hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况及其对人肺癌移植瘤转移的影响

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu- PBL- SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA- 801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu- PBL- SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。     

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立

目的探讨NOD/SCID（nonobese diabetic/severe combined immunodeficien）t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3＋T、CD19＋B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到（863±12.5）μg/mL、（1217±16.7）μg/mL、（958±13.1）μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.     

人脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内重建体液免疫的实验研究

目的探讨人脐血CD34+造血干细胞(HSC)在NOD/SCID小鼠模型体内体液免疫功能重建的作用。方法从新鲜脐血中分离出单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,移植后4、6、8、10周分批处死存活的小鼠,取其脾脏和外周血,分别进行细胞表型分析、体液免疫分析,监测小鼠体液免疫功能重建情况。结果照射2周后,阴性对照组小鼠全部死亡,6周后移植组小鼠存活率为37.5%,空白对照组小鼠存活率为100%。移植4、6、8、10周移植组外周血人CD45+细胞表达(%)分别为4.87±1.23、9.22±2.07、12.34±2.38、8.14±2.36,CD19+B淋巴细胞表达(%)分别为1.07±0.50、2.17±0.95、3.34±0.90、1.67±0.90。移植后10周,在移植组小鼠脾脏可见CD19+B淋巴细胞分布。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合免疫模型。缺少相应细胞因子刺激,CD34+细胞分化能力随时间减弱。     

hu-PBL-SCID人鼠嵌合体细胞免疫的建立及其免疫功能检测

目的：探讨腹腔注射人外周血CD4＋T淋巴细胞后,SCID小鼠能否重建人的细胞免疫系统,并观察重建后免疫系统的特点与功能。方法：从人外周血分离得到CD4+T淋巴细胞,腹腔注射至SCID小鼠体内,并予以rIL-2刺激。注射细胞6周后,分批处死动物,用PCR和免疫组织化学法分别观察SCID小鼠是否表达人的淋巴细胞DNA 及其T,B淋巴细胞表型;移植异种移植物后测定血浆中人IL-2,TNF-α,INF-γ含量。结果：腹腔注射人外周血CD4+T淋巴细胞后, SCID小鼠脾脏体积增大;外周血PCR扩增可见人淋巴细胞HLA-II恒定区DNA片段;肝、脾免疫组织化学染色可见到大量的人CD4+T淋巴细胞,而没有CD8＋,CD19＋T淋巴细胞;移植后重建SCID小鼠血清中可检测到人IL-2,INF-γ。结论：腹腔注射人外周血CD4+T淋巴细胞可选择性重建SCID小鼠人细胞免疫系统;方法简单、迅速、供体来源广。     

同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的 探讨同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法 BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后，用流式细胞仪技术检测受者裸小鼠外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞，用单向混合淋巴细胞培养了解受者T细胞对ConA以及同种异种淋巴细胞的反应性，异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。用ELISA法检测受体血清中抗DNA自身抗体。结果 胎胸腺移植4个月后，受者裸小鼠中CD3^＋CD4^＋T细胞重建良好；T细胞对ConA以及无关的SD鼠异种淋巴细胞的反应性强，而对移植胸腺供体来源的淋巴细胞不发生增殖反应；受者对移植胸腺供体来源鼠皮肤移植物不发生排斥，而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种胸腺移植组发生消耗性疾病死亡高，抗DNA自身抗体明显高于混合胸腺移植组。结论 同系或同种异种胎胸腺混合移植可诱导受者T细胞对供者移植物的免疫耐受。     

混合胸腺移植诱导免疫耐受和防止发生自身免疫性疾病的实验研究

目的：探讨混合胸腺移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法：BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺，建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后，用流式细胞仪技术检测受者外周血中T细胞，用混合淋巴细胞培养了解T细胞对刀豆素A(ConA)以及同种异种淋巴细胞的反应性，异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。术后6个月内比较各组发生自身免疫性疾病情况，观察胃的组织学变化，用ELISA法检测受者血清中抗DNA自身抗体。结果：胸腺移植后，受者T细胞重建良好；T细胞对ConA及无关的SD鼠淋巴细胞的反应强，而对移植胸腺供者来源的淋巴细胞无增殖反应；受者对胸腺供者来源皮肤移植物不发生排斥，而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种组发生自身免疫性疾病率高，异种组胃组织有明显的炎性损害，血清中自身抗体明显高，而混合组未观察到明显的炎性改变。结论：同系或同种、异种胎胸腺混合移植，可诱导供者特异性免疫耐受和防止器官特异性自身体免疫性疾病。     

