整合素α1、α5在膀胱癌癌组织中的表达及意义

为探讨粘附分子整合素α1、α5（下简称α1、α5）在膀胱癌中的表达及其与膀胱癌分化、侵袭转移的关系，采用免疫组织化学法对56例膀胱癌患者的癌组织石蜡包埋标本进行α1、α5半定量检测。结果有40例表达增强；α1、α5阳性率高分化癌明显低于低分化癌（P＜0．05）；伴淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者（P＜0．05）。认为α1、α5表达与肿瘤细胞的分化程度呈负相关，与淋巴结转移呈正相关，其可作为判断膀胱癌恶性程度及患者预后的生物学指标。     

缺氧对人胰腺癌细胞整合素α5、β1表达的影响

目的探讨缺氧环境对人胰腺癌细胞株PANC1诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、整合素α5(integrinα,INFα5)和整合素β_1(integrinβ,INTβ_1)表达及侵袭力的影响。方法以5%氧条件下培养PANC1,采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、INTα_s、INTβ_1的mRNA和蛋白表达;采用Matrigel胶观测人胰腺癌细胞黏附侵袭能力的变化。并加入HIF-1α抑制剂YC-1缺氧培养PANC1,观察上述各指标的变化。结果HIF-1α蛋白表达从常规培养时0.497±0.011逐渐上升到缺氧培养24h的1.455±0.133(P<0.05),应用YC-1后蛋白表达下降到0.465±0.073(P<0.05),而HIF-1αmRNA表达无明显变化;INT_(α5)蛋白从常规培养时0.964±0.032逐渐下降到缺氧培养24h的0.465±0.073(P<0.05),应用YC-1后蛋白表达又上升到0.883±0.013(P<0.05).INT_(α5)mRNA的表达从0.212±0.023下降到0.018±0.002(P<0.05),应用YC-1后再上升到0.069±0.011(P<0.05);INTβ1的蛋白和mRNA表达于缺氧培养及YC-1处理后均无明显变化。细胞侵袭力从常规培养时69.9±30.5逐渐上升到缺氧培养24h的105.0±14.9(P<0.05),应用YC-1后又下降到79.7±20.9(P<0.05)。结论缺氧微环境下HIF-1α过表达可能通过下调INT_(α5)来调控胰腺癌细胞间和细胞与基质间的黏附能力,有利于进一步侵袭转移。     

Foxo3a对胃癌细胞SGC7901凋亡的促进作用

目的:观察转录因子Foxo3a对胃癌细胞SGC7901凋亡的影响,并初步探讨其促进凋亡的分子机制.方法:构建Foxo3a真核表达质粒,转染培养的胃癌细胞系SGC7901 4-6 h,在FBS完全培养基培养24 h后,换成0.1%无血清的培养基中培养8 h,TUNEL染色观察对胃癌细胞凋亡的影响,Western blo检测切割的caspase-3和PARP水平.结果:成功构建了Foxo3a真核表达质粒.转染胃癌细胞后,与对照组相比,1和2 μg Foxo3a处理组胃癌细胞凋亡率达到了5.8%±2.3%和11.1%±3.4%.是对照组的近2和4倍.caspase-3和PARP活性明显增高.结论:Foxo3a是一种肿瘤抑制因子,可通过促进caspase-3和PARP的活性来诱导癌细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的生长.     

缺氧对人胰腺癌细胞整合素α5、β1表达的影响

目的 探讨缺氧环境对人胰腺癌细胞株PANC1诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、整合素α5(integrinα,INFα5)和整合素β1(integrinβ1,INTβ1)表达及侵袭力的影响.方法 以5%氧条件下培养PANC1,采用RT-PCR和Western blot 检测 HIF-1α、INTα5、的mRNA 和蛋白表达;采用Matrigel胶观测人胰腺癌细胞黏附侵袭能力的变化.并加入HIF-1α抑制剂YC-1缺氧培养PANC1,观察上述各指标的变化.结果 HIF-1α蛋白表达从常规培养时0.497±0.011逐渐上升到缺氧培养24h的1.455±0.133(P＜0.05),应用YC-1后蛋白表达下降到0.465±0.073(P＜0.05),而HIF-1α mRNA 表达无明显变化;INTα5蛋白从常规培养时0.964±0.032逐渐下降到缺氧培养24h的0.465±0.073(P＜0.05),应用YC-1后蛋白表达又上升到0.883±0.013(P＜0.05),INTα5mRNA的表达从0.212±0.023下降到0.018±0.002(P＜0.05),应用YC-1后再上升到0.069±0.011(P＜0.05);INTβ1的蛋白和mRNA 表达于缺氧培养及YC-1处理后均无明显变化.细胞侵袭力从常规培养时69.9±30.5逐渐上升到缺氧培养24h的105.0±14.9(P＜0.05),应用YC-1后又不降到79.7±20.9(P＜0.05).结论缺氧微环境下HIF-1α过表达可能通过下调INTα5来调控胰腺癌细胞间和细胞与基质间的黏附能力,有利于进一步侵袭转移.     

