血管紧张素Ⅱ对大鼠腹膜间皮细胞表达纤维连接蛋白的影响及其作用机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）纤维连接蛋白（FN）表达的影响，以及有丝分裂原活化蛋白激酶通路（mitogen—activated protein kinases，MAPKs）在AngⅡ诱导FN表达中所起的作用。方法：酶消化法于大鼠大网膜中分离间皮细胞，以AngⅡ刺激后，分别应用realtime．PCR及Western印迹法检测FN的表达情况。应用Western印迹法观察AngⅡ（1μmol／L）对MAPK通路的主要信号传导蛋白ERK1／2、p38MAPK和JNK活化的影响，并分别应用ERK1／2、p38MAPK和JNK的抑制剂以及AngⅡ的Ⅰ型受体（AT1）阻断剂进行干预，Western印迹法观察上述抑制剂对AngⅡ诱导FN表达的影响。结果：AngⅡ促进RPMCs表达FN，活化ERK1／2和p38MAPK信号传导通路，而不影响JNK通路的活化。ERK1／2通路抑制剂PD98059及AT1受体阻断剂（losartan）可明显抑制AngⅡ诱导的FN表达增加，而p38MAPK和JNK抑制剂对FN的表达无影响。结论：AngⅡ促进RPMCs合成FN增多。AT1受体和ERK1／2通路介导了AngⅡ诱导RPMCs表达FN。     

活化蛋白C对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对重症急性胰腺炎（SAP）继发严重并发症起早期关键介导作用，相应抑制剂可改善SAP的病情。活化蛋白C（APC）具有改善SAP病情的作用，其具体机制尚未阐明。目的：观察APC对SAP大鼠MAPK信号通路中主要激酶的影响以及后续炎症介质的变化，为临床用药提供理论依据。方法：Sprague．DawleY大鼠诱导SAP模型后即刻静脉注射APC10μg/kg或50μg/kg。以基因芯片检测胰腺组织MAPK信号通路相关基因。以实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）和蛋白质印迹法检测胰腺组织该通路中p38MAPK、c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶（JNK/SAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2mRNA、蛋白和磷酸化蛋白水平的表达，同时检测肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β蛋白的表达。结果：与APC治疗组和正常对照组相比，SAP组胰腺组织p38MAPK和JNK2mRNA呈高表达。与SAP组相比，50Ixg/kgAPC治疗组p38MAPK、JNK/SAPK蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著降低，ERK1/2蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著升高，TNF-α和蛋白表达水平显著降低（P均〈0．05）。APC治疗组p38MAPK、磷酸化ERK1/2和TNF-α蛋白表达水平呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论：APC可抑制SAP大鼠胰腺组织MAPK信号通路内p38MAPK和JNK/SAPK的表达和活化，进而抑制TNF-α和IL-1β的释放，同时上调ERK1/2的表达和活化．从而减轻胰腺组织损伤。     

IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系

目的探讨IL-1β调控大鼠HSCsTIMP-1mRNA表达与JNK、p38 MAPK通路的关系。方法RT-PCR用于检测大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达；Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度。结果IL-1β（10ng／mL）作用培养的HSCs 24h后，TIMP-1 mRNA表达（1．191±0．079）明显高于对照组（0．545±0．091），有统计学意义（P〈0．01）；IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路。用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后，IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制，分别为10μmol／L，1．022±0．113;20μmol／L，0．8694±0．070；40μmol／L，0．666±0．123，与对照组相比（1．163±0．107），各浓度组均有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）。用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后，HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多，分别为10μmol／L，1．507±0．099；20μmol／L，1．698±0．107；40μmol／L，1．857±0．054。与对照组相比（1．027±0．061），各浓度组均有显著性差异（P均〈0．01）。结论IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展，JNK和p38信号蛋白参与了此过程，HSCs中两条通路均可被IL-1激活，但所起作用完全不同，它们相互作用相互调节，共同调控TIMP-1 mRNA的表达。     

