冬凌草甲素减轻自噬对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探究冬凌草甲素对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法将细胞随机分为H9C2组、Adriamycin组、Oridonin(5μM)组、Oridonin(10μM)组和Oridonin(20μM)组,除H9C2组外,其余组用阿霉素处理,Oridonin(5,10,20μM)组同时给予相应浓度的冬凌草甲素,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)浓度,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、P62和LC3的表达,免疫荧光检测LC3表达。结果与H9C2组比较,Adriamycin组SOD浓度明显降低,MDA浓度明显升高;与Adriamycin组比较,Oridonin(5,10,20μM)组SOD浓度明显升高,MDA浓度明显降低;同时,Adriamycin组细胞增殖速度明显低于H9C2组,细胞凋亡率明显增高; Oridonin(5,10,20μM)组细胞增殖速度与Adriamycin组比较明显升高,细胞凋亡率明显降低;此外,阿霉素能显著升高Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,抑制P62表达;冬凌草甲素(5,10,20μM)能显著减弱阿霉素对Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62表达的调控作用。结论冬凌草甲素能通过抑制自噬减轻阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。     

右美托咪啶对人宫颈癌细胞Hela生长和转移能力的影响

目的探究右美托咪啶(Dex)对人宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法将细胞分为Hela组、Dex(1μM)组、Dex(2μM)组和Dex(5μM)组,分别用0,1,2,5μM的Dex处理细胞,用CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ki67、Caspase-3、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达。结果 Dex作用于细胞4 d后,Dex(1,2,5μM)组细胞增殖速度和Ki67表达水平与Hela组比较明显降低,细胞凋亡率和Caspase-3表达水平明显升高;同时,与Hela组比较,Dex(1,2,5μM)组侵袭细胞数明显减少,划痕闭合率及VEGF表达水平也明显降低;此外,Dex(1,2,5μM)还能显著降低p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比值。结论 Dex能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活抑制人宫颈癌Hela细胞存活和转移。     

内质网应激途径在百草枯诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡过程中作用

目的探讨百草枯(Paraquat,PQ)诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡过程中内质网应激途径的发生机制。方法体外培养A549细胞,以PQ为处理因素,建立PQ诱导A549细胞发生ERS的模型:对照组(等量PBS)、PQ250μM组、PQ500μM组、PQ750μM组、PQ1000μM组。处理24h后利用MTT法测定细胞生存率,应用光学倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡比例,在筛选出的凋亡率最高的PQ500μM组中,采用分光光度法测定Caspase-3的活化程度,并提取总蛋白,采用Western blotting试验方法检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、c-ATF6、IRE1α、pIRE1α和CHOP的表达变化。结果 PQ处理细胞24h后,随PQ浓度增高,A549细胞生存率逐渐下降,细胞形态发生显著变化。在PQ(500μM)组,细胞凋亡率达到最高,Caspase-3活性显著增加,GRP78和CHOP蛋白表达量随诱导A549细胞时间延长显著增加,p-PERK,c-ATF6和p-IRE1α的表达量在6h时显著增加。结论 PQ可以通过激活内质网应激途径引发人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡。     

Toll样受体4对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:观察小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS1)Toll样受体4(TLR4)的表达及其对高糖诱导凋亡蛋白表达的影响。方法:离体小鼠MS1分为低浓度葡萄糖(5.6mM)对照组(C组)、高浓度葡萄糖(25.0mM和35.0mM)诱导组(HG组)、TLR4抑制剂干预组(35.0mM葡萄糖+1μM CLI-095,HG+CLI组)及TLR4抑制剂对照组(5.6mM葡萄糖+1μM CLI-095,CLI组)。平行培养24h或48h后,先用CCK-8法检测C组和HG组MS1细胞活力,选定高糖干预浓度(35.0mM)及时间(48h);再分别应用免疫组化和Western Blotting检测各组MS1细胞TLR4表达水平;应用Western Blotting检测各组MS1细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3表达水平;应用明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)活性变化。结果:与C组比较,HG组MS1的TLR4蛋白表达显著增加(P0.01);凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3表达均显著升高(P0.01,P0.05);MMP2活性明显增强(P0.05);与HG组比较,HG+CLI组Caspase-9水平均明显降低(P0.01),Caspase-3水平仅有降低趋势,差异无统计学意义(P0.05);TLR4的表达和MMP2活性虽有下降,但差异亦无统计学意义(P0.05)。结论:MS1高表达TLR4可能参与高糖诱导的MS1细胞凋亡。     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

