PTEN和LKB1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 分析PTEN和LKB1在非小细胞肺癌中的表达特点以及二者的相关性。方法 收集74例非小细胞肺癌患者蜡块,以免疫组织化学法检测PTEN及LKB1的表达;通过分析临床相关指标与PTEN及LKB1表达的相关性,探讨PTEN及LKB1表达的临床意义。结果 PTEN和LKB1的表达阳性率分别为47.3%和70.3%,LKB1表达阴性样本多伴有PTEN阴性表达,统计学分析发现LKB1与PTEN表达呈正相关（ r=0.287, P=0.017）;PTEN和LKB1在非小细胞肺癌中的表达与性别、年龄、病理类型无关（ P均>0.05）,PTEN表达缺失与淋巴结转移( P=0.017)、侵袭( P=0.008)及临床分期( P=0.019)相关,LKB1的表达缺失与肺癌侵袭( P=0.043)和临床分期( P=0.003)相关;联合PTEN和LKB1表达情况分析,同时为阳性表达的肺癌病例出现淋巴结转移和/或侵袭的比例低于同时为阴性表达者。结论 PTEN和LKB1的表达与非小细胞肺癌的发生及恶性进展有关,且可能存在协同作用;检测两个蛋白表达可作为非小细胞肺癌预后的判断依据。     

LKB1蛋白表达在非小细胞肺癌中的预后意义研究

目的探讨LKB1蛋白表达情况对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的预后意义。方法应用免疫组化方法检测70例非小细胞肺癌患者中LKB1蛋白的表达情况。结果 LKB1蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。LKB1蛋白表达的阳性率在高分化肺癌(83.87%)、无淋巴结转移的肺癌(88.46%)和Ⅰ～Ⅱ期肺癌(75.00%)中的表达阳性率高于中-低分化肺癌(51.28%)、有淋巴结转移的肺癌(50.00%)和Ⅲ期肺癌(47.06%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LKB1蛋白在非小细胞肺癌中的低表达可能提示肺癌的预后不良。     

抑癌基因LKB1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 通过检测新发现的抑癌基因LKB1在乳腺癌中表达情况,探讨其与乳腺癌变的关系及其预后意义。方法 用Western印迹法比较不同乳腺癌细胞株LKB1基因的表达情况,构建LKB1基因表达质粒,转染至该基因低表达的细胞株,研究细胞生长数度及凋亡相关蛋白表达的改变;以Western印迹法检测LKB1基因在121例乳腺癌手术标本中的表达,结合临床病理资料分析该基因在乳腺癌中的临床意义。结果 MDA-MB-435细胞中未能检测到LKB1基因的表达,转染LKB1基因表达质粒后,MDA-MB-435细胞的生长受到明显抑制;细胞周期分析,G1期细胞的比例18．3％增至40．9％;细胞中细胞周期相关因子细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的含量下降,而其抑制因子p21的含量升高;单因素分析表明LKB1低表达与高复发率(P=0．002)及总生存率差(P=0．008)显著相关。结论 在LKB1基因缺表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞中,转入并表达该基因能明显抑制其乳腺癌细胞的生长;其作用与p21介导的G1期阻滞有关;LKB1基因低表达与乳腺癌预后差显著相关。     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1基因沉默对肺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(LKB1)基因表达沉默对肺癌细胞生物学行为的影响.方法 以RNA干扰技术建立LKBI表达抑制的细胞模型,Westem blotting方法检测干扰LKB1蛋白表达的效果;通过绘制生长曲线和克隆形成试验检测LKB1基因沉默肺癌细胞的增殖变化;应用Annexin V/PI双染法和流式细胞技术分析LKB1基因沉默后肺癌细胞周期的变化及其凋亡和坏死情况.结果 成功建立了LKB1基因沉默肺癌细胞模型,稳定表达LKB1-siRNA细胞的LKB1蛋白表达被明显抑制,LKB1基因沉默后肺癌细胞增殖速度明显加快,但其早期与晚期凋亡率较对照组相比并无显著变化.结论 LKB1基因的下调表达对95D细胞部分恶性生物学行为的发生具有一定的促进作用.     

