miR-1285通过YAP对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨miR-1285通过转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 构建miR-1285的质粒，使K562细胞过表达miR-1285及敲低miR-1285,分为miR-1285 mimics、mimics control、miR-1285 inhibitor、inhibitor control四组；采用qRT-PCR法定量分析四组中miR-1285的表达量，验证转染效率，利用CCK8、AnnexinⅤ-FITC方法检测四组K562细胞的凋亡、增殖情况；使用Western blot检测YAP及其下游分子表皮生长因子受体(EGFR)等变化，检测凋亡相关分子BAX、Bcl-2蛋白表达变化。结果 敲低miR-1285后，可促进K562细胞的增殖，抑制凋亡，YAP的表达升高，下游分子EGFR表达相应升高，凋亡相关分子BAX降低，而Bcl-2表达升高；而过表达miR-1285后，K562细胞增殖减弱，凋亡增加，YAP表达降低，下游分子P-EGFR表达降低，凋亡分子BAX表达升高，而Bcl-2表达降低。结论 miR-1285...     

MicroRNA-210对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响

目的：探讨MicroRNA-210（miR-210）在卵巢癌细胞生长过程中的作用及其与放射治疗敏感性的关系,阐明miR-210对卵巢癌发展和治疗的影响及可能的分子机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株OVCAR3和SKOV3,应用细胞转染法分别将miR-210 mimic和抗miR-210抑制剂转染至OVCAR3和SKOV3细胞中,并利用Real-time PCR法进行鉴定,得到miR-210过表达和低表达卵巢癌细胞模型。将2种细胞分别分为对照组、miR-210过表达组和miR-210低表达组,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用不同剂量（30、50和100 Gy）电离辐射照射对照组和miR-210过表达组细胞,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用Western blotting法检测50Gy照射剂量组卵巢癌细胞中凋亡相关蛋白表达水平。所有实验细胞培养采用3复孔,并重复3次。结果：与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高,miR-210低表达组细胞增殖活性降低（P<0.05）;在给予电离辐射照射后,与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高（P<0.05）;且凋亡相关蛋白BAX在2株细胞中表达水平均明显下降,而BCL-2表达水平均明显升高。结论：miR-210可促进卵巢癌细胞的生长,同时通过抑制凋亡作用降低卵巢癌细胞对放射治疗的敏感性。     

微小RNA-134-5p靶向作用于EGFR对卵巢癌SKOV3和A2780细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-134-5p(miR-134-5p)靶向作用于表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌细胞生长的影响.方法 以卵巢癌细胞系SKOV3和A2780为研究对象,根据处理方法分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-134-5p).采用qRT-PCR和Western blot检测EGFR基因及下游靶蛋白的表达量;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测卵巢癌细胞增殖能力.结果 实验组EGFR基因及下游靶蛋白表达显著下调,其中SKOV3细胞中EGFR mRNA下调至48％(P＜0.05),A2780细胞中EGFR mRNA下调至47％(P＜0.05).实验组细胞的细胞周期明显受到抑制(P＜0.05),miR-134-5p通过EGFR靶蛋白诱导细胞凋亡(P＜0.05).实验组细胞的增殖活性和集落形成能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 miR-134-5p可通过靶向抑制EGFR基因,促进细胞周期停滞和细胞凋亡,降低卵巢癌细胞的增殖能力.     

miR-9和miR-210在卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞株中的表达及机制探讨

目的 检验miR-9和miR-210在卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞株中的差异表达,观察其对卵巢癌细胞生物学功能的影响并探讨其作用机制,为卵巢癌的靶向治疗积累数据,提供参考方向。 方法 培养人正常卵巢上皮细胞株,卵巢癌SKOV-3和SKOV-3/DDP细胞株,RT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)检验miR-9和miR-210在各细胞株中的表达差异;将miR-9mimics和miR-210mimics转染至卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP中,用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V/PI法测细胞凋亡,细胞划痕实验测细胞迁移能力的改变及细胞侵袭实验测细胞侵袭情况。 结果 miR-9在SKOV3及其耐药株SKOV-3/DDP中低表达,而miR-210在SKOV3及其耐药株SKOV-3/DDP中高表达;miR-9/miR-210过表达抑制3种细胞的增殖;miR-9/miR-210过表达促进细胞发生凋亡;miR-9/miR-210过表达导致3种细胞迁移和侵袭能力下降。 结论 miR-9/miR-210在卵巢癌细胞中起到抑癌基因的作用,过表达miR-9/miR-210能显著抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进肿瘤细胞的凋亡;miR-9/miR-210可以作为卵巢癌及复发性卵巢癌新的潜在治疗靶点。      

肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.     

