低氧微环境对非小细胞肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨低氧对肺癌细胞系A549增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法将体外培养的非小细胞肺癌细胞系A549分别置于常氧和低氧环境下刺激24 h,采用CCK8法检测细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平;并进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达,并检测。结果体外低氧微环境可显著促进肺癌细胞系A549的增殖和侵袭,并可激活Wnt/β-catenin信号通路;而抑制Wnt/β-catenin信号通路则能有效抑制低氧介导的肺癌细胞增殖与侵袭。结论低氧微环境通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌细胞系A549的增殖和侵袭转移。     

长链非编码RNA LINP1对肝癌细胞增殖、侵袭转移的影响

目的探究长链非编码RNA LINP1在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响。方法使用qRT-PCR方法检测60例肝癌组织以及癌旁组织、肝癌细胞株及正常肝细胞中LINP1的表达情况。si-LINP1转染肝癌细胞敲低LINP1表达;CCK-8实验检测si-LINP1对肝癌细胞增殖影响;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin和cyclinD1表达。结果 LINP1在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织,肝癌细胞高于正常肝细胞系Lo2(P0.05);敲低LINP1抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移,抑制Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin和cyclinD1表达(P0.05)。结论敲低LINP1抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

穿心莲内酯对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其机制

目的:探究穿心莲内脂(AG)对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在的机制。方法:体外培养人骨肉瘤143B细胞,使用不同浓度(0~20μmol/L)的AG处理143B细胞,分别用结晶紫染色、MTT法和集落形成实验来检测AG对143B细胞增殖的影响。划痕愈合实验检测骨肉瘤143B细胞的迁移能力。Transwell小室实验检测骨肉瘤143B细胞的侵袭能力。Hoechst 33258染色实验和流式细胞术检测AG对骨肉瘤细胞凋亡的影响。不同浓度AG处理后,使用Western blot检测骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭和凋亡相关蛋白的水平。应用Western blot进一步检测Wnt信号通路中的β-catenin及其相关分子c-Myc的表达量。结果:与空白组相比,AG处理组中143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),且呈浓度依赖性。迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的水平均下调(均P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达量升高,凋亡相关蛋白caspase-3的蛋白水平下降而cleaved caspase-3的蛋白水平升高,同时Wnt信号通路相关蛋白β-catenin和c-Myc的表达水平均明显下调(P<0.01)。结论:穿心莲内酯可能通过抑制Wnt信号通路的活性,从而达到抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭能力,并且促进其凋亡。     

Wnt/β-catenin通路参与脂肪间充质干细胞对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)经Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法以大鼠ADSC的条件培养基作用于HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,通过流式细胞术分析细胞周期、RNA干扰、实时定量PCR和Western blot等技术分析HBZY-1细胞增殖能力、Wnt信号通路中相关基因和蛋白表达水平的变化。结果在ADSC条件培养基作用下,HBZY-1细胞增殖受到明显抑制,dickkopf WNT信号通路抑制物1(DKK1)mRNA表达水平明显升高,而纤连蛋白(fibronectin)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达显著降低,同时系膜细胞的β-catenin和Bcl-2蛋白的表达受到明显抑制。ADSC中DKK1 mRNA表达水平显著高于HBZY-1细胞,利用小干涉RNA敲低ADSC的DKK1表达后,其β-catenin蛋白的表达水平显著升高。将干扰后的ADSC条件培养基作用于HBZY-1细胞,可重新增加HBZY-1细胞Wnt信号通路中β-catenin和Bcl-2的蛋白水平。结论 Wnt/β-catenin信号通路可能参与ADSC对HBZY-1肾小球系膜细胞增殖的调控。     

