聚合酶链反应检测肝硬化,肝癌患者血清HBVDNA,HCVRNA

作者应用聚合酶链反应对３３例肝硬化，２０例原发性肝癌患者血清中乙型和丙型肝炎病毒进行了检测。结果显示：乙型肝炎病毒检出率在肝硬化和肝癌中高于丙型肝炎病毒检出率，但在两种疾病之间，乙型、丙型肝炎病毒检出率差异均无显著性（Ｐ〉０．０５）。提示乙型、丙型肝炎病毒与肝硬化、肝癌相关，但以乙型肝炎病毒为主。     

套式PCR法检测间日疟原虫的研究

以滤纸采集间日疟原虫患者血样，煮沸法萃取ＤＮＡ模板，用间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ特异序列为内外引物，进行双温度点套式ＰＣＲ扩增，其检测原虫率水平为０．８４×１０＾－６，特异性强。检测云南疟区发热患者血样１６６份，检出率为６３．９％，显著高于镜检法的４８．２％。以镜检法为参照，本法的敏感性为９７％，特异性为６１％，阳性预期值和阴性预期值分别为６５％和９７％，表明是检测间日疟原虫感染的一个良好手段，可作     

丙型肝炎患者骨髓细胞中HCVRNA检测和意义

近年研究表明，乙型肝炎病毒(HBV)体内外均可感染人骨髓细胞(BMC)，BMC的HBV感染可能与乙型肝炎患者的慢性化及HBV传播有密切关系。丙型肝炎慢性化程度高，体内能否感染BMC，BMC的HCV感染是否为其慢性化的原因之一，目前报道甚少。我们采用PCR技术检测了34例丙型肝炎患者骨髓细胞内的HCV RNA，研究HCV体内感染人BMC的可能性，并结合血清中HCV RNA，探讨其临床意义。     

用PCR—SSCP技术检测并鉴定胃粘膜和唾液中的幽门螺杆菌

运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）分别检测来自４８例患者的胃粘膜和唾液标本中的幽门螺杆菌（Ｈｐ）的种系特异性抗原基因，并进一步运用单链构象多态性分析技术（ＳＳＣＰ）鉴定存在于人群之中和同一个体不同部位的Ｈｐ菌株。结果表明：在胃粘膜Ｈｐ阳性的３６例患者中，唾液标本的检出率为７２．２％（２６／３６）。在胃粘膜Ｈｐ阴性的１２例患者中，有２例患者的唾液Ｈｐ呈阳性（１６．７％）。进一步的ＳＳＣＰ分型证实：人群中感染的Ｈｐ菌株可根据其种系特异性抗原基因区分为６种基本带型。而从２６对同时呈阳性的胃粘膜和唾液ＰＣＲ产物经ＳＳＣＰ分型，其中２５例患者呈现相同或相似带型，有１例呈明显差异。上述结果表明同一个体的不同部位存在同种菌株的可能性大，但并不排除混合性感染的可能。     

乙型肝炎患者血清、唾液及尿液中沙眼衣原体的检测

本文采用PCR法对40例乙型肝炎患者血清、唾液及尿液进行沙眼衣原体(CT)DNA检测,设正常对照30例。结果显示:乙型肝炎患者的CT感染总阳性率为40.0％(16/40),其中血液为15.0%(6/40),唾液为20.0%(8/4O),尿液为17.5%(7/40):正常人总阳性率为10.0％(3/30),其中血液6.7％(2/30),唾液3.3％(1/30),尿液10.0％(3/30),显著低于乙型肝炎组(P<0.05)。CT感染主要表现为隐性感染和携带者。在肝炎患者尿、唾液和血液中查到CT,说明其传播是多途径的,在接吻、输血及性生活中可能传播CT。CT感染在乙型肝炎患者中的分布主要见于慢性肝炎和肝硬变,这可能与患者细胞免疫功能低下有关。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