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景：研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白oceludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的：探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法：建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型．M1Tr法检测阿司匹林（5-20mmol／L）和MEK抑制剂U0126（10～40μmol／L）对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林（8．78mmol／L）组、U0126（14．91μmol／L）组、联合组（U0126＋阿司匹林）和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测P-ERK1／2、occludin蛋白表达。结果：阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES．1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显．细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组P-ERK1／2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论：阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长．下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。     

用单细胞凝胶电泳观察氟砷单独及联合对淋巴细胞DNA损伤

目的 观察氟、砷单独及联合作用对正常人淋巴细胞DNA的损伤作用及特点。方法 采用单细胞凝胶电泳（SCGE）实验，观察不同剂量氟、砷单独及联合应用对正常人淋巴细胞DNA的损伤。结果 人淋巴细胞在浓度为0．1、0．5μmol／L的NaAsO2及浓度为10、50μmol／L的NaF染毒24h后，均引起明显的DNA泳动（彗星尾）并呈现明显的剂量-效应关系；氟砷联合作用淋巴细胞，在0．5μmol／L NaAsO2＋50μmol／L NaF的剂量下，细胞DNA的损伤呈现出协同作用（P〈0．01）。结论 NaAsO2与NaF均可引起DNA损伤；低剂量NaAsO2与NaF联合作用时，则呈现协同作用。     

清热解毒方药含药血清对脂多糖刺激下人单核细胞MAPK通路的干预作用

目的探讨清热解毒方药毒素清含药血清对单核细胞THP-1内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,从炎症细胞通路层面揭示该药治疗肺炎的机制。方法制备毒素清低、中、高浓度含药血清,以脂多糖(LPS)刺激的单核巨噬细胞为研究对象,将培养好的细胞分为:空白组(10%空白药物血清)、模型组(10%空白药物血清+1μg/ml LPS)、毒素清低、中、高浓度组(含10%相应药物血清+1μg/ml LPS)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8,Western印迹检测P38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)46/54、细胞外调节蛋白激酶(ERK) 42/44蛋白磷酸化水平。结果与空白组比,模型组细胞IL-1、IL-6、IL-8的表达及P38MAPK、JNK46/54、ERK42/44蛋白的磷酸化水平均显著升高,毒素清不同浓度含药血清组上述指标较模型组降低,以中高浓度组尤为显著(P0. 05)。结论 LPS作为感染刺激物作用于单核巨噬细胞,激活了该细胞内MAPK信号通路,促进了炎症因子的分泌。清热解毒方药毒素清减轻肺部炎症损伤的机制与其抑制单核巨噬细胞内MAPK通路的活化,降低炎症细胞因子的表达有关。     

p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用

目的观察p38信号通路（P38MAPK）在内皮细胞微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法将体外培养的HUVECs随机分组：①EMPs不同时点观察组：用EMPs（终浓度105／m1）分别刺激细胞0、3、6、12、24h;②EMPs不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10^2、10^3、10^4、10^5／ml的EMPs刺激细胞24h;③EMPs＋p38MAPK特异性抑制剂SB203580组：在EMPs（终浓度10^5／ml）刺激前,与终浓度为5μmol／L的SB203580共同孵育30min。用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM—1mRNA的表达。结果EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM—1mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性。p38MAPK特异性拈抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用。结论p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控。     

丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响

目的研究细胞外信号渊节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径（ERKMAPK）与DNA甲基化问的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116，分别以PBS、二甲基亚砜（DMSO）为对照组，PD 9805950μmol／L、5氮脱氧胞苷（5-aza—dC）5μmol／L、PD9805950μmol／L＋5-aza-dC5μmol／L进行药物干预．以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶（Dnmt）1、3a和3b基因转录水平；流式细胞仪分析细胞周期；MTT测定细胞活力；光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果ERK—MAPK途径阻断剂PD98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b．Dnmt抑制剂5-aza-dC下调Dnmt 1、Dnmt 3a和Dnmt 3b，且5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5-azo-dC明显降低G0／G1期细胞百分比（P〈0．05），G2／M期细胞百分比明显增加（P〈0．05）；PD98059使G0／G1期细胞百分比降低（P（0．05）．G2／M期增加（P〈0．05）。PD98059明显抑制细胞生长。PD98059促进细胞分化，呈上皮样改变，细胞变狭长，胞质减少，细胞排列开始出现相对整齐；5-azm-dC干预组细胞大小不一，出现较多多倍体细胞（多个核分裂相）。结论ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖，并诱导细胞分化；两者有协同作用；ERK—MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。     

法舒地尔通过Rho/ROCK信号通路抑制肝星状细胞黏附、迁移和增殖

目的观察Rho／Rho激酶（ROCK）信号转导通路抑制剂——法舒地尔，对肝星状细胞（1ISC）黏附、迁移和增殖的影响。方法将培养的HSC分为以下5组：对照组；法舒地尔12.5μmol／L组；法舒地尔25μmol／L组；法舒地尔50μmol／L组；法舒地尔100μmol／L组。采用甲苯胺蓝染色法测定细胞黏附率，Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖，Western blot检测HSC RhoA、p-MLC（Thr18／Ser19）和α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果法舒地尔对HSC的黏附、迁移和增殖均具有抑制作用，随着浓度增加，抑制作用加强；法舒地尔抑制HSC的α-平滑肌肌动蛋白表达，并且对Rho／ROCK信号转导通路关键信号分子P-MLC（Thr18／Ser19）的蛋白表达有抑制作用。结论法舒地尔通过抑制Rho／ROCK信号通路细胞骨架的调节作用抑制1ISC黏附、迁移和增殖。     

塞来昔布对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及MAPK/ERK通路的影响

目的研究塞来昔布对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路的影响。方法细胞培养大鼠H9c2心肌细胞,将细胞分为5组:空白组(未加任何药物处理);AngⅡ组(加入1μmol/L的AngⅡ诱导心肌肥大);AngⅡ+塞来昔布50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L组,各组细胞加入药物培养48 h后用于后续实验。观察细胞形态学变化,测定细胞表面积和细胞中总蛋白浓度变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹检测各组细胞中p38MAPK、ERK1/2、磷酸化(p)-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量。结果与空白组比较,AngⅡ组细胞形态增大,细胞贴壁不牢,漂浮细胞增多;与AngⅡ组比较,塞来昔布各处理组细胞形态变小,漂浮细胞减少;与空白组比较,AngⅡ组细胞表面积显著增大(P0.05),细胞中总蛋白浓度显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量显著减少(P0.05);与AngⅡ组比较,塞来昔布处理各组细胞表面积显著减少(P0.05),细胞中总蛋白浓度和细胞凋亡率显著降低(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量显著增多(P0.05);AngⅡ+塞来昔布50 mg/L组和100 mg/L组细胞表面积、细胞中总蛋白浓度、细胞凋亡率显著高于空白组(P0.05),细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量低于空白组(P0.05),AngⅡ+塞来昔布150 mg/L组细胞表面积、细胞中总蛋白浓度、细胞凋亡率及细胞中p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白相对表达量与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论塞来昔布对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有抑制作用,其抑制心肌细胞肥大的作用可能与激活MAPK/ERK信号通路有关。     