微小RNA-424-5P靶向调控HMGA1基因对胃癌细胞生长、侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-424-5P对高迁移率族蛋白(HMG)A1的靶向调控及对胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法 将人胃癌BGC-823细胞复苏后,应用10%胎牛血清,在5%二氧化碳和37℃培养箱中进行培养,应用miR-424-5P抑制物(inhibitor)转染的BGC-823细胞列为anti-miR-424-5P组。应用阴性对照进行转染的BGC-823细胞列为anti-NC组,不进行转染的BGC-823细胞列为对照组,细胞转染后各组继续在培养箱中培养。应用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组miR-424-5P的相对表达水平;应用四甲基噻唑蓝(MTT)研究miR-424-5P对细胞增殖的影响;应用划痕实验检测miR-424-5P对细胞迁移的影响;应用transwell实验研究miR-424-5P对细胞侵袭的影响。应用免疫印迹实验对各组HMGA1蛋白相对表达水平进行检测。结果 转染48 h后qRT-PCR结果表明,anti-miR-424-5P组miR-424-5P相对表达量明显低于对照组和anti-NC组(P<0.05)。对BGC-823细胞进行转染48 h后,miR...     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达及意义

目的 探讨整合素α5β1、CD151在胃癌组织中的表达特点、相互关系以及它们在胃癌的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化方法同步检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织中的整合素α5β1、CD151的表达情况,分析二者在胃癌组织中表达的相关性以及和临床病理指标的关系.结果 ①胃癌组整合素α5β1、CD151的阳性表达率分别为60％、63.75％,均高于癌旁正常组(22％、18％)(P＜0.05).②整合素α5β1、CD151在胃癌组织的表达与胃癌的不同分化程度密切相关(P＜0.05).③整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达强度呈正相关关系(r=0.428,P＜0.05).结论 整合素α5β1、CD151在胃癌组织中呈高表达,且与胃癌的分化程度相关,二者在胃癌组织的表达具有正相关性,它们与胃癌的发生、发展密切相关,是胃癌早期诊断和抗转移治疗新的分子靶点,可为评估肿瘤的恶性进展、判断患者预后提供依据.     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

蛋白激酶B、Caspase-9通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的 探讨蛋白激酶B（PKB）、Caspase-9信号通路活化对胃癌细胞生长的影响及其与胃癌细胞对足叶乙甙化疗敏感性的关系.方法 分别用足叶乙甙、足叶乙甙和PKB通路特异性抑制剂Wortmannin在不同时间段处理胃癌肿瘤细胞SGC7901后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况,非放射性免疫沉淀法检测PKB活性,Western-blot法检测Caspase-9磷酸化程度和Caspase-3蛋白的表达.结果 足叶乙甙对SGC7901有明显的增殖抑制作用,能明显诱导肿瘤细胞凋亡,但在12 h时,其增殖抑制作用和凋亡诱导作用较6 h时均明显降低,细胞对足叶乙甙敏感性降低,24 h时有所上升.足叶乙甙作用SGC7901后PKB活性逐渐增强,Caspase-9活性和Caspase-3表达12 h时明显降低.加用Wortmannin预处理后,PKB活性明显降低,Caspase-9活性和Caspase3表达呈上升趋势,12 h时上升最明显;足叶乙甙对SGC7901的增殖抑制作用和凋亡诱导作用持续增强,肿瘤细胞对足叶乙甙持续较高敏感性.结论 蛋白激酶B、Caspase-9信号通路活化可促进胃癌细胞生存,降低其化疗敏感性,特异性的PKB通路抑制剂可增强胃癌细胞的化疗效果.     

