RNA干扰HIF-1α对低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的:观察低氧状态下食管鳞癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,探讨HIF-1α对Eca109细胞放射敏感性的影响及其可能的分子机制。方法:以常氧组为对照。氯化钴(cobalt chloride,CoCl_2)模拟肿瘤低氧微环境,用RT-PCR检测体外低氧状态下Eca109细胞中HIF-1α和EGFR mRNA表达水平,免疫细胞化学法检测HIF-1α和EGFR蛋白表达水平。Western blot检测RNAi沉默HIF-1α对EGFR蛋白表达的影响、采用流式细胞术检测HIF-1α沉默后,Eca109细胞经放射线照射后的凋亡情况,评价其放射敏感性的变化。结果:与常氧组比较,低氧状态下,Eca109细胞中HIF-1αmRNA表达无明显变化(P0.05),HIF-1α蛋白表达增加。EGFR mRNA表达明显升高(P0.05),EGFR蛋白表达也相应增加。与未转染组和对照组比较,siRNA转染Eca109细胞可有效沉默HIF-1α蛋白在低氧状态下的表达(P0.05),EGFR蛋白的表达水平也明显下调(P0.05)。Eca109细胞在低氧状态下放射敏感性较常氧下明显降低(P0.05)。RNAi沉默HIF-1α可部分逆转低氧造成的Eca109细胞的放射耐受。结论:低氧可上调食管鳞癌Eca109细胞HIF-1α蛋白水平;HIF-1α增加Eca109细胞在低氧状态下的放射抗性,可能与HIF-1α上调EGFR mRNA及蛋白表达有关,有效抑制HIF-1α可增加Eca109细胞的放射敏感性。     

乏氧条件下HIF-1α介导Hela宫颈癌细胞的放射敏感性

目的:探讨乏氧条件下,乏氧诱导因子HIF-1α对Hela宫颈癌细胞放射敏感性的影响以及初步作用机制.方法:MTT法分析不同组别宫颈癌细胞存活分数,流式细胞法(FCM)检测各组细胞的凋亡变化,RT-PCR和Western blot分别检验各组宫颈癌细胞的HIF-1α、VEGF和p53的mRNA和蛋白表达情况,siRNA干扰HIF-1α对宫颈癌放射敏感性的影响,以及对VEGF、p53表达的影响.结果:乏氧条件下通过诱导肿瘤细胞HIF-1α的高表达途径,提高VEGF表达,抑制p53表达来降低Hela宫颈癌细胞的放射敏感性.HIF-1α的siRNA转染联合照射后,在乏氧条件下MTT法显示细胞存活率较非转染组明显下降,流式细胞仪法显示细胞凋亡率明显上升.同时干扰HIF-1 α后明显抑制VEGF的表达,提高p53的表达.结论:抑制HIF-1 α可能通过减少VEGF及增加p53来提高Hela宫颈癌细胞的放射敏感性.     

siRNA 沉默HIF-1α在缺氧状态下对食管鳞癌细胞VEGF表达的影响

 目的 观察体外乏氧培养条件下食管鳞癌细胞系EC9706中HIF-1α和VEGF的表达，探讨HIF-1α在低氧条件下对食管鳞癌血管生成的调控作用。方法 CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT-PCR、免疫组化法和免疫印迹法分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染EC9706细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果 低氧条件下，EC9706细胞HIF-1amRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而VEGFmRNA和蛋白的表达均显著升高。SiRNA转染EC9706后能够显著下调HIF-1α的基因表达，同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论 缺氧促使EC9706细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并通过转录激活VEGF的机制调控食管鳞癌血管生成。     

低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的： 观察三氧化二砷（As 2O 3）在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。 方法： CoCl 2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As 2O 3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As 2O 3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。 结果： 在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当（P>0.05）;而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱（P<0.05）。低氧下Eca109细胞周期出现G 0/G 1期阻滞、G 2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）,As 2O 3在低氧条件下可诱导G 2/M期阻滞、G 0/G 1期细胞比例减少。As 2O 3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As 2O 3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。 结论： 低氧条件下,As 2O 3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G 0/G 1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。     