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的 研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法 采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM52 3’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果 卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多...     

LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中的表达及对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中的表达及影响SKOV3细胞恶性生物学行为的作用机制。方法 收集2020年10月~2021年6月我院病理科经过临床确诊的55例卵巢癌患者,利用RT-qPCR技术分析卵巢癌组织、癌旁组织、SKOV3细胞和IOSE80细胞中FOXD3-AS1、miR-325和CDCA5的表达;siRNA靶向敲降FOXD3-AS1和CDCA5的表达,通过细胞克隆形成实验、细胞迁移实验和Western blot检测SKOV3细胞增殖、迁移及其EMT能力。miRanda、TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析LncRNA FOXD3-AS1与miR-325、miR-325与CDCA5之间的关系。miR-325 inhibitor转染细胞,或pcDNA-FOXD3-AS1与miR-325 mimics共转染细胞后分析SKOV3细胞增殖、迁移和EMT情况。结果 与IOSE80细胞、癌旁组织对比,SKOV3细胞、卵巢癌组织内LncRNA FOXD3-AS1、CDCA5表达上调（P＜0.01）,miR-325表达下调（P＜0.01）。siRNA靶向敲降FOXD3-AS1和CDCA5的表达抑制了SKOV3细胞增殖、迁移与EMT;LncRNA FOXD3-AS1的下游作用靶点为miR-325,miR-325的作用靶点为CDCA5;pcDNA-FOXD3-AS1与miR-325 mimics共转染细胞后部分逆转了miR-325 mimics转染细胞对SKOV3细胞增殖、迁移和EMT的抑制作用。结论 LncRNA FOXD3-AS1在卵巢癌SKOV3细胞中表达上调及通过miR-325/CDCA5轴影响SKOV3细胞恶性生物学行为。     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞系OVCAR3增殖、侵袭及凋亡的影响及作用机制。方法 应用实时PCR检测lncRNA MALAT1和miR-218在人卵巢癌细胞系（OVCAR3）和正常人卵巢上皮细胞系（HOSE）中的表达。利用脂质体转染法将无意义序列阴性对照（si-NC）组、MALAT1干扰序列（si-MALAT1）组以及si-MALAT1+miR-218抑制剂组分别转染卵巢癌细胞，MTT法检测各组细胞增殖情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，Transwell实验检测各组细胞侵袭情况。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1和miR-218的靶向关系。实时PCR检测各组OVCAR3细胞中MALAT1、miR-218的表达；Western blotting检测各组OVCAR3细胞中Runx2的表达。结果 与人正常卵巢上皮细胞比较，卵巢癌OVCAR3细胞中MALAT1表达升高（P <0.05）,miR-218表达下降（P <0.05）。与si-NC组比较，si-MALAT1组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力...     

Toll样受体4参与卵巢癌细胞增殖与凋亡的调控

目的 探讨Toll样受体4 (TLR4)异常表达对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法 免疫组化法检测卵巢癌及其周围正常组织中TLR4的表达情况；构建针对TLR4基因的siRNA，转染人卵巢癌细胞株SKOV3，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TLR4 mRNA表达，Western blotting检测TLR4蛋白表达；CCK-8法检测TLR4 siRNA转染SKOV3细胞6～24 h后细胞的生长情况，流式细胞仪检测细胞转染24 h后的凋亡情况。结果 TLR4在卵巢癌及其周围正常组织中均有表达，且卵巢癌组织中TLR4表达量明显高于癌旁组织（P <0.05）;TLR4 siRNA转染后，SKOV3细胞中TLR4 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P <0.05）;siRNA转染24 h后，SKOV3细胞活力下降，细胞凋亡率升高（P <0.05）。结论 TLR4参与了卵巢癌细胞增殖与凋亡的调控，干扰TLR4能抑制SKOV3细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