双氢青蒿素通过调控细胞自噬性死亡增强宫颈癌细胞的化疗敏感性

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性的影响及作用机制。方法:用5、10、20μmol/L的DHA处理细胞,CCK8检测细胞存活率;顺铂联合不同浓度DHA处理细胞并检测细胞活性;将细胞分为Control、DHA(20μmol/L)、Cisplatin(10μg/ml)和DHA+Cisplatin组,分别用溶媒、DHA(20μmol/L)、顺铂(10 mg/L)和DHA联合顺铂处理细胞24 h,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫荧光检测LC3表达,免疫印迹检测Ki67、Cleaved Caspase-3、Beclin1、LC3、P62、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、p-mTOR、p-Ulk1和Ulk1的表达。结果:DHA处理细胞4 d后,细胞增殖倍数明显降低;DHA (10,20μmol/L)联合顺铂处理细胞后,细胞活性显著降低,并具有量效关系;与Control组比较,DHA(20μmol/L)组Ki67表达水平明显降低,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平明显升高;与Cisplatin组比较,DHA+Cisplatin组Ki67表达水平明显降低,凋亡率和Cleaved Caspase-3的表达水平显著降低;同时,DHA(20μmol/L)组自噬相关蛋白Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率均显著低于Control组,P62的表达水平明显升高; DHA+Cisplatin组细胞Beclin1的表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及LC3在细胞质的表达率与Cisplatin组比较均显著降低,P62的表达水平升高;此外,DHA还能明显升高降低He La细胞p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的比值。DHA能显著减弱顺铂下调p-mTOR/m TOR和p-Ulk1/Ulk1的作用。结论:DHA能通过激活m TOR/Ulk1信号通路抑制自噬增强宫颈癌He La细胞的化疗敏感性。     

丹参酮ⅡA通过PI3K/AKT/ERK信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响北大核心CSCD

目的:探讨丹参酮ⅡA通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/细胞外调节激酶(ERK)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:取对数生长期的U251细胞,并分为空白组(未处理的U251细胞)、对照组(0.1%DMSO)、丹参酮ⅡA组(20μmol/L丹参酮ⅡA)、IGF-1组(100 ng/ml PI3K/AKT/ERK通路激活剂IGF-1)、丹参酮ⅡA+IGF-1组(20μmol/L丹参酮ⅡA与100 ng/ml IGF-1同时处理),倒置显微镜观察各组细胞形态;CCK-8法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞侵袭与迁移;Western blot检测各组细胞中细胞周期素D1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及PI3K/AKT/ERK通路相关蛋白的表达。结果:与空白组、对照组比较,丹参酮ⅡA组U251细胞数量减少,细胞皱缩,出现大量细胞碎片,而IGF-1组U251细胞数量增多,细胞形态未发生改变;与丹参酮ⅡA组比较,丹参酮ⅡA+IGF-1组细胞数量增多,细胞贴壁性变强。与空白组、对照组比较,丹参酮ⅡA组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而IGF-1组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与丹参酮ⅡA组比较,丹参酮ⅡA+IGF-1组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/AKT/ERK通路抑制U251细胞增殖、侵袭、迁移,并诱导其凋亡。     

蛇床子素对宫颈癌Hela-S3细胞活性、凋亡及相关信号通路的影响

目的:观察蛇床子素(OST)对宫颈癌Hela-S3细胞活性、凋亡的影响,探讨其相关机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖;DAPI及吖啶橙/碘化丙烷(AO/PI)染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;免疫荧光法观察细胞活性氧(ROS)变化;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:不同浓度OST对Hela-S3细胞增殖抑制率明显上升,呈剂量依赖性;DAPI及AO/PI染色均显示OST可诱导Hela-S3细胞凋亡;流式细胞术检测结果显示,对照组、OST 120、200μg/ml组Hela-S3细胞48 h凋亡率分别为4.15%、31.53%及53.46%;比色法检测结果显示,不同浓度(120、160、200μg/ml)OST处理Hela-S3细胞后Caspase-3、Caspase-9活性明显上升(P<0.05);经不同浓度(80、120μg/ml)OST处理后,细胞ROS浓度逐渐升高;与对照组相比,OST组80、120、160μg/ml中Bcl-2、Survivin蛋白表达逐渐下降,而Bax、Cleaved-PA...     