人-鼠异基因移植物抗宿主动物模型的建立与检测

目的　建立一种人 鼠异基因移植物抗宿主动物模型 ,为研究人 鼠嵌合抗体在动物体内移植排斥反应中的作用提供动物模型。方法　将人外周血单个核细胞移植到裸鼠体内 ,记录动物的存活时间 ;用流式细胞术对裸鼠脾细胞表型进行分析 ,并经组织病理学切片鉴定移植物抗宿主动物模型 (人外周血 裸鼠 )的建立。结果　外周血 裸鼠存活时间为 (2 2 5 0± 6 36 )d ;流式细胞术检测显示人外周血 裸鼠脾脏内人白细胞占 6 0 % ;组织病理学切片显示其肝脏、肺、脾脏有大量淋巴细胞浸润。结论　人 鼠异基因移植物抗宿主动物模型复制成功。     

免疫重建荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的：建立免疫重建的荷人卵巢小鼠腹腔移植模型。方法：用人外周血淋巴细胞（PBL悬液腹腔注射建立有免疫功能的严重联合免疫缺陷（SCID）鼠模型3只;用人PBL和人卵巢癌细胞株SKOV3细胞腹腔注射建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 SCID鼠模型3只,观察其生物学、免疫学特性。结果：每组免疫重建小鼠成瘤比例为3／3。免疫重建均检测到人IgG 存在,与未重建组比较差异有显著意义（P＜0．05）;免疫重建荷瘤鼠主要成瘤在腹腔,分布于肝下素、腹膜、横膈、肠系膜等部位,与未重建组比较,成瘤减少;原代移植瘤细胞形态、CA125表达与SKOV3细胞相似,但透射电镜观察到早期细胞凋亡表现;组织学观察到成片淋巴细胞浸润。结论：免疫重建荷人卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型已初步建立,本模型较好地模拟了在免疫功能情况下人卵巢癌腹腔播散的生物学行为,为卵巢癌治疗的临床前研究提供了较理想动物模型。     

耐受T细胞抑制NK细胞和巨噬细胞对大鼠皮肤移植物的排斥

目的 了解NK细胞和巨噬细胞在T细胞缺乏或T细胞成功重建的情况下对异种移植物排斥的作用。方法在无胸腺裸小鼠、通过混合胸腺移植重建T细胞后裸小鼠和正常免疫健全小鼠分别进行F344大鼠皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4+和CD8+T细胞的百分率,利用ConA增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果 在没有清除受体体内NK细胞和巨噬细胞的情况下,正常无胸腺BALB/c裸小鼠上移植的F344大鼠皮肤移植物发生了排斥,平均存活时间为(20.50±2.38)d;而在裸小鼠左肾包膜下移植的F344胎大鼠胸腺组织,却能够正常发育,并有效重建了受体的T细胞免疫,而且诱导了F344大鼠皮肤移植物的长期存活。结论NK细胞和巨噬细胞在异种移植物的排斥中起十分重要的作用,不同组织对NK细胞和巨噬细胞细胞毒性的易感性可能存在一定的差异。对异种供体抗原已产生耐受的T细胞可抑制受体体内NK细胞和巨噬细胞对异种移植物的排斥。     

胸腺修饰抑制鼠异体周围神经移植免疫排斥反应

目的:探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用。方法:自供体C57BL/6小鼠脾细胞中提取MHC抗原,注入受体Balb/c小鼠胸腺内,二周后移植供体C57BL/6小鼠坐骨神经。同时另设四组对照组,即自体神经移植组、异体神经移植组、冷冻后异体神经移植组、应用免疫抑制剂异体神经移植组。三周后行神经电生理检查、组织学检查、混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应的检测。结果:实验组优于异体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组。结论:胸腺内注射异基因抗原可诱导对异体坐骨神经移植的免疫耐受。     

