /M期的细胞比例明显降低(5. 65 ± 1. 35 vs 9. 94 ± 1. 44)(P＜0. 05) .Western blot结果显示Cyclin D1、ERK1 /2蛋白表达无明显变化(P＞ 0. 05),CDK2、Cyclin E、CDK1、Cyclin A、Cyclin B1蛋白表达显著增加,而p-ERK1 /2则显著降低(P＜0. 05) .GSEA结果显示FBXL20的低表达与G2 /M检查点呈正相关(P＜0. 01) .结论 下调FBXL20可以加快A549细胞G2 /M期的进程,提高其生长能力.其机制可能是通过抑制p-ERK的激活,使得其下游周期蛋白CDK1、Cyclin A、Cyclin B1表达增加而实现的.     

miR-429靶向FSTL1基因对非小细胞肺癌生物学功能的影响

目的 探讨微RNA(miR)-429靶向卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)基因对非小细胞肺癌生物学功能的影响。方法 收集2020年1月至2021年6月于该院行根治性切除术的60例非小细胞肺癌患者肿瘤组织和癌旁组织,实时荧光定量PCR检测miR-429的表达;按照组织miR-429表达水平依据中位数法进行分组,分为miR-429高表达和miR-429低表达患者,分析其临床特征和预后情况。筛选H1299细胞,分为对照组、miR-429 NC组、miR-429 mimics组,又将pcDNA3.1-con和pcDNA-FSTL1分别转染至高表达miR-429的H1299细胞,分别为miR-429 mimics+pcDNA3.1组和miR-429 mimics+pcDNA-FSTL1组。Transwell检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,双荧光素酶报告实验检测miR-429和FSTL1基因靶向关系。结果 非小细胞肺癌组织中miR-429相对表达水平明显低于癌旁组织,非小细胞肺癌细胞系SPCA1、A549、H460、H1299中miR-429相对表达水平明显低于正常肺支气管上皮细胞BESA-2...     

LncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1对非小细胞肺癌细胞生物学行为的调控作用

目的：研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17 (lncRNA SNHG17）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法：培养人NSCLC A549细胞和H1299细胞,细胞按照分组要求分别转染pcDNA3.1-NC、SNHG17过表达质粒（pcDNA3.1-SNHG17）、si-NC、SNHG17小干扰RNA (si-SNHG17）、mimics NC、微小RNA-384模拟物（miR-384mimics）、inhibitor NC、miR-384抑制剂（miR-384 inhibitor）、pcDNA3.1-星形细胞上调基因1(AEG1）和si-AEG1。实时荧光定量PCR (RT-qPCR）法检测A549细胞和H1299细胞及各组转染后细胞中lncRNA SNHG17、miR-384和AEG1 mRNA表达水平;ENCORI和TargetScan数据库预测lncRNA SNHG17与miR-384、miR-384与AEG1 mRNA之间的靶向结合作用。A549细胞分为si-NC组、si-SNHG17组、inhibitor NC组、miR-384 ...     

LKB1蛋白表达在非小细胞肺癌中的预后意义研究

目的探讨LKB1蛋白表达情况对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的预后意义。方法应用免疫组化方法检测70例非小细胞肺癌患者中LKB1蛋白的表达情况。结果 LKB1蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。LKB1蛋白表达的阳性率在高分化肺癌(83.87%)、无淋巴结转移的肺癌(88.46%)和Ⅰ～Ⅱ期肺癌(75.00%)中的表达阳性率高于中-低分化肺癌(51.28%)、有淋巴结转移的肺癌(50.00%)和Ⅲ期肺癌(47.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的低表达可能提示肺癌的预后不良。     

非小细胞肺癌细胞周期素D1(CyclinD1)与细胞周期素E(CyclinE)表达特点的研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期素D1（CyclinD1）及细胞周期素E（CyclinE）的表达特点。方法采用免疫组织化学S-P法,对40例NSCLC患者切除的癌组织石蜡切片进CyclinD1与CyclinE表达检测。结果 40例NCSLC患者中有19例表达CyclinD1,21例表达了CyclinE;CyclinD1的表达与原发肿瘤大小、分化程度有关,CyclinE表达与淋巴结转移状态相关。结论非小细胞肺癌CyclinD1与CyclinE的表达高于正常肺组织,过表达与NSCLC的发生有关,CyclinD1过表达可能有助于早期诊断。CyclinE的过表达可能提示淋巴结转移。     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