芹菜素对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的探讨芹菜素对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法 MTT法检测不同浓度的芹菜素(0、20、40、80μmol/L)对喉癌Hep-2细胞增殖的影响。40μmol/L芹菜素处理Hep-2细胞48h后,Transwell实验检测Hep-2细胞体外迁移和侵袭能力变化;实时PCR和Western blot检测Hep-2细胞Wnt1、β-catenin、环氧合酶2(COX2)与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白与mRNA的表达水平。结果芹菜素抑制喉癌Hep-2细胞增殖,并呈时间浓度依赖性;40μmol/L芹菜素处理Hep-2细胞48h能够有效抑制Hep-2细胞的迁移和侵袭能力,降低Wnt1、β-catenin、COX2与MMP-2 mRNA相对表达量和蛋白表达水平。结论芹菜素抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力与抑制喉癌Hep-2细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关。     

UNC5A基因过表达对膀胱癌T24细胞增殖、转移的影响及其机制探讨

【摘要】　目的　探究UNC5A 基因过表达对膀胱癌T24 细胞增殖、转移及Wnt/ β-catenin 信号通路的影响。方法　选取T24 细胞, 转染UNC5A-pcDNA 和pcDNA-NC, 将细胞随机分为Control 组、pcDNA-NC 组和UNC5A-pcDNA 组。RT-PCR 检测UNC5A mRNA 表达水平; 克隆形成实验检测细胞克隆形成率; 流式细胞术检测细胞凋亡率; Transwell 检测细胞侵袭细胞数; Western 印迹检测UNC5A、Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平; 加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭情况。结果　与Control 组比较, UNC5A-pcDNA 组UNC5A mRNA 和蛋白表达水平升高(P< 0. 05), 克隆形成率降低(P< 0. 05), 细胞凋亡率升高(P<0. 05), 侵袭细胞数降低(P<0. 05), Wnt1、β-catenin 蛋白表达水平降低(P< 0. 05)。加入Wnt/ β-catenin 信号通路激活剂LiCl 则能逆转过表达UNC5A 对T24 细胞增殖、侵袭的抑制作用, 凋亡促进作用。结论UNC5A 基因过表达可能通过抑制Wnt/ β-catenin 信号通路的活化抑制T24 细胞增殖、侵袭, 并诱导细胞凋亡。     

CYFIP2过表达对膀胱癌T24细胞的生物学功能和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨细胞质脆性X智力低下蛋白1结合蛋白2(CYFIP2)过表达对膀胱癌T24细胞的生物学功能和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法对照组为转染pcDNA3空载体的T24细胞, 过表达组为转染CYFIP2过表达载体的T24细胞。采用逆转录酶定量聚合酶链式反应和Western Blot检测CYFIP2 mRNA和蛋白的表达, CCK-8检测CYFIP2过表达对T24细胞增殖的影响, Transwell检测CYFIP2过表达对T24细胞迁移和侵袭的影响, 并通过Western Blot检测CYFIP2过表达对T24细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果与对照组相比, 过表达组CYFIP2 mRNA和蛋白的表达水平均升高(均P<0.001), 细胞增殖、迁移和侵袭能力均减弱(均P<0.01)。CYFIP2过表达的T24细胞中β-catenin、c-Myc和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的蛋白表达均下调(均P<0.05), 而p-β-catenin的蛋白水平增加(P<0.05)。结论 CYFIP2过表达能够抑制T24细胞增...     

miR-320调节人慢性髓系白血病细胞系K562的增殖

目的探讨miR-320对人慢性髓系白血病细胞系K562增殖和细胞周期的影响。方法采用正常人及初诊的慢性髓系白血病患者外周血病单个核细胞,用实时定量PCR检测miR-320和β-catenin mRNA的表达;用miR-320模拟物转染K562细胞,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞周期;双荧光报告基因试验和Western blot检测β-catenin mRNA表达;实时定量PCR检测miR-320模拟物对Wnt/β-catenin信号通路下游基因的转录。结果 miR-320在慢性髓系白血病患者中的表达水平显著低于正常人,而β-catenin表达水平显著高于正常人(P0.05);过表达miR-320可以抑制K562细胞的增殖(P0.05)和细胞周期的运行;miR-320可抑制靶基因β-catenin的表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路下游基因c-Myc、cyclin D、VEGF和Cox-2 mRNA的表达(P0.05)。结论 miR-320通过调节β-catenin的表达,在慢性髓系白血病中发挥抑癌功能。     