人免疫重建荷人人乳头瘤病毒16阳性宫颈癌-严重联合免疫缺陷鼠模型的建立及其免疫学特性研究

目的　建立人免疫重建荷人人乳头瘤病毒 (HPV) 16阳性宫颈癌 严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型并研究其免疫学特性。方法　对SCID鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞 (hu PBL)后2 4h ,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型 ,观察荷瘤鼠的一般生物学特性、异种移植物抗宿主病 (XGVHD)情况 ,检测血清中人IgG含量、外周血和脾中人CD3 、CD4 和CD8 T细胞、脾重、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)以及脾细胞毒杀伤功能。结果　免疫重建的小鼠成瘤率为 10 0 %。未发现异种移植物抗宿主反应。荷瘤第 5天 ,血浆中人IgG水平人化组 (0 98μg/ml± 0 2 0 μg/ml)、人化荷瘤组 (1 39μg/ml± 0 2 5 μg/ml)均显著高于空白组 (0 2 0 μg/ml± 0 11μg/ml) (t=7 6 5 5、9 937,均P =0 0 0 0 ) ,人化荷瘤组显著高于人化组 (t=3 2 0 0 ,P =0 0 0 6 ) ,荷瘤组与空白组比较差异无显著意义 (t=0 0 90 ,P =0 930 )。 30d内免疫重建组血浆中人IgG水平随重建时间延长而升高 ,与未人化组比显著升高 (P <0 0 5 )。外周血和脾中人CD3 ,CD4 和CD8 T细胞均显著升高 (P <0 0 5 ) ,脾重显著增加 (P <0 0 5 )。组织学观察到移植瘤局部TIL浸润并经免疫组织化学检测到人CD4 T细胞     

SCID鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的研究人原代宫颈癌组织在SCID鼠体内成瘤性及生物学特性。方法接种人宫颈癌组织于SCID鼠皮下,以建立人宫颈癌SCID鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长,组织学特性,检测肿瘤组织,外周血和肝、脾等脏器HPVDNA表达情况。结果成瘤率为100%,移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查一致,HPVDNA呈阳性,亚型与所种植人宫颈癌组织HPV亚型一致,而外周血与肝、脾等脏器HPVDNA呈阴性。结论初步建立SCID鼠人宫颈癌组织模型,其较好的模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步探讨宫颈癌的发病机制及鉴定治疗的新方法提供了一个理想的动物模型。     

人HLA半相合混合脐血在SCID小鼠移植的实验研究

目的：探讨不同供者来源脐血混合移植的可行性和植入特性。方法：分别将两份人HLA半相合混合脐血或单份脐血输入经亚致量照射后的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠，观察两组脐血在SCID小鼠体内的植入状况及多系造血重建特性。结果：混合脐血和单份脐血移植均可在受鼠体内植入，形成供－受混合嵌合体，并能重建多系造血，存活率和植入率无统计学意义（P＞0．05）。用多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸（PCR－SSO）探针检测人HLA－DQB1基因发现，HLA半相合混合脐血移植可有1份或2份脐血植入，其中造血祖细胞含量和体外克隆形成能力高者，更易于植入，造血重建特性与单一脐血移植比较无统计学意义。结论：HLA半相合人混合脐血可同时在SCID小鼠体内植入，形成来自供－受三者的多嵌合状态，并能重建造血及免疫功能。     

免疫重建SCID小鼠B淋巴母细胞瘤模型的建立

目的在免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficient,SCID)小鼠体内建立人的B淋巴母细胞瘤模型。方法将SCID小鼠随机分为4组,每组7只,分别为:(1)实验组:在每只SCID小鼠的腹腔内接种人外周血单个核细胞(peripheral-bloodmononuclearcells,PBMC)1周后,腹腔接种EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)悬液;(2)不经任何处理的SCID小鼠对照组;(3)腹腔接种人PBMC的SCID小鼠对照组;(4)腹腔接种EBV悬液的SCID小鼠对照组。每日观察小鼠的健康情况,于免疫重建的第5周解剖各组小鼠,观察腹腔各脏器的肿瘤形成情况,并用HE染色、组织化学以及PCR方法鉴定所长肿瘤的特性。结果4周后,在接种EBV的免疫重建SCID小鼠的腹腔中可形成(35±12.5)mm3大小的肿瘤,多位于肝脏,而对照组均未见有肿瘤生长;HE染色表明,所长的肿瘤均为高分化的B淋巴母细胞瘤;组织化学实验表明,肿瘤细胞均可表达CD19、CD20、CD45RA分子和EB病毒编码的蛋白;PCR检测显示,肿瘤组织的DNA在269bp处出现特异的EBV扩增条带。结论成功建立了免疫重建SCID小鼠的人B淋巴母细胞瘤模型,为研究人类肿瘤免疫提供了一个理想的动物模型。     

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影响

目的 探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力。方法 将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB／c,B缺陷的CBA／N,T缺陷的BALB/c nude及T,B缺陷的C.B－17 SICD小鼠）右后臀皮下,观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验。结果 BALB/c和CAB／N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B－17 SCID小鼠100％成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID（BALB/c－PBL－SCID）的不成瘤,用CAB／N外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）成瘤,接种过瘤的BALB/c和CBA／N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀作用,对照组和nude,SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用。结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用,这种排斥是异种特异笥的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用。