孕酮联合奥曲肽抑制人非小细胞肺癌A549生长的实验研究

目的：探讨孕酮对人非小细胞肺癌A549细胞生长抑素受体（somatostatin recepter，SSTR）表达的调节及孕酮联合奥曲肽对A549细胞生长的抑制作用。方法：免疫组化法检测孕激素受体的表达；RT-PCR检测SSTR亚型mRNA的表达；MTT法检测孕酮与奥曲肽联合应用后A549细胞的生存率。结果：A549细胞表达孕激素受体及SSTR2、SSTR1、SSTR4和SSTR5，不表达SSTR3。10nmol/L孕酮作用24?h后，A549细胞出现了SSTR3的表达，延长药物作用时间至48h，SSTR3继续上调(P＝0.012)。孕酮联合奥曲肽抑制A549细胞生长的作用比奥曲肽单药更强(P<0.05)。结论：孕酮上调A549细胞中SSTR各亚型mRNA的表达；孕酮联合奥曲肽对A549细胞的生长具有更强的抑制作用。     

9—顺—维甲酸对非小细胞肺癌CyclinDl、Cdk4表达的影响

目的研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性.方法采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化.结果9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P＜0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P＜0.01).结论9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关.     

FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的：探讨叉头蛋白3 (FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法：采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^-1 DAPT,作为0、10和20μmol·L^-1 DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^-1DAPT、 1.0mg·L^-1Dox和1.0mg·L^-1Dox联合10μmol·L^-1DAPT,作为0μmol·L^-1 DAPT组、1.0 mg·L^-1     

川陈皮素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的研究

目的:探讨川陈皮素(5,6,7,8,3′4-′hexamethoxyflavone)促非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用。方法:以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞,分别用细胞生长曲线、集落形成抑制实验研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术观察细胞周期改变。结果:生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显的时效和量效关系;集落形成抑制实验表明:药物浓度10μg/mL~40μg/mL对A549集落形成抑制率为10%~50%。Hoechst 33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯状条带。流式细胞仪检测到细胞周期阻滞于G2/M期,G0/G1期细胞明显减少;随着剂量的增加凋亡率明显增高。结论:川陈皮素可以诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡。     

雷帕霉素对人非小细胞肺癌细胞株A549生长及增殖的影响

目的探讨雷帕霉素对人非小细胞肺癌细胞株A549生长和增殖的影响。方法分别以0(阴性对照组)、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、5μmol/L雷帕霉素干预A549细胞(雷帕霉素干预组)24、48、72 h,MTT比色法检测细胞活力。分别以0(阴性对照组)、0.01、0.05、0.1、0.5、1μmol/L雷帕霉素干预A549细胞(雷帕霉素干预组)48 h,光学显微镜观察细胞形态变化,PI单染流式细胞仪分析细胞周期。结果 MTT比色法检测结果显示:雷帕霉素干预组细胞生长抑制率显著高于阴性对照组(P<0.05),其中以5μmol/L雷帕霉素干预72 h组的细胞生长抑制率最高。与阴性对照组比较,经不同浓度雷帕霉素干预48 h后的A549细胞变圆缩小,伪足缩短,细胞间距增大;细胞周期检测结果显示:与阴性对照组比较,雷帕霉素干预组G0/G1期细胞百分率明显增加,S期细胞百分率显著减少(P<0.05)。结论雷帕霉素对人肺癌细胞株A549的生长和增殖具有明显抑制作用,并呈现一定的时间和浓度依赖性。     