miR-152 在IL-6 诱导宫颈癌Hela 细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的:探讨miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制。方法:以0、0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后,分别采用CCK-8法、Transwell法检测细胞的增殖和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-152的表达,Western blot检测WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和WNT1的靶向关系。脂质体介导转染miR-152模拟物后,RT-PCR检测miR-152的表达,CCK-8、Transwell和Western blot检测miR-152对IL-6处理的Hela细胞增殖、侵袭和WNT/β-catenin信号通路的影响。结果:与对照(0 ng/ml)相比,0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后增殖和侵袭能力增强以及WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,而miR-152表达明显降低(P0.05),且呈IL-6浓度依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实WNT1是miR-152的靶基因。成功上调miR-152表达可逆转IL-6对Hela细胞增殖和侵袭的促进及对WNT/β-catenin信号通路的调控作用。结论:miR-152参与IL-6诱导的宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与靶向调控WNT/β-catenin信号通路有关。     

八正汤加减通过Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞的增殖与侵袭

目的 探讨八正汤加减对肾癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制。方法 将人肾癌细胞系786-O设为对照组与八正汤加减组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用划痕实验与Transwell侵袭实验测定细胞迁移和侵袭情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、C-caspase-3、E-cadherin、Ncadherin、vimentin、Wnt3a、GSK3β、p-GSK3β、p-β-catenin和β-catenin的表达。结果 八正汤加减能够抑制786-O细胞的增殖、迁移与侵袭,促进786-O细胞的凋亡,上调786-O细胞Bax、C-caspase-3、E-cadherin与p-β-catenin蛋白的表达,下调786-O细胞N-cadherin、vimentin、Wnt3a、p-GSK3β和β-catenin蛋白的表达。结论 八正汤加减通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制786-O细胞增殖、侵袭和转移,促进细胞凋亡。     

莪术提取物介导Wnt/β-catenin信号通路对人肝癌Hep-G2细胞的影响*

目的：探讨莪术提取物介导Wnt/β-catenin 信号通路对肝癌Hep-G2 细胞的影响。方法：将浓度为20、50、 100 μg/mL 的β- 榄香烯培养液加入Hep-G2 细胞中,分别设为20 μg/mL 组、50 μg/mL 组和100 μg/mL 组,以不 加β- 榄香烯培养液作为对照组,RT-PCR、免疫印迹检测Hep-G2 细胞Wnt1、β-catenin mRNA和蛋白水平,采 用Transwell 法、MTT法检测Hep-G2 细胞的迁移和增殖情况,流式细胞仪检测Hep-G2 细胞凋亡率。结果：对照 组Wnt1、β-catenin mRNA水平均显著高于其他3 个治疗组,100 μg/mL 组Wnt1、β-catenin mRNA水平显著低于 20 μg/mL组、50 μg/mL组。对照组Wnt1、β-catenin蛋白表达高于其他3个治疗组, 100 μg/mL组Wnt1、β-catenin 蛋白表达显著低于20 μg/mL组、50 μg/mL组。对照组Hep-G2细胞凋亡率显著低于其他3个治疗组,100 μg/mL组 Hep-G2细胞凋亡率显著高于20 μg/mL组、50 μg/mL组。100 μg/mL组Hep-G2细胞迁移细胞数最低,显著低于其他3 组。对照组Hep-G2细胞增殖能力显著高于其他3 个治疗组,100 μg/mL组Hep-G2细胞增殖能力显著低于20 μg/mL组、 50 μg/mL组。结论：莪术提取物通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制肝癌细胞增殖和迁移。     