下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制研究

目的:探讨下调miR-199a-5p对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响和机制。方法:将心肌细胞H9C2分成Control组(常规培养的对照细胞)、DOX组(经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-NC组(转染inhibitor control,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)和DOX+Anti-miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素的细胞培养液培养)、DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组(转染miR-199a-5p inhibitor,经含1μM阿霉素和20ng/ml的Wnt/β-catenin信号抑制剂DKK1的细胞培养液培养)。各组细胞处理24h以后,Realtime PCR测定miR-199a-5p表达,CCK-8测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定C-Caspase-3、β-catenin、c-Myc蛋白表达。结果:与Control组比较,DOX组细胞中miR-199a-5p水平升高,细胞增殖活性下降,细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-NC组比较,DOX+Anti-miR-199a-5p组细胞中miR-199a-5p水平降低,细胞增殖活性升高,细胞凋亡水平和C-Caspase-3蛋白表达水平降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高(P均<0.01)。与DOX+Anti-miR-199a-5p组相比,DOX+Anti-miR-199a-5p+DKK1组心肌细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低(P均<0.01)。结论:下调miR-199a-5p通过激活Wnt/β-catenin信号抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。     

Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨ω-脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系。方法已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE-tmTNFa)后,HL-60细胞可在ω-脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα。运用MTr比色法、DNA梯形带检测、RT-PCR和免疫印迹技术分析ω-脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase-1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase-8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用。结果HL-60细胞经ω-脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase-1、3、8和9基因表达增加,Caspase-8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω-脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL-60诱导凋亡和抑制增殖的作用。结论ω-脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和／或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β/Smad/核因子kappa B(TGF-β/Smad/NF-κB)通路及细胞凋亡的影响。方法:将HMC细胞分为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、人参皂苷Rg3低浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L)、人参皂苷Rg3中浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L)、人参皂苷Rg3高浓度组(LDL 40μg/mL+人参皂苷Rg360μmol/L)。采用MTT法检测HMC细胞增殖活性;Western Blotting法检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB以及B淋巴细胞瘤基因相关x蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,LDL组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与LDL组相比,人参皂苷Rg3低、中、高浓度组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC细胞凋亡率、Bax和Caspase-3的蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

沉默信息调节因子1对缺氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:分析沉默信息调节因子1(Sirt1)对缺氧条件下心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:将心肌H9c2细胞分为Control组、Hypoxia组(缺氧处理24h)、NC+Hypoxia组(转染阴性对照并缺氧处理24h)和Sirt1+Hypoxia组(转染Sirt1过表达载体并缺氧处理24h)。以qRT-PCR和Western blot测定心肌细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平,MTT方法评估细胞存活率,流式细胞术测定细胞总凋亡水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3水平和自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平。结果:与Control组比较,Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平降低(P0.05)。与NC+Hypoxia组比较,Sirt1+Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:Sirt1可抑制缺氧心肌细胞凋亡并诱导细胞自噬。     

牛磺酸调节白介素水平对椎间盘退变大鼠模型髓核细胞凋亡、炎症和氧化应激的保护作用

目的:探讨牛磺酸对白介素诱导的椎间盘退变大鼠模型髓核细胞凋亡、炎症和氧化应激的作用及其作用机制。方法:采用Ⅱ型胶原酶分离培养原代大鼠髓核细胞,采用番红染色和甲苯胺蓝染色对第2代细胞进行鉴定;将第3代髓核细胞随机分为5组(1个正常组和4个模型组):Ctrl组、IL-1β组、IL-1β+Taurine(100μg)组、IL-1β+Taurine(200μg)组和IL-1β+Taurine(400μg)组,并用Hochest33342染色检测各组细胞凋亡率,蛋白印迹实验检测各组髓核细胞Caspase-3、-9蛋白表达;试剂盒检测细胞氧化应激因子SOD、MDA、GSH和LDH的含量;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、iNOS和IL-10的表达水平;同时蛋白印迹实验检测NF-κB p65磷酸化和TNF-α表达水平,免疫荧光检测p65入核情况。结果:采用Ⅱ型胶原酶成功分离得到较纯的大鼠髓核细胞;牛磺酸能负向调节IL-1β对凋亡相关蛋白Caspase-3、-9(P<0.01)和髓核细胞凋亡率(P<0.01)的诱导作用;能剂量依赖性的抑制IL-1β对氧化应激因子SOD、GSH含量的下调作...     