安神补脑软胶囊对老年失眠模型大鼠下丘脑5-羟色胺1a、5-羟色胺2a、γ-氨基丁酸表达量的影响

目的观察安神补脑软胶囊对失眠大鼠下丘脑5-羟色胺(5-HT)1a、5-HT2a、γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响。方法采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)法造模。造模成功后,随机将动物分为老年模型组(模型组)、安神补脑软胶囊高中低组(安神高中低组)、地西泮组;另设青年对照组(对照组)。分别给予安神补脑软胶囊(24、12、6 g生药/kg)、地西泮(0.525 mg/kg),对照组、模型组给予相应容量的蒸馏水,连续给药7 d,荧光定量PCR检测下丘脑内5-HT1a、5-HT2a受体mRNA的表达,酶联免疫法、免疫组化法检测GABA含量。结果与模型组相比,各给药组下丘脑5-HT1a表达量明显升高,5-HT2a表达量明显降低,GABA蛋白的表达明显增多(均P0.05)。结论安神补脑软胶囊通过调节失眠模型大鼠下丘脑中5-HT1a、5-HT2a、GABA的表达发挥治疗作用。     

重组人MCP-1对胃癌细胞作用的研究

很多研究表明,肿瘤组织周围浸润的炎性细胞,尤其是巨噬细胞,对恶性肿瘤的生长,免疫,转移等生物学特性有着重要的作用。为更进一步研究利用这些作用,研究者们开始关注具有趋化活性的细胞因子在肿瘤治疗中应用的可能性。在本实验中,我们利用重组产物人MCP-1,将其与肿瘤细胞共同接种,并直接注射了肿瘤局部、观察对肿瘤生长过程的影响,从而探讨这一产物在胃癌治疗中应用的前景。     

转化生长因子β_1对胃癌细胞表皮生长因子受体表达的影响和定量研究

用转化生长因子β_1(transforming growth factor β_1,TGFβ_1)作用于入胃腺癌细胞(SGC-7901),48小时后收集细胞爬片。用抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的单抗和免疫组化SABC法及图像分析,发现TGFβ_1作用的胃癌细胞EGFR表达量(107.943±0.202)低于对照细胞(114.298±0.475),差异显著(P<0.05),研究结果提示,TGFβ_1对胃癌细胞增殖的抑制作用可能与其影响EGFR表达数量有关。     

白毛夏枯草水提取物对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析白毛夏枯草水提取物对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响。方法 分别采用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml的白毛夏枯草水提取物处理BGC823细胞,未做处理的BGC823细胞作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移、侵袭,Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、髓细胞白血病因子(Mcl)-1及剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3蛋白水平。结果 随着白毛夏枯草水提取物浓度的增加,BGC823细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax及Cleaved Caspase-3蛋白水平依次显著升高,BGC823细胞迁移数、侵袭数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Mcl-1蛋白水平依次显著下降,均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 白毛夏枯草水提取物可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进胃癌细胞凋亡。     

PGM5-AS1抑制miR-4728-5p对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义(PGM5-AS)1对微小RNA(miRNA)-4728-5p的靶向调控及对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中PGM5-AS1表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染pcDNA3.1-PGM5-AS1或anti-miR-4728-5p。采用噻唑蓝(MTT)法检测SiHa细胞的增殖,平板克隆形成实验分析细胞的克隆形成,Transwell小室法评估细胞的侵袭迁移,Western印迹测定细胞中细胞增殖抗原Ki67、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证PGM5-AS1对miR-4728-5p的靶向调控。qRT-PCR检测miR-4728-5p的表达。结果 宫颈癌组织中PGM5-AS1的表达量明显减少(P<0.05)。转染pcDNA3.1-PGM5-AS1显著降低SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白水平,并明显提高E-cadherin蛋白...     

新型蛋白酶体抑制剂MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨新型蛋白酶体抑制剂MLN2238对胃癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901,按照MLN2238终浓度0、25、50、75、100 nmol/L分为5组,处理24、48、72 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测各孔吸光值并计算存活率以评价MLN2238对胃癌细胞的增殖抑制作用;处理48 h后经膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双标或PI标记后,采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果相同作用时间(24、48或72 h)下,随着MLN2238浓度的增加,MLN2238处理后BGC-823、SGC-7901细胞的存活率降低(P0.05);相同MLN2238浓度(25、50、75或100 nmol/L)情况下,除100 nmol/L MLN2238作用24 h和48 h的BGC-823细胞存活率间无统计学差异外(P0.05),随MLN2238作用时间的延长,MLN2238对BGC-823、SGC-7901细胞的增殖抑制作用也基本呈递增趋势(P0.05);MLN2238处理BGC-823、SGC-7901细胞48 h后,除75、100 nmol/L MLN2238作用BGC-823细胞各周期细胞比例的差异无统计学意义外(P0.05),随MLN2238浓度的增加,BGC-823、SGC-7901细胞的凋亡率、G0/G1期细胞比例均升高,S、G2/M期细胞比例降低,且MLN2238的促凋亡效应和促细胞周期G0/G1期阻滞作用呈浓度依赖性(P0.05)。结论 MLN2238可抑制胃癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,MLN2238的以上作用与作用时间和作用浓度有关。     