LKB1通过AMPK信号通路抑制Hela细胞增殖的机制研究

目的：观察LKB1基因对Hela细胞株的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法：体外培养LKB1表达缺失的Hela细胞株,脂质体介导LKB1质粒转染,G418抗性筛选获得稳定表达株。研究细胞周期的变化,Ｗestern blot检测磷酸化Rb、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、AMPKα（adenosine monophosphate activated protein kinase α）及磷酸化AMP－Kα的蛋白表达,分析AMPK抑制剂Compound C对PCNA表达的影响。结果：成功构建稳定表达LKB1的Hela细胞系,与空质粒对照组细胞相比,LKB1蛋白稳定表达后使Hela细胞G1期比例明显增加而S期比例减少,Rb蛋白的磷酸化水平、PCNA表达水平明显降低,AMPKα的磷酸化水平明显增强,当用Compound C抑制AMPK活性后,PCNA蛋白表达水平明显提高。结论：在Hela细胞中,LKB1通过激活AMPK信号通路,抑制Rb蛋白的磷酸化,使细胞周期停滞在G1期,抑制细胞增殖。     

应用SSCP-PCR技术研究非小细胞肺癌p53基因突变

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) p5 3基因突变与临床病理及预后的关系 ,评价检测 p5 3基因点突变作为基因标记物在判断患者预后中的意义 .方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术 ,检测 31例NSCLC及5例肺良性病变石蜡包埋标本 p5 3基因的点突变 .结果 :肺癌组织 p5 3基因点突变率为 4 8% (15 / 31) ,肺良性病变未检出该基因突变 ,两组相比有显著性差异 .各组织学类型肺癌p5 3基因 5～ 8外显子点突变检出频率为 :鳞状细胞癌 9例(9/ 16 ) ,腺癌 3例 (3/ 10 ) ,肺泡细胞癌 1例 (1/ 3) ,大细胞癌 2例 (2 / 2 ) .肺腺癌组织 p5 3基因点突变率比鳞状细胞癌低 .Ⅲ Ⅳ期肺癌点突变率明显高于Ⅰ期肺癌 (P <0 .0 5 ) ,p5 3基因点突变与临床分期有关 ,在低分化肺癌其突变频率明显高于分化好的肺癌 (高分化和中分化肺癌 ) ,p5 3基因突变率与年龄、性别、肿瘤大小和组织学类型无相关性 .结论 :应用PCR SSCP技术检测 p5 3基因突变能够反映肺癌的进展情况、临床分期及肿瘤分化程度 ,是判断肺癌预后的重要生物学指标 .     

肺癌中LKB1蛋白表达的研究

目的研究肿瘤抑制基因LKB1蛋白在肺癌中的表达。方法应用免疫组化方法检测肿瘤抑制基因LKB1蛋白在34例肺癌组织中的表达并结合肺癌的临床病理学特征进行分析。27例非肿瘤患者肺组织作对照。结果实验组34例LKB1蛋白阳性表达的平均光密度值为(0.273±0.056),对照组27例平均光密度值为(0.369±0.022),正常对照组表达强度显著高于实验组,两者比较差异有统计学意义(t=5.177,P=0.000);在肺癌中,LKB1蛋白的表达与肿瘤的恶性程度有显著的相关性(t=2.364,P=0.033),并且和淋巴结阳性与否关系密切(t=2.181,P=0.047)。结论 LKB1蛋白的表达下降可能在肺癌的发生、发展、转移中起重要作用,有可能成为肺癌诊断的参考指标和基因治疗的重要靶点。     