右美托咪定对乳大鼠心肌细胞线粒体活性氧和细胞凋亡的影响

目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生乳大鼠(3~4天)的心肌进行原代培养,培养24h后分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、右美托咪定组(5μM DEX,D组)、联合用药组(500μM H_2O_2+5μM DEX,DH组)。各组细胞分别给予相应药物刺激6h,采用流式细胞仪测定活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)水平及心肌细胞凋亡变化;并通过ELISA法测定各组乳大鼠心肌细胞线粒体介导的凋亡因子Caspase-3,Caspase-9表达的变化。结果:与H_2O_2组相比,DEX明显抑制H_2O_2介导的乳大鼠心肌细胞的ROS水平增加(P0.05);下调线粒体介导的下游凋亡因子Caspase-3,Caspase-9的表达(P0.05),从而减少H_2O_2诱导的凋亡(P0.05)。结论:右美托咪定通过抑制心肌细胞活性氧水平以及下调线粒体介导的Caspase-3和Caspase-9的表达发挥抑制凋亡作用,对心肌细胞有一定的保护作用。     

金丝桃苷介导P53/ Caspase 通路对人肝癌HepG2 细胞增殖和凋亡的调节作用

目的:探究金丝桃苷(HS)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用及作用机制。方法:不同浓度HS处理细胞,MTT检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞核皱缩情况,Western blot检测P53/Caspase通路蛋白表达情况。结果:根据预实验结果,选择10、20和50 nmol/L三个剂量的HS进行后续试验。HS(20 nmol/L)处理细胞4 d能明显抑制HepG2细胞增殖(P0. 05),HS(50 nmol/L)处理细胞3、4 d能显著降低细胞增殖倍数(P0. 05);与HepG2组比较,HS(10、20、50 nmol/L)组细胞凋亡率明显升高(P0. 05),凋亡细胞数明显增多(P0. 05);HS(20、50 nmol/L)处理细胞后,HepG2细胞通路蛋白P53、Caspase-9和Caspase-3表达水平明显升高(P0. 05)。结论:HS能抑制肝癌HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与诱导P53/Caspase信号通路激活有关。     

牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的影响

目的 探讨牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的作用。 方法 取孕12.5d小鼠胚胎神经管上皮细胞进行原代培养，将其分为正常对照组、高温组和牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组。显微镜下观察细胞的形态学变化，用四甲基偶氮唑盐(MTT)自动比色法测定细胞增殖活性，二脒基苯基吲哚(DAPI)染色法测定细胞凋亡率，免疫荧光法检测细胞中Caspase-3、微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果 与正常对照组比较，高温组细胞增殖活性明显降低，细胞凋亡率明显升高，Caspase-3阳性细胞数明显增多，MAP-2阳性细胞数明显减少；与高温组比较，牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组细胞活性显著升高，凋亡率显著降低，Caspase-3阳性细胞数明显减少，MAP-2表达明显增多；4个组比较，GFAP的表达差异无显著性。 结论 牛磺酸对高温处理后神经管上皮细胞的存活具有保护作用，并可能促进其向神经元方向分化。     

shRNA 干扰长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头癌IHH-4 细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:慢病毒 转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT鄄PCR 检测PVT1 的表达,CCK8 检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot 检测细胞Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot 检 测肿瘤组织Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达。结果:sh-PVT1 转染细胞24 h 后,IHH-4 细胞PVT1 的表达水平明显降低(P< 0.01);转染细胞4 d 后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67 表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1 能显 著升高IHH-4 细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3 表达(P<0.01);此外,sh-PVT1 还可诱导细胞G2/ M 期阻滞,抑制周期 蛋白Cyclin A 的表达(P<0.05,P<0.01)。干扰PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67 和 Cyclin A 的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3 表达(P<0.01)。结论:沉默PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4 细胞 增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞。     

聚ADP-核糖聚合酶-1在喉鳞状细胞癌细胞DNA氧化损伤及凋亡中的作用

目的 探究聚ADP-核糖聚合酶-1(PARP1)在喉鳞状细胞癌（LSCC）中的表达及其对LSCC细胞DNA氧化损伤与凋亡的影响。方法 收集40例患者的LSCC组织及癌旁组织样本,采用免疫组化染色和qRT-PCR检测LSCC组织与癌旁组织中PARP1的表达。采用不同浓度Menadione诱导LSCC细胞系Hep-2,MTT法检测不同浓度诱导下细胞增殖抑制率。将Hep-2细胞随机分为对照组（正常培养）、Men组（20μmol/L Menadione处理）、Men+PARP1抑制剂组（20μmol/L Menadione+10μmol/L PARP1抑制剂Olaparib共处理）。MTT法计算各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞内活性氧（ROS）水平;细胞免疫荧光染色观察各组细胞DNA损伤标记分子γ-H2AX焦点生成情况;Western blot测定各组细胞γ-H2AX、DNA-PKcs、BRCA1、LIG4、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况。结果 LSCC组织中PARP1阳性表达率及PARP1 mRNA表达均明显高于癌旁...