雷帕霉素对人非小细胞肺癌细胞株A549生长及增殖的影响

目的探讨雷帕霉素对人非小细胞肺癌细胞株A549生长和增殖的影响。方法分别以0(阴性对照组)、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、5μmol/L雷帕霉素干预A549细胞(雷帕霉素干预组)24、48、72 h,MTT比色法检测细胞活力。分别以0(阴性对照组)、0.01、0.05、0.1、0.5、1μmol/L雷帕霉素干预A549细胞(雷帕霉素干预组)48 h,光学显微镜观察细胞形态变化,PI单染流式细胞仪分析细胞周期。结果 MTT比色法检测结果显示:雷帕霉素干预组细胞生长抑制率显著高于阴性对照组(P<0.05),其中以5μmol/L雷帕霉素干预72 h组的细胞生长抑制率最高。与阴性对照组比较,经不同浓度雷帕霉素干预48 h后的A549细胞变圆缩小,伪足缩短,细胞间距增大;细胞周期检测结果显示:与阴性对照组比较,雷帕霉素干预组G0/G1期细胞百分率明显增加,S期细胞百分率显著减少(P<0.05)。结论雷帕霉素对人肺癌细胞株A549的生长和增殖具有明显抑制作用,并呈现一定的时间和浓度依赖性。     

橙皮甙对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响

目的 观察橙皮甙对耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响.方法 培养A549及A549/DDP细胞,绘制细胞生长曲线 ;MTT法测定A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数 ;②测定6、12、24、48及96 mg/L橙皮甙在6、12、24及48 h对A549/DDP细胞增殖的抑制率.③用24 mg/L橙皮甙处理A549/DDP细胞24 h后,用流式细胞计量术分析细胞周期.结果 ①A549/DDP细胞和A549细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.68±0.11)h和(33.54±0.84)h; A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数为12.90.②橙皮甙对A549/DDP细胞的抑制率随橙皮甙浓度增加和(或)时间的延长而增强(Pearson相关分析P＜0.05).③24 mg/L橙皮甙作用A549/DDP细胞24 h后,实验组G2/M期和S期细胞数比对照组减少(P＜0.05).结论 ①A549/DDP细胞基本保留了A549细胞的生长特性,对顺铂有明显耐药性.②橙皮甙对A549/DDP生长有抑制作用.③橙皮甙可诱导A549/DDP细胞阻滞于G2/M期.     

没食子酸对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的：探讨没食子酸对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,阐明其药物毒性的分子作用机制。方法：体外培养人非小细胞肺癌A549细胞,将A549细胞分为对照组及低、中和高剂量没食子酸组,没食子酸给药剂量分别为0、300、500和750 μmol·L^-1。MTT法检测各组细胞存活率,瑞氏-姬姆萨染色液检测各组A549细胞形态表现,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组A549细胞中Fas和FasL蛋白的表达水平;分光光度法检测各组A549细胞中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。结果：与没食子酸处理6 h比较,处理12和24 h时各剂量没食子酸组A549细胞存活率明显降低（P<0.05）,随着作用时间延长,细胞存活率逐渐降低;没食子酸处理24 h后,与对照组比较,低、中和高剂量没食子酸组A549细胞存活率明显降低（P<0.05）。瑞氏-姬姆萨染色,各剂量没食子酸组细胞出现胞质皱缩,细胞体积变小、变圆等凋亡形态表现;随着没食子酸剂量增加,A549细胞凋亡率逐渐增加;随着没食子酸剂量的增加,A549细胞中Fas和FasL蛋白的表达水平有升高趋势,且Fas与FasL蛋白表达水平呈正相关关系（r=0.92,P<0.05）。与对照组比较,低、中和高剂量没食子酸组A549细胞中ROS水平升高（P<0.05）;CAT活性升高,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,且CAT活性随没食子酸剂量增加而逐渐降低。低剂量没食子酸组A549细胞中SOD活性明显高于对照组（P<0.05）;中和高剂量没食子酸组A549细胞中SOD活性虽高于对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,且SOD活性随没食子酸剂量增加而逐渐降低。低剂量没食子酸组A549细胞中GSH-Px活性高于对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;中和高剂量没食子酸组A549细胞中GSH-Px活性低于对照组,但组间比较差异亦无统计学意义（P>0.05）;随着没食子酸剂量的不断增加,GSH-Px活性反而降低。低、中和高剂量没食子酸组间A549细胞中CAT、SOD和GSH-Px活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：没食子酸可能是通过诱导氧化损伤的方式抑制肺癌细胞增殖,Fas/FasL信号通路可能是其诱导细胞凋亡的重要作用机制之一。     