肺癌K-ras基因点突变的研究

目的 :探讨肺癌发生的分子遗传学机理 ,了解肺癌中K ras基因的突变情况。方法 :采用聚合酶链式反应一单链构象多态性 (PCR SSCP)结合银染技术 ,对 3 2例肺癌组织及其相应的癌旁组织中K ras基因第 12、13、61位密码子的突变情况进行检测。结果 :肺癌组织中K ras基因总突变率为 2 5 % ( 8/3 2 ) ,其中腺癌突变率为 40 % ( 4 /10 ) ,鳞癌突变率为 2 3 % ( 3 /13 ) ,大细胞肺癌突变率为 3 3 % ( 1/3 )。小细胞癌突变率为 0 ( 0 /6) ,相应的癌旁组织突变率为 3 1% ( 1/3 2 )。结论 :K ras基因突变与肺癌发生发展有关。     

LKB1调控Peutz-Jeghers综合征错构瘤及肠上皮细胞中的上皮间质转化

目的 探讨LKB1在Peutz-Jeghers综合征(PJS)错构瘤及肠上皮细胞中对上皮间质转化(EMT)调控作用.方法 采用免疫组化法检测20例PJS错构瘤标本及10例正常肠道组织中LKB1、ecadherin、vimentin蛋白的表达.Masson三色染色法分析胶原纤维沉积.选取NCM460人肠上皮细胞株,慢病毒转染后建立LKB1敲低及空载体稳定表达株.以CCK8实验和transwell迁移实验评价LKB1敲低对细胞增殖、迁移的影响.运用WB、qPCR、免疫荧光检测LKB1敲低后对细胞中EMT相关蛋白ecadherin、vimentin、ncadherin、snail、slug表达的影响.结果 与正常肠组织相比,PJS错构瘤中LKB1和ecadherin蛋白表达下降,而vimentin蛋白表达增加.Masson染色提示错构瘤中胶原纤维沉积增多,沉积面积扩大.与空载体组相比,LKB1敲低的NCM460细胞增殖、迁移能力明显增强(P<0.01),细胞中ecadherin表达降低,ncadherin、vimentin、snail、slug表达增高.结论LKB1可能通过调控EMT从而影响PJS错构瘤的形态改变及纤维化进程,提示EMT可能成为PJS治疗的新靶点.     

长链非编码RNA SBF2-AS1 在肺癌组织中的表达及作用研究

目的 探讨长链非编码RNA SBF2-AS1 在肺癌组织中的表达及对非小细胞肺癌细胞系A549 及 H1299 细胞增殖、凋亡等的影响。方法 51 例肺癌组织标本（包括癌组织及癌旁组织）,实时荧光定量聚合酶链 反应检测SBF2-AS1 的表达量,分析其与临床病例特征的关系;用siRNA 干扰A549 及H1299 细胞SBF2- AS1 的表达,MTT 及流式细胞术分别检测其对细胞增殖、凋亡及周期的影响。结果 SBF2-AS1 在癌组织中的 表达量是癌旁组织的5.05 倍;且其表达水平与淋巴结转移、临床病理分期有密切关系。A549 及H1299 细胞 中SBF2-AS1 的表达量被siRNA 干扰下降后,细胞的增殖减慢,凋亡增加,细胞周期被阻滞于G1/G0 期。结论 SBF2-AS1 在肺癌组织中高表达,可成为新的潜在的肺癌预测、预后判断的分子标志物及治疗靶点。     

探究抑癌基因LKB1与ARID1A在胃癌中的表达及预后相关性

临床发生率最高的消化道恶性肿瘤之一为胃癌,有较高发生率与死亡率。临床治疗晚期胃癌主要采用化学疗法,尚未研发出类型多样且疗效确切的靶向治疗药物。因胃癌具有强效异质性,为此临床十分关注寻找关联于胃癌发生、预后的分子标志物。胃癌发生发展可能有独特的分子生物学背景,在胃癌组织中LKB1及ARID1A有70~80%的突变率,故而临床十分关注这两个因子在胃癌中的作用及对预后的影响,现综述如下。     