硒代甲硫氨酸对胃癌细胞蛋白表达谱的影响

目的:分析硒代甲硫氨酸对胃癌AGS细胞蛋白表达谱的影响.方法:应用Hoechst荧光染色法及流式细胞术观察硒代甲硫氨酸对胃癌AGS细胞凋亡的影响;应用双向凝胶电泳技术分析硒代甲硫氨酸对胃癌AGS细胞蛋白表达的影响.结果:胃癌AGS细胞在含硒代甲硫氨酸培养液中培养5 d后,部分细胞的细胞核内出现凋亡小体,含硒代甲硫氨酸培养液中AGS细胞的凋亡率显著高于正常培养液组(53.98%±9.88% vs 15.76%±9.03%,P＜0.01).双向电泳技术筛选出12个表达差异的蛋白.结论:硒代甲硫氨酸可以影响胃癌AGS细胞蛋白的表达.这些差异表达的蛋白可能与胃癌细胞凋亡有关.     

腹腔液中CD44和整合素β1表达与胃癌腹膜转移的关系

目的探讨腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移的关系.方法收集50例胃癌患者的腹腔液标本,用RT-PCR法检测其中CD44和整合素β1 mRNA的表达,同时行腹腔液细胞学(PLC)检查.按病灶浸润深度、浆膜类型、PLC检查结果、腹膜转移情况和TNM分期分组,比较不同组之间CD44和整合素β1 mRNA的表达水平.结果腹腔液CD44 mRNA表达水平与浆膜类型(F=4.59,P＜0.05)、腹膜转移有关(t=2.655,P＜0.05),与PLC检查(t=3.126,P＜0.01)和TNM分期密切相关(t=3.453,P＜0.01);腹膜转移组的整合素β1 mRNA表达明显高于未转移组的水平(t=2.241,P＜0.05).结论腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移相关因素及TNM分期密切相关,检测其水平有助于估计胃癌病程进展和患者预后,对腹膜转移的早期诊断也有一定价值.     

miRNA-216b通过靶向调控Beclin1对顺铂诱导的胃癌细胞自噬及凋亡的影响

目的:探究miRNA-216b(miR-216b)对顺铂处理的胃癌细胞的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞系SGC7901/DDP,将SGC7901/DDP细胞随机分为空白对照组、agomir-NC+ oe-NC组、agomir-miR-216b...     

腹腔液中CD44和整合素β1表达与胃癌腹膜转移的关系

目的:探讨腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移的关系.方法:收集50例胃癌患者的腹腔液标本,用RT-PCR法检测其中CD44和整合素β1 mRNA的表达,同时行腹腔液细胞学(PLC)检查.按病灶浸润深度、浆膜类型、PLC检查结果、腹膜转移情况和TNM分期分组,比较不同组之间CD44和整合素β1 mRNA的表达水平.结果:腹腔液CD44 mRNA表达水平与浆膜类型(F=4.59,P<0.05)、腹膜转移有关(t=2.655,P<0.05),与PLC检查(t=3.126,P<0.01)和TNM分期密切相关(t=3.453,P<0.01,);腹膜转移组的整合素β1 mRNA表达明显高于未转移组的水平(t=2.241,P<0.05).结论:腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移相关因素及TNM分期密切相关,检测其水平有助于估计胃癌病程进展和患者预后,对腹膜转移的早期诊断也有一定价值.     

miR-139-5p靶向PAK5基因通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

背景胃癌(Gastric cancer,GC)是人类消化系统最常见的癌症类型,发生局部或全身转移是导致患者预后差的主要原因.微小RNA(microRNA,miRNA)是胃癌发生发展的重要调控因子.然而,miR-139-5p对胃癌细胞侵袭和转移的影响及机制尚不清楚.目的探究miR-139-5p靶向p21活化的激酶5(PA...