多重PCR方法检测EHEC和EPEC毒力基因

目的 建立简易实用的检测EHEC和EPEC多种毒力基因的方法。方法 应用多重PCR同时检测大肠埃希菌菌株的stx1、stx2、EPEC和EHEC共同的eaeA(eaeA-gen）等靶基因;用常规PCR检测EHEC O157特异的eaeA(eaeA-O157）基因,以区分EHEC和EPEC的eaeA基因。结果 对分别分离自美国和我国江苏的EHEC O157菌株以MPCR检测,stx1、stx2和eaeA-gen基因均阳性,同时常规PCR扩增eaeA-O157也阳性。在8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株中,stx1、stx2和eaeA-O157基因均阴性,仅2株扩增出EPEC eaeA基因。在28株EPEC血清型、12株ETEC血清型、12株EIEC血清型大肠埃希菌菌株中,stx1和stx2基因均阴性;3株EPEC血清型菌株eaeA-gen基因阳性。结论 MPCR技术可同时检测菌株的stx1、stx2和eaeA基因,可为EHEC和EPEC感染的诊断及流行病学调查,提供一种简便、实用、经济的技术手段。     

鼠尿液中弓形虫B1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中弓形虫B1基因序列,设计1对引物和1条TaqMan探针。从感染弓形虫小鼠尿液提取弓形虫总DNA,先用普通PCR扩增获得目的基因产物,将纯化的回收产物与pMD18-T载体连接,测序证实为目的片段后,制备系列浓度参照品。再优化实时荧光定量PCR反应体系,并对体系的灵敏度、重复性、线性、特异性和参照品稳定性进行评价。其灵敏度为104拷贝/ml;批内变异系数为2.42%,批间变异系数为4.18%,线性为103～107拷贝/ml,特异性为100%,参照品稳定。该法检测鼠尿样弓形虫DNA具有方便、灵敏、特异和重复性好等优点。     

用PCR方法检测难辨梭状芽胞杆菌

目的建立PCR方法检测难辨梭状芽胞杆菌．方法采用PCR方法对难辨梭装芽胞杆菌（以下简称c，d）的毒素B基因和毒素A基因进行扩增，同时和细菌厌氧培养法进行对比．结果36例标本中采用PCR方法有16例扩增出毒素B基因（占46．7％），13例扩增出毒素A基因（占36．1％），用细菌厌氧培养法有7例培养出c，d（占19．2％），而且厌氧培养阳性者，用PCR方法也都扩增出毒素B基因和毒素A基因．结论用PCR方法检测c，d比厌氧培养法检出率明显增高（P＜0．05）而且特异性较好．     

用RT—PCR法检测急性白血病患者MDR1基因表达

化疗是治疗急性白血病（Ａｃｕｔｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ＡＬ）的主要手段。然而，由人ＭＤＲ１基因编码的Ｐｇｐ过表达引起的ＭＤＲ（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）往往导致化疗的失败。利用检测ＭＤＲ１ＭＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ法，对１４份正常骨髓标本、２９例ＡＬ患者３０份骨髓标本的ＭＤＲ１ＭＰＲＮＡ进行了检测。结果表明：化疗前、后ＡＬ患者的ＭＤＲ１ＭＲＮＡ阳性率分别为１９％和７５％（Ｐ〈０．０１）：     

用EIA和PCR检测牛血清中类HBV的研究

本文报道了用ＥＩＡ（ｅｎｚｙｍｅ－ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，酶免疫测定）从５０头奶牛和１２０头黄牛的血清中共检测出４１份人ＨＢＶ（乙型肝炎病毒）标志物呈阳性的样品；并进一步用ＰＣＲ（ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ聚合酶链反应）测定其中的部分阳性（５份ＨＢｓＡｇ，５份ＨＢｅＡｇ，２份ＨＢａＡｇ＋ＨＢｅＡｇ，７份抗ＨＢｃ，１份ＨＢｓＡｇ＋ＨＢｅＡｇ，７份抗ＨＢｃ，１份ＨＢｓＡｇ＋抗ＨＢ     

慢性乙型肝炎患者血液、唾液、尿液、胃液中乙型肝炎病毒DNA的定量检测

乙型肝炎病毒 (HBV)经血液传播致病已经十分明确 ,但是经体液传播还需有充足的证据来证实 ,并且有必要对其传播能力作出评价。已有文献报道在慢性乙型肝炎患者的唾液及尿液中存在HBVDNA[1,2 ] ,而且是日常生活密切接触后感染HBV的直接原因 ,其中可能存在“含量与传染性”的关系。我们采用本实验室建立的竞争聚合酶链反应及其产物酶联杂交法 (PCR ELISA)定量检测慢性乙型肝炎患者血液、唾液、尿液以及胃液中HBVDNA ,同时检测乙型肝炎免疫标记物及总胆红素、天门冬氨酸转氨酶 (AST)和丙氨酸转氨酶 (ALT)。分析血清HBV载量与肝炎…     