Nckα基因沉默对上皮性卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨Nckα基因沉默对上皮性卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:选取正常卵巢组织切片、良性卵巢病变组织切片以及卵巢癌组织切片分析Nckα表达特点,通过免疫荧光、细胞侵袭、迁移实验、细胞增殖实验、构建皮下移植瘤动物模型以及Western blot检测等方式检测Nckα沉默对卵巢癌SKOV3细胞株、OVCAR-3细胞株的影响。结果:Nckα基因沉默可降低卵巢癌细胞侵袭、迁移能力; Nckα沉默卵巢癌SKOV3细胞、OVCAR3细胞吸光度值明显低于对照组,Nckα过表达卵巢癌SKOV3细胞、OVCAR3细胞吸光度值明显高于对照组(P <0.05); Nckα沉默组细胞瘤体体积小于对照组(P<0.05); Nckα沉默卵巢癌SKOV3细胞、OVCAR3细胞PI3K p110α、p70S6K、AKT、P-AKT蛋白表达明显低于对照组,Nckα过表达卵巢癌SKOV3细胞、OVCAR3细胞PI3K p110α、p70S6K、AKT、P-AKT蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:Nckα基因沉默可导致上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移能力降低,延缓皮下移植瘤生长速度,可能与...     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

miR-655在上皮性卵巢癌中的表达研究

目的探讨微小RNA（microRNA,miR）-655在上皮性卵巢癌中的表达、作用及其可能的分子机制。方法采用实时定量-PCR检测miR-655在40对上皮性卵巢癌组织和正常组织中的表达,分析miR-655表达水平与临床病理之间的关系。Cell Counting Kit-8（CCK-8）和流式细胞术检测miR-655对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响。Western blotting检测PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果miR-655在上皮性卵巢癌组织中的表达量明显低于正常组织（P < 0.01）。miR-655表达水平在不同肿瘤直径、病理分化程度和是否淋巴结转移病人间差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,而不同年龄、CA-125病人间miR-655 mimics表达差异均无统计学意义（P>0.05）。转染miR-655 mimics可明显抑制卵巢癌细胞的增殖并促进细胞的凋亡（P < 0.01）;miR-655 mimics转染明显抑制卵巢癌细胞中PI3K、AKT和mTOR活性（P < 0.01）。结论miR-655在卵巢癌组织中明显低表达,miR-655低表达可能与卵巢癌的肿瘤生长和分化程度相关,miR-655可明显抑制卵巢癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其在卵巢癌病人中具有一定的靶向治疗价值。     

MiR-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://starbase. sysu.edu.cn/)生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcD...     

卵巢癌组织中miR-223的表达及其对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的促进作用

目的：分析微小RNA-223 (miR-223)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨miR-223对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的影响,并阐明其分子调控机制。方法：采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测45例卵巢癌患者手术切除组织样本和不同卵巢癌细胞中miR-223表达水平,分析不同临床病理特征卵巢癌患者癌组织中miR-223表达水平。体外培养卵巢癌OVCAR3细胞,采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法分析miR-223对N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向调控关系。OVCAR3细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、 miR-223抑制剂(MiR in组)和同时转染miR-223抑制剂及siRNA-NDRG1质粒(MiR in+si-NDRG1组),克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数。结果：与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中miR-223表达水平明显升高(P<0.01),miR-223表达水平与卵巢癌患者组织学分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有密切...     

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

探讨microRNA-20b（miR-20b）在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-20b 在卵巢癌细胞系A431、SKOV3 及正常卵巢上皮细胞系Hose 中的相对表达量,将SKOV3 细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b 模拟物组,用Lipofectamine2000 分别不转染、转染miR-20b scramble 和miR-20b mimics,CCK8 实验测定3 组细胞增殖能力,流式细胞术测定3 组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10 号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的相对表达量。结果qRT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b 相对表达量较Hose 细胞系低;miR-20b 模拟物组在0、24、48、72 及96 h的OD45 nm 值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b 模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b 模拟物组PTEN 相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论miR-20b 抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN 和上调PARP 蛋白表达有关。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。