PPAR-γ依赖性ERK磷酸化介导吡格列酮引起的钠和碳酸氢根在肾近曲小管的重吸收

目的噻唑烷二酮类药物是PPAR-γ的选择性配体,用于改善胰岛素抵抗,但因其可引起浮肿、钠潴留而使用受限。本研究探讨该类药物引起浮肿的机制及其传导通路。方法兔肾近曲小管在吡格列酮（0．03、0．3、3μmol／L）及PPAR-γ拮抗剂（5μmol／LGW9662）或MAPK抑制剂（10μmol／L PD98059）作用下,观察Na^＋／HCO3^-转运活动度及HCO3重吸收率的变化,Western blot法测定ERK的磷酸化。结果（1）0．3μmol／L吡格列酮刺激兔肾近曲小管Na^＋和HCO3^-的转运和重吸收,该刺激作用被MAPK抑制剂或PPAR-γ拮抗剂阻断。（2）0．3μmol／L吡格列酮引起ERK磷酸化,被MAPK抑制剂或PPAR-γ拮抗剂阻滞。结论在兔肾近曲小管,通过PPAR-γ依赖的ERK磷酸化介导吡格列酮引起的肾近曲小管Na^＋和HCO3^-的重吸收。     

ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用

目的本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase,ERK）信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）增殖中的调控作用。方法以体外分离、培养的ASMCs为研究对象,加入不同浓度组胺（histanmine,Hist）和PD98059对其进行处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法检测Hist及ERK信号通路对ASMCs增殖的影响,Western blot检测ERK1／2、磷酸化ERK1／2（phosphorylated-ERK1／2,p-ERK1／2）蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定ASMCs核内NF—κB水平,并对各组进行比较。结果低浓度和高浓度的Hist均能不同程度刺激ASMCs增殖,100μmol／L时细胞存活率达201．3％;Hist组ASMCs增殖反应与对照组相比显著增加,而Hist＋PD980059组ASMCs的增殖反应显著低于Hist组;Hist组ASMCs中的p-ERK1／2蛋白表达较正常对照组明显增强,在加入PD980059后Hist诱导的活化ERK1／2相对于Hist组表达显著下降;Hist处理组NF—κB吸光度值显著高于对照组,Hist＋PD98059组NF—κB吸光度值较Hist处理组显著降低。结论Hist可显著诱导ASMCs增殖,ERK信号通道在此调控中起重要作用,而且还可能参与ASMCs中Hist诱导的NF—κB活化。     

苦参碱抑制HepG2肝癌细胞的靶点——ERK信号通路

目的观察苦参碱在ERK信号通路中对肝癌细胞的抑制靶点。方法实验分为空白对照组、实验组、阳性对照组3组,空白对照组加入不含药的细胞培养基,实验组分别加入苦参碱,使其终浓度为1、2、4 mg/mL,阳性对照组加用终浓度为20μmol/L的ERK信号通路阻断剂PD98059,培养24 h后,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测苦参碱对ERK信号通路的调控作用。结果苦参碱作用后HepG2细胞的ERK核酸表达下降,并通过下调p-ERK蛋白的表达量(P0.05)抑制ERK信号通路。结论 ERK信号通路是苦参碱抑制肝癌细胞的靶点之一。     

姜黄素抗脑缺血再灌注损伤作用与MAPK信号通路的相关性分析

目的 探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、C-Jun氨基末端(JNK)/应激化蛋白激酶(SAPK)及p38MAPK信号转导通路的影响.方法 采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO)建立局灶性脑缺血模型,观察不同浓度姜黄素(20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg)对脑缺血再灌注损伤后大鼠神经行为学评分的影响,并用Western blot法检测p38MAPK、P-p38MAPK、ERK1/2、P-ERK1/2及JNK的表达.结果 假手术组无神经行为学改变;各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组(P<0.05).与缺血再灌注组相比各用药组p-p38MAPK及JNK表达明显降低(P<0.05),而P-ERK1/2表达显著增加(P(0.05),p38MAPK及ERK1/2表达各组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与抑制p38MAPK和JNK/SAPK信号转导通路以及增强ERK1/2信号转导通路有关.     