LKB1 在鼻咽癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的 研究鼻咽癌（NPC）组织中LKB1 的表达,分析其与临床病理因素、化疗敏感性及预后的关系。 方法 采用免疫组织化学EnVision 二步法检测74 例NPC 组织标本中LKB1 的表达,根据其表达水平将标本 分为LKB1 低表达组和LKB1 高表达组。采用ATP 生物荧光肿瘤体外药敏检测技术体外检测NPC 患者肿瘤 细胞对8 种常见化疗药物的敏感性。结合患者随访资料,分析LKB1 表达与临床病理因素、化疗敏感性及预 后的关系。结果 在NPC 组织中,LKB1 蛋白在细胞核和细胞质均有表达,呈棕黄色;LKB1 高、低表达组间 患者年龄、病理组织学类型、TNM 分期及临床分期比较,差异无统计学意义（P >0.05）,仅性别比较差异有 统计学意义（P <0.05）。NPC 细胞对8 种化疗药物敏感性不同（P <0.05）。在8 种化疗药物中,仅LKB1 低表 达组的. 环磷酰胺耐药率高于LKB1 高表达组（P <0.05）,其余差异无统计学意义（P >0.05）。LKB1 低表达组 患者的死亡率高于高表达组（P <0.05）。两组患者转移和复发率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。LKB1 低表达组患者的总生存率低于高表达组（P <0.05）。两组间无进展生存率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。 结论 LKB1 表达水平与NPC 患者的生存率有关,并且可能与环磷酰胺的耐药有关。     

伊立替康联合顺铂治疗晚期肺泡细胞癌的护理

肺泡细胞癌是腺癌的一种亚型,女性较多,发展缓慢,EGFR突变率低,早期发现手术治疗预后良好.但其临床表现不同于其他肺癌,易于误诊,往往就诊时已经为晚期.近年来伊立替康联合顺铂在治疗非小细胞肺癌中显示出优势,疗效确切,用药剂量可以耐受[1].但由于伊立替康独特的作用机理,使得该药在取得疗效的同时也出现了一系列不良反应.特别是延迟性腹泻,急性胆碱能综合征更须引起护理的特别关注.2009年10月～2010年10月应用伊立替康联合顺铂治疗晚期肺泡细胞癌患者21例.通过精心护理使患者顺利完成化疗,取得满意疗效.现报告如下.     

Scorpions-ARMS法检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变及其临床预测价值的研究

目的应用蝎形扩增阻滞突变系统（Scorpions—ARMS）检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变及其临床预测价值的研究。方法应用蝎型扩增阻滞突变系统（Scorpions—ARMS）检测非小细胞肺癌外周血中EGFR基因第18、19、20及21外显子突变,统计分析EGFR基因突变的相关因素。结果50例非小细胞肺癌患者中,EGFR基因的突变率为30％（15／50）。结果EGFR基因的突变率47．4％（女性）明显高于19．4％（男性）。非吸烟患者EGFR突变率45．5％高于吸烟患者17．9％,差异有统计学意义（P=0．035）。在非小细胞肺癌患者中,腺癌患者EGFR突变率40．6％明显高于非腺癌患者11．1％,差异有统计学意义（P=0．029）。结论Scorpions—ARMS是检测血清游离DNA中EGFR基因突变的可靠有效方法。     

基于数据库LKB1突变肺腺癌DNA异常甲基化位点构建的预后风险模型

目的 构建DNA甲基化相关的肝激酶B1(LKB1)突变肺腺癌预后风险模型。方法 下载并分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中RNA和甲基化测序数据。筛选甲基化调控显著影响预后的差异表达基因,构建预后风险模型,将LKB1突变肺腺癌患者分为高风险组和低风险组,并进行相关功能学分析。结果 筛选出3个低甲基化高表达的预后相关基因并构建LKB1突变肺腺癌的预后风险模型。多因素COX回归分析表明,Risk score可作为独立预测因子(HR>2,P<0.001)。受试者工作特征曲线证实,Risk score比其他临床病理特征有更好的生存预测能力。功能分析表明,高风险LKB1突变肺腺癌患者促癌通路激活、免疫细胞浸润程度明显高于低风险患者。结论 在LKB1突变肺腺癌中发掘了3个因异常甲基化而表达失调的分子标记物,据此构建的预后风险模型可以准确筛选LKB1突变肺腺癌患者中的高风险人群,提供生存预测,为LKB1突变肺腺癌的分子机制研究及临床预后分析提供新思路。     