纳米二氧化钛颗粒体外对人肺腺癌A549细胞的毒性效应

目的探讨不同作用时间下粒径为25nm的锐钛矿型二氧化钛(TiO2)颗粒对人肺腺癌A549细胞的毒性效应。方法将100μg/ml的纳米TiO2颗粒悬液与A549细胞在37℃、5%CO2的细胞培养箱中分别孵育1h、4h、8h和24h后,收集细胞。通过乳酸脱氢酶(LDH)检测实验检测纳米TiO2颗粒对细胞膜的损伤情况;通过ATP检测实验检测纳米TiO2颗粒对线粒体产生的影响;通过超氧化物歧化酶(SOD)活性检测实验检测纳米TiO2颗粒对细胞的氧化损伤情况;采用透射电子显微镜观察纳米TiO2颗粒引起细胞超微结构的变化;利用CCK-8法检测纳米TiO2颗粒对细胞存活率的影响。结果随着纳米TiO2颗粒作用时间的延长,细胞外液中LDH活性增强,细胞内ATP浓度降低,SOD活性降低,细胞存活率呈现明显下降(P<0.05),且细胞线粒体和内质网出现不同程度的肿胀和扩张。结论纳米TiO2颗粒体外能够引起肺腺癌细胞氧化损伤,抑制细胞生长,且对细胞的毒性效应存在时间依赖性。     

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

Urolithin A在肺癌细胞系A549中的抗增殖效应

目的:研究尿石素A(Urolithin A)对肺癌细胞系A549增殖的影响和作用机制。方法:流式细胞术检测Urolithin A对A549细胞凋亡的影响;SA-β-gal检测Urolithin A对A549细胞衰老的状态;Western blot检测Cleaved PARP、p21、PUMA、p53蛋白的表达量。MTT实验探究Urolithin A对A549细胞的生长抑制作用。结果:不同浓度Urolithin A作用A549细胞,细胞凋亡率升高(P<0.05);SA-β-gal实验显示,Urolithin A促进A549细胞衰老(P<0.05);Western blot显示,Cleaved PARP、p21、PUMA、p53的蛋白表达量随Urolithin A浓度的升高而上调;不同浓度Urolithin A处理A549细胞,细胞活力以浓度依赖性下降,增殖抑制率升高(P<0.05),敲低p53能减弱Urolithin A对A549细胞引起的增殖抑制(P<0.05)。结论:Urolithin A抑制A549细胞的增殖,可能是由p53介导的。     

KIAA1456靶向调控Runx1抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭

目的探讨KIAA1456靶向调控Runx1对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组织化学法检测91例肺癌及癌旁组织中KIAA1456表达情况,分析KIAA1456与肺癌患者临床病理特征的相关性,并进行Kaplan-Meier生存分析。用Lipofectamine法将miR-NC KIAA1456 RNAi和pCDNA3.0-HA-KIAA1456质粒转染A549细胞,MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭能力,Western blotting法检测细胞KIAA1456、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达。结果KIAA1456在肺癌组织中的高表达率明显低于癌旁组织(P＜0.05);KIAA1456在不同淋巴结转移、TNM分期分层间表达有差异(P＜0.05)。KIAA1456高表达肺癌患者5年总生存率高于KIAA1456低表达者(P＜0.05)。与阴性对照组比较,KIAA1456 RNAi组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达均增加,KIAA1456表达降低;KIAA1456质粒组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1和MMP-9表达均降低,KIAA1456和Runx1表达增加(P＜0.05)。结论KIAA1456可作为肺癌的抑癌基因,通过靶向调控Runx1表达,抑制A549细胞增殖和侵袭。     

多西紫杉醇对非小细胞肺癌细胞株A-549放疗增敏作用及机制

目的:研究多西紫杉醇对体外培养非小细胞肺癌细胞的细胞周期改变和凋亡影响,及其放疗增敏的作用及机制.方法:以非小细胞肺癌细胞株A-549为实验对象,MTT法观察多西紫杉醇对A-549细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率.结果:多西紫杉醇对A-549细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(1μg/ml)时即可降低A-549细胞的克隆形成率.各处理组细胞的细胞周期和凋亡率结果表明,多西紫杉醇+放疗组G2/M期细胞比例较其他组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.05).结论:多两紫杉醇在低细胞毒性浓度下对非小细胞肺癌细胞株A-549有放射增敏作用;多西紫杉醇对A-549细胞增敏其机制可能与其能改变细胞生长周期并诱导其凋亡有关.