RBMS3抑制宫颈癌细胞增殖和转移的作用机制研究

目的 研究RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)对宫颈癌细胞增殖和转移的影响,并探讨其发挥作用的可能机制.方法 采用GEPIA网站分析RBMS3在宫颈癌组织中的表达情况.qRT-PCR和Western blotting检测RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织和细胞系中的表达水平.构建RBMS3过表达慢病毒,感染宫颈癌细胞系Caski,分为NC组和oe-RBMS3组,采用MTS检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,移植瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力.Western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白wnt3a、β-catenin及其下游靶蛋白cMYC、cyclinD1、MMP-2的表达.结果 GEPIA网站分析结果显示RBMS3 mRNA在宫颈癌组织中的表达显著低于在正常宫颈组织中的表达.qRT-PCR和Western blotting结果均显示RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织中的表达显著低于其在癌旁组织中的表达,RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌细胞系中的表达显著低于其在人鳞状上皮永生化细胞H8中的表达.与NC组相比,oe-RBMS3组Caski细胞增殖、转移和体内成瘤能力均降低,细胞中wnt3a、β-catenin、cMYC、cyclinD1、MMP-2蛋白表达均降低.结论 RBMS3可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞增殖和转移能力.     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨丙泊酚调控miR-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制

目的：探讨丙泊酚调控mi R-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制。方法：体外培养人肝癌细胞株Huh7，分为空白组、2、5、10μg/ml丙泊酚组和丙泊酚+干扰mi R-219-5p组；PCR检测细胞mi R-219-5p表达；MTT检测丙泊酚对肝癌细胞的增殖抑制作用；Transwell检测细胞侵袭能力；划痕实验检测细胞迁移率；Western blot检测β-catenin、c-Myc蛋白含量。结果：与空白组相比，不同浓度丙泊酚组mi R-219-5p表达升高，细胞增殖被抑制，侵袭能力减弱，迁移率降低，β-catenin、c-Myc蛋白表达降低，且呈浓度依赖性（P<0.05）；与丙泊酚各组比较，丙泊酚+干扰mi R-219-5p组增殖抑制能力减弱，侵袭能力增强，迁移率升高，β-catenin、c-Myc蛋白含量升高（P<0.05）。结论：丙泊酚可通过上调mi R-219-5p表达抑制肝癌细胞增殖和侵袭，其机制可能为调控Wnt/β-catenin信号通路。     

下调LRH1 对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法：采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组（Ctrl）、阴性对照（NC）-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果：与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-...     

紫杉醇联合顺铂通过Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖并促进其凋亡北大核心

背景:肿瘤干细胞具有自我更新和分化成新肿瘤的能力,会导致肿瘤放化疗不敏感,是肿瘤发生和复发的根源。目的:探索紫杉醇联合顺铂对鼻咽癌干细胞增殖和凋亡的影响并探索其作用的信号通路。方法:免疫磁珠的方法分离培养鼻咽癌干细胞,紫杉醇和顺铂处理细胞,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、活化的caspase-3、Bcl-2和β-catenin及下游原癌基因c-myc的表达,用RNA干扰技术敲降β-catenin表达或者使用抑制剂XAV939抑制Wnt/β-catenin通路活性,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与结论:(1)紫杉醇或顺铂均会抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡,并且凋亡标志蛋白活化caspase-3表达上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下降,联合用药具有协同作用,(2)紫杉醇或顺铂均会抑制Wnt/β-catenin通路的活性及下游靶基因c-myc的表达,抑制Wnt/β-catenin通路活性抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡。(3)结果表明,紫杉醇和顺铂可能是通过Wnt/β-catenin信号通路调控鼻咽癌干细胞的增殖和凋亡。     