非小细胞肺癌的分子起源和表达谱

在肿瘤所导致的死亡中,非小细胞肺癌是最常见的原因之一。该病难以早期发现且预后不佳。随着基因组学、表观遗传学和蛋白质组学的研究进展,预测肺癌发生风险、判断预后、选择个体化的最佳预防和治疗模式成为可能。本文对非小细胞肺癌发生、发展和预后的分子研究进展予以综述。     

晚期非小细胞肺癌与TKI的治疗观察

目的分析EGFR基因与非小细胞肺癌疗效的相关性研究。方法选取2014年2月至2016年5月期间我院收治已确诊的非小细胞肺癌100例患者为研究对象,运用ADx-ARMSEGFR基因突变检测试剂,并对100例未给予过Gefitinib治疗的非小细胞肺癌患者进行检测,分析EGFR基因外显子18,19,20以及21突变的情况。结果非小细胞肺癌患者的总EGFR基因突变率为49%;EGFR基因突变在肺鳞状细胞癌的突变率显著低于肺腺癌组织中的基因突变率(P0.05),且EGFR基因在男性患者突变率为显著低于在女性患者突变率(P0.05)。结论我国非小细胞肺癌中特别是肺腺癌患者存在较高的EGFR基因突变率,将患者的的临床病理特征与EGFR基因突变中的外显子21和外显子19突变结合能够成为评价TKI治疗非小细胞肺癌患者的重要标志之一。     

联合检测支气管肺泡灌洗液中DPC4和LKB1突变诊断肺部孤立块影的价值

目的 探讨联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中DPC4和LKB1突变对鉴别肺部X线孤立块影良恶性的价值.方法 选择X线检查有肺部孤立块影的患者49例,其中非小细胞肺癌(NSCLC)患者39例,非癌对照组10例,用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法检测BALF中DPC4第8～11外显子、LKB1第1～9外显子的突变情况.结果 39例NSCLC患者中DPC4缺失3例,突变12例,LKB1突变10例,1例NSCLC患者同时发生DPC4和LKB1突变,非癌对照组均未检测出抑癌基因缺失或突变.联合检测DPC4和LKB1诊断NSCLC的灵敏度(61.5%,24/39)较单独检测DPC4或LKB1显著增高(P ＜0.05).结论 用PCR-SSCP技术检测BALF中DPC4或LKB1基因突变可作为鉴别肺部孤立块影良恶性的辅助指标之一,有助于肺癌的早期诊断和分期,可能具有一定的临床应用价值,联合检测两种基因较单独检测灵敏度更高.     

外泌体在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌在全世界已成为威胁健康和生命的第一位恶性肿瘤,非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的85%,因其发病隐匿,早期症状不明显,大多数发现时已是晚期,预后较差,故造成严重的家庭、社会医疗及经济的负担,所以NSCLC的早期诊断对临床治疗及预后有重要影响,近年来已发现一种膜性微囊泡是由多泡体与细胞膜融合后释放至细胞外,命名外泌体(exosomes),在体内大多数细胞均可产生,NSCLC分泌的外泌体与肿瘤微环境中的其他细胞相互作用,具有改变肿瘤病理过程、促使血管生成、转移和介导免疫等生物学功能,外泌体在肿瘤方面研究火热,故本文将从外泌体在非小细胞肺癌的发生发展及诊断方面进行综述。     

非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的临床意义

目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中ｐ＾１６基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板ＤＮＡ量的银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测４０例非小细胞肺癌手术切除标本中ｐ＾１６基因第２外显子。结果 ４０例中有１３例发生纯合缺失,３例发生突变,缺失及突变率为４０％,其缺失及突变率与肺癌的临床病理分期有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ＾１６基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要