溶血磷脂酸受体3介导溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞表型转化

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)受体在LPA诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用及相关信号传导通路。方法培养SD大鼠分化表型VSMC,培养液加胰岛素样生长因子(IGF-1)为IGF-1组,加溶剂载体为空白组,以不同浓度水平LPA(0.1～10μmol/L)刺激,依次为LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组,并在LPA(1μmol/L)条件下,以LPA受体1,3拮抗剂二辛烷甘油焦磷酸盐(DGPP 8:0)为DGPP 1组,RT-PCR法检测平滑肌肌动蛋白α(SMA-α)和骨桥蛋白mRNA表达,Western blot法检测p38分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化蛋白水平。结果与空白组和IGF-1组比较,LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组呈剂量依赖促进骨桥蛋白mRNA表达上升,SMA-αmR NA表达下降(P<0.01);与空白组比较,LPA 1组p38MAPK和ERK激活(P<0.01),DGPP 1组p38MAPK和ERK无明显变化(P>0.05)。结论与Gq蛋白偶联的LPA受体3介导了LPA诱导的VSMC表型转化,阻滞上述通路有可能成为控制与动脉粥样硬化和再狭窄等血管疾病相关的VSMC表型转化潜在的治疗干预靶点。     

无机砷对红系相关因子-2及其抑制因子mRNA表达的影响

目的观察亚砷酸钠（NaAsO2,sodium arsenite）对Chang肝细胞株核转录因子红系相关因子（nuclear factor ery-throid 2-related factor 2,Nrf2）及其胞浆抑制因子Keap1（Kelch-like ECH-associated protein 1）的mRNA表达水平的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2（0、50、200、400μmol/L）暴露人类Chang肝细胞株12 h,采用AlamarBlue法测定细胞增殖活性,采用RT-PCR法测定Nrf2和Keap1的mRNA表达水平。结果 50μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而200μmol/L和400μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性均显著低于对照组（P〈0.05）;50、200、400μmol/L的NaAsO2暴露12 h,Nrf2和Keap1的mRNA表达水平与对照组比较均显著下降（P〈0.05）,且呈剂量-反应关系。结论高浓度无机砷暴露能抑制Chang肝细胞株Nrf2和Keap1的mRNA表达水平,并可能与无机砷造成机体的高氧化应激水平有关。     

网膜素改善氧化应激对人动脉血管平滑肌细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的抑制作用

目的研究网膜素对氧化应激作用下的人主动脉平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅳ表达的影响。方法将人主动脉平滑肌细胞系培养,细胞密度到达90%以上后,随机分为5组:对照组、氧化应激组、网膜素组、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂组。其中,对照组不增加任何处理,氧化应激组加入叔丁基氢过氧化物(t-BHP,87.1μmol/L),网膜素组(87.1μmol/L t-BHP+600μg/L网膜素)、ERK抑制剂组、p38MAPK抑制剂组为在网膜素组基础上分别加入ERK抑制剂(PD98059,60μmol/L)和p38MAPK抑制剂(SB203580,100μmol/L),应用Western blot法检测细胞中胶原Ⅰ、Ⅳ表达量。结果应用MTT法,筛选t-BHP最佳作用浓度为87.1μmol/L;与对照组相比,氧化应激组人动脉平滑肌细胞内Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著下降(P0.01);与氧化应激组比较,网膜素组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著升高(P0.01);与网膜素组比较,ERK抑制剂组和p38MAPK抑制剂组Ⅰ、Ⅳ型胶原表达均显著下降(P0.05)。结论网膜素能改善氧化应激对人动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达抑制的作用,可能通过此机制促进动脉粥样硬化斑块的稳定,ERK/p38MAPK途径可能参与网膜素的信号传导。     

盐酸羟考酮通过JNK/p38MAPK信号通路调控异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的机制