TIPE2过表达调控Wnt/β-catenin抑制胃癌细胞增殖、迁移和EMT北大核心CSCD

目的:探究肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样因子2(TIPE2)是否通过抑制Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌(GC)细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)。方法:qRT-PCR和Western blot检测不同细胞中TIPE2 mRNA和蛋白表达。体外培养MKN45细胞,依次分为:Control组(不做任何处理)、AD-EV组(转染AD-EV)、AD-TIPE2组(转染AD-TIPE2)、LiCl组(Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理)、AD-TIPE2+LiCl组(转染AD-TIPE2后LiCl处理)。MTT和集落形成实验检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot检测细胞TIPE2、E-cadherin、N-cadherin、Wnt2、β-catenin和Twist蛋白表达;免疫荧光染色检测细胞TIPE2、E-cadherin及N-cadherin表达。结果:GC细胞株中TIPE2表达显著下调,且在MKN45细胞中表达最低。与AD-EV组相比,AD-TIPE2组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著降低,TIPE2和E-cadherin表达显著增高(P<0.05);与AD-TIPE2组相比,AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著升高,TIPE2和E-cadherin表达显著降低(P<0.05);与LiCl组相比,AD-TIPE2+LiCl组MKN45细胞增殖活力、集落形成数、迁移细胞数及N-cadherin、TIPE2、Wnt2、β-catenin、Twist、c-Myc和CyclinD1蛋白表达均显著降低,TIPE2和E-cadherin表达显著升高(P<0.05)。结论:上调TIPE2可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制GC细胞增殖、迁移和EMT。     

Wnt/β-catenin信号因子在HepG2以及L02细胞中的表达

目的:比较Wnt/β-catenin信号分子在HepG2和L02细胞中的表达,探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在肝癌发生中的作用机制,为肝癌的防治提供新的思路。方法:选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子Wnt1、Wnt4、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等,应用RT-PCR的方法观察他们在正常肝脏L02细胞和肝癌HepG2细胞中的转录水平。用免疫细胞化学染色方法和Western blot检测研究Wnt/β-catenin信号转导通路中最关键的成员β-catenin在上述2个细胞株中的定位和定量表达。结果:在正常的L02肝细胞中,用RT-PCR的方法未检测到Wnt1、Wnt4、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有β-catenin的基因被转录表达。同时用免疫细胞化学染色观察到β-catenin在L02细胞膜处存在表达。而在HepG2肿瘤细胞中,不仅检测到β-catenin的基因转录,同时也检测到Wnt1、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有Wnt4未转录。用免疫细胞化学的方法观察β-catenin在肿瘤细胞中的表达明显增强,表现为胞膜着色减弱而胞质甚至是胞核的阳性染色。采用Western blot检测也验证了β-catenin蛋白在肿瘤细胞中的表达水平明显高于正常细胞。结论:Wnt/β-catenin信号转导通路在人的肝癌细胞HepG2中存在异常活性,Wnt1可能是导致信号通路激活的始动因素之一。     

Wnt/β-Catenin对低氧诱导绿色荧光蛋白小鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的:体外观察低氧对绿色荧光蛋白(GFP)小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响,并探讨Wnt/β-catenin通路在此过程中的作用。方法:经低氧(3±2)%O_2和常氧205O_2培养GFP小鼠海马组织NSCs,通过NSCs克隆形成率检测、BrdU掺入法和四唑盐比色法(MTT)法检测细胞增殖情况;脂质体介导法将NSCs转染β-catenin,通过免疫细胞化学染色、Western印迹法检测β-catenin表达情况,MTT法检测转染β-catenin后低氧对NSCs增殖的影响。结果:低氧组细胞克隆球形成率、BrdU阳性细胞数量、NSCs增殖活性、NSCs内β-catenin表达均显著高于常氧组;转染β- catenin的NSCs经低氧培养后,NSCs增殖活性明显高于未转染组。结论:体外低氧培养能促进NSCs增殖和NSCs内β-catenin表达;增加NSCs中β-catenin表达能促进低氧培养下NSCs的增殖。表明Wnt/β-catenin通路具有促进低氧诱导NSCs增殖的作用。     

Wnt/β-catenin信号通路对哮喘大鼠气道平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响。方法建立哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMC),采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法分别检测正常大鼠平滑肌细胞和ASMC中β-catenin信号通路mRNA和蛋白表达水平;采用Transwell迁移实验检测ASMCs的迁移能力,并分析应用β-catenin siRNA对其迁移能力的干预作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示哮喘大鼠ASMCs中β-catenin的mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高;β-catenin特异性siRNA能够降低ASMCs中β-catenin mRNA和蛋白表达水平;沉默β-catenin能够显著降低ASMCs的迁移能力。结论哮喘大鼠模型ASMCs的迁移能力显著增强,β-catenin信号通路的异常激活可能参与了这一生物学事件。