PCR法与细菌培养法在急性腹泻患者沙门氏菌检测中的应用比较

目的通过与传统细菌培养法比较,明确聚合酶链反应(PCR)法能否提高沙门氏菌检出率。方法分别应用传统细菌培养法(含生化、血清学鉴定)及普通PCR方法,对300例急性腹泻患者粪标本进行检测,将两种方法检测的阳性率进行比较。结果300例急性腹泻患者粪标本,传统法分离培养出沙门氏菌29例,阳性率9.67%;普通PCR检测沙门氏菌高侵袭性位点A(hyperinvasive locus A,hilA)阳性65例,阳性率为21.67%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。其中传统法分离培养阳性的标本,PCR检测均为阳性。PCR法扩增阳性的65例粪标本hilA基因测序结果与基因库标准菌株序列一致率为100%。结论与传统细菌培养生化法相比,PCR法可提高腹泻患者沙门氏菌的检出率,缩短检出时间,适于临床快速诊断。     

多重和套式聚合酶链反应检测血液、腹膜透析患者血清中HBV DNA和HCV RNA

利用免疫学和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透）、１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感染率显著高于一般人群。血、腹透两组ＨＣＶ感染率相差非常显著，血透患者抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ阳性高于腹透患者，表明血透过程在丙型肝炎传播方面起重要作用。作者还采用多重和套式ＰＣＲ方法，将ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ在合并的逆转录和ＰＣＲ扩增系统中，连续进行逆转录和第一轮多重ＰＣＲ扩增，再进行第二轮多重ＰＣＲ，具有特异、敏感、简便、快速和经济等特点，适于临床应用。     

非肝炎口腔科患者血清及唾液中HGV 和TTV感染率的调查

目的 检测杭州地区非肝炎口腔科患者血清和唾液标本中庚型肝炎病毒（HGV）和输血传播病毒（TTV）感染率，进一步了解HGV和TTV传播途径和感染的高危人群。方法 分别从上述患者血液和唾液标本中提取RNA和DNA，采用逆转录-套式聚合酶链反应（RT-Nested PCR）和半套式聚合酶链反应（Hemi-nested PCR)分别检测HGV5′-NCR RNA和TTV N22区DNA，部分DNA，部分HGV和TTV扩增产物克隆后进行核苷酸序列测定。结果 226例血清标本中，仅HGV阳性27例（11.9%）、仅TTV阳性21例（9.3%）、HGV和TTV均阳性7例（3.1%）；226例唾液标本中，仅HGV阳性10例（4.4%）、仅TTV阳性9例（3.9%）、HGV和TTV均阳性2例（0.9%）；未见血清标本HGV和/或TTV检测结果阴性而唾液标本阳性者。2例患者血清标本及唾液标本HGV和TTV均阳性的扩增产物分别与报道的HGV和TTV核苷酸序列比较，同源性为88.65%～91.49%和65.32%～66.67%，但各自的血清标本与唾液标本HGV和TTV扩增产物同源性分别高达98.58%～99.29%和98.65%～98.20%。结论 杭州地区非肝炎口腔科患者HGV或TTV感染率均较高，其中部分携带病毒的患者唾液中均可检出HGV或TTV，提示HGV或TTV可能存在唾液传播途径，口腔科医师则是HGV或TTV感染的高危人群。     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究

目的 建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应（PCR）系统。 方法 应用标签引物扩增技术、Primer Premier 5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR，检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。 结果 新建立的标签引物套式/多重PCR，检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血，间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样（恶性疟24份和间日疟47份）的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。 结论 通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统，适用于检测现场采集的滤纸血样，其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法，是很有潜力的疟疾诊断技术。     

套式PCR检测滤纸干血滴中恶性疟原虫的研究

目的：建立简易、实用的套式ＰＣＲ检测恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）的方法。方法：以小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）为目的片段的双温度点套式ＰＣＲ扩增滤纸干血滴中Ｐ．ｆ．ＤＮＡ，并将结果与镜检法进行比较研究。结果：１４３例标本中两法均阳性和均阴性分别有５５份和５１份，镜检阴性而ＰＣＲ阳性者３４份，镜检阳性而ＰＣＲ法阴性３份。套式ＰＣＲ总阳性率为６２％，显著高于镜检法的４１％，两者符合率为７４％。结论：本法简便、快速，敏感性高、特异性强，具有一定的现场应用价值。