目的探究盐酸羟考酮对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养心肌细胞H9c2,设置对照组、ISO组、盐酸羟考酮1μmol/L组、盐酸羟考酮5μmol/L组、盐酸羟考酮10μmol/L组、ISO+SB203580〔c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38MAPK)信号通路阻断剂〕组。噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率;流式细胞学法检测各组心肌细胞的凋亡率;Western印迹检测心肌细胞的B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)及JNK/p38MAPK信号通路相关蛋白的表达;测定培养细胞上清液乳脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量。结果与对照组比较,ISO组心肌细胞存活率降低,各给药组心肌细胞存活率明显升高(P<0.05);与对照组比较,ISO组心肌细胞的凋亡率明显升高(P<0.05),而盐酸羟考酮可显著降低细胞凋亡率(P<0.05);与ISO组比较,盐酸羟考酮10μmol/L组LDH、CK水平及Bax、磷酸化(p)-JNK、p-p38MAPK表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);阻断JNK/p38MAPK信号通路可显著增加细胞存活率(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),促进Bcl-2表达(P<0.05),而抑制Bax表达(P<0.05)。结论盐酸羟考酮对ISO诱导的心肌细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能与抑制JNK/p38MAPK信号通路的活化有关。     

血府逐瘀汤、天麻钩藤饮、温胆汤对自发性高血压大鼠心肌组织 MAPK 信号通路的影响

目的：观察血府逐瘀汤、天麻钩藤饮、温胆汤对自发性高血压大鼠心肌组织丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响。方法将60只16周龄自发性高血压大鼠随机分为阳性对照组、蛋白酶体抑制剂（ MG-132）组、血府逐瘀汤组、温胆汤组、天麻钩藤饮组各12只,另取12只正常血压大鼠作为阴性对照组。 MG-132组腹腔注射MG-132,血府逐瘀汤组、天麻钩藤饮组、温胆汤组分别给予相应的药物灌胃,阳性对照组、阴性对照组给予等量生理盐水灌胃。连续用药8周后断头处死,取大鼠心脏,采用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测各组大鼠心肌组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外信号调节激酶5（ERK5）。结果与阴性对照组比较,阳性对照组JNK水平升高,阳性对照组、天麻钩藤饮组、温胆汤组、血府逐瘀汤组、MG132组p38MAPK及ERK5水平升高（P均＜0．01）;与阳性对照组比较,天麻钩藤饮组、温胆汤组、血府逐瘀汤组、MG132组p38MAPK及ERK5水平降低（P均＜0．01）;与MG132组比较,天麻钩藤饮组、温胆汤组、血府逐瘀汤组p38MAPK水平升高（P均＜0．01）;与天麻钩藤饮组、温胆汤组比较,血府逐瘀汤组p38MAPK及ERK5水平降低（P均＜0．05）。结论血府逐瘀汤、天麻钩藤饮、温胆汤可抑制大鼠心肌组织JNK、p38 MAPK、ERK5的表达,血府逐瘀汤较另外两种方剂抑制作用更为明显。     

人工合成多肽cSN50.1对肝癌细胞HepG2恶性行为的影响及其机制

目的 探讨c SN50.1对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭和集落形成能力的影响及机制。方法 将HepG2细胞分为6组：c SN50.1 0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、70μmol/L、90μmol/L组，采用CCK-8实验研究不同浓度c SN50.1对HepG2细胞增殖的影响，并计算半数抑制浓度（IC50）；将HepG2细胞分为4组：c SN50.1 0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L，采用细胞划痕、Transwell和细胞克隆实验研究不同浓度cSN50.1对HepG2细胞迁移、侵袭和集落形成能力的影响；将HepG2细胞分为3组：Control组、SP600125组（AP-1信号通路抑制剂）和cSN50.1组，研究AP-1信号通路在cSN50.1对肝癌细胞作用中的影响，采用RT-PCR和Western Blot检测CXCL5和TNF-α的表达以及细胞质和细胞核中c-Jun蛋白的表达；将HepG2细胞分为3组：Control组、PDTC组（NF-κB信号通路抑制剂）和cSN50.1组，研究NF-κB信号通路在cSN...