姜黄素阻断NF-κB信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡的体外研究

背景与目的:活化的核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜黄素是否能够通过阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、抗凋亡产生影响。方法:Western blot法检测EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素(50μmol/L)培养不同时间后,pIκBα和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。在EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素培养72h,流式细胞仪检测凋亡细胞情况。MTT法检测姜黄素单独或与5-FU联合对细胞增殖的影响。结果:Western blot的结果显示,在姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和Bcl-2蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降。在单独使用姜黄素后,就可促进EC9706和Eca109细胞的凋亡(P<0.05);当与5-FU联合使用时,可明显提高EC9706和Eca109细胞对化疗药物的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。姜黄素与5-FU联合应用48h和72h,可明显抑制EC9706和Eca109细胞的增殖,与单独使用姜黄素或5-FU组相比,细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可以通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加细胞对5-FU的敏感性。     

手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法：用不同浓度的手霉素（10、20、40、80、120txmol／L）处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果：不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol／L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4．520％±1．035％、14．490％±1．707％、28．883％±4．299％、35．107％±2．276％、47．940％±8．126％,与对照组凋亡率（1．370％±0．028％）相比,差异均具有统计学意义（p均〈0．05）;且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2／M期细胞显著增多。结论：手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。     

HIF-1α与恶性肿瘤放疗敏感性关系的研究进展

恶性肿瘤中普遍存在的乏氧细胞降低了肿瘤细胞对放疗的敏感性。缺氧诱导因子-1α（hypoxia in-ducible factors-1 alpha ,HIF-1α）在乏氧细胞中特异性地高表达,其表达水平与肿瘤细胞的放疗敏感性呈负相关。放疗条件下的肿瘤组织存在乏氧区,而HIF-1α的表达影响着肿瘤细胞的增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢等方面,因此,研究HIF-lα与恶性肿瘤放疗敏感性的关系可为临床放射治疗提供参考,有助于提高放疗疗效和改善患者的预后。     

双反义腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究

目的:探讨双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响.方法:应用MTT法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率,观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA(Ad-ODCas)和Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响.结果:MTY法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P<0.05).以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P<0.05).流式细胞术结果显示感染了Ad-ODC-AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G1期.HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量均明显降低(P<0.05).TUNEL标记检测结果显示.Ad-ODC-AdoMet-DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P<0.05).结论:Ad-ODC-AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据.     

Effects of manumycin on proliferation and apoptosis of human esophageal carcinoma cell line Eca109

目的:探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制.方法:用不同浓度的手霉素(10、20、40、80、120μmol/L)处理Eca109细胞24、48和72 h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol/L的手霉素作用Eca109细胞48 h后的细胞凋亡率分别为4.520％±1.035％、14.490％±1.707％、28.883％±4.299％、35.107％±2.276％、47.940％±8.126％,与对照组凋亡率(1.370％±0.028％)相比,差异均具有统计学意义(P均＜0.05);且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2/M期细胞显著增多.结论:手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径.     

金花茶抑制人食管鳞癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的初步探讨金花茶花朵中的天然成分对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用及其诱导细胞凋亡的情况。方法用不同浓度的金花茶花朵的水提取物作用于人食管鳞癌Eca109细胞。采用台盼蓝染色法检测金花茶花朵的水提取物对Eca109细胞活力的影响,应用透射电镜观察金花茶花朵的水提取物对癌细胞亚结构变化的作用。结果金花茶花朵的水提取物可抑制人食管鳞癌Eca109细胞的生长,其作用呈浓度和时间依赖性关系,并且能诱导细胞凋亡。结论金花茶花朵的水提取物能抑制人食管鳞癌细胞的增殖,并可诱导其凋亡,从而为金花茶作为食管癌的化学预防制剂提供实验依据。     

RNA干扰沉默乏氧诱导因子-1a对紫杉醇诱导食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响

目的:探讨食管癌乏氧耐药机制,观察乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)对紫杉醇诱导的人食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响。方法:用CoCl2化学乏氧法建立乏氧模型;应用Western blot测定RNA干扰前后,乏氧条件下HIF-1α蛋白表达的变化;应用原位末端标记TUNEL法及AnnexinⅤ/PI双标记法检测RNA干扰前后紫杉醇对乏氧培养细胞EC9706细胞凋亡的影响。结果:EC9706细胞经75μmol/L的CoCl2作用4 h后,即可诱导HIF-1α蛋白表达。RNA干扰技术能明显抑制乏氧诱导的HIF-1α蛋白表达。相同的乏氧条件下,转染HIF-1α-siRNA组细胞的凋亡率与未转染组或转染control-siRNA组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乏氧条件下HIF-1α蛋白对紫杉醇诱导的EC9706细胞凋亡具有抑制作用。以HIF-1α为新的靶点可望提高食管癌的治疗水平。     

NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

CHK1和CHK2 shRNA转染对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响

目的 观察RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响。方法 CHK1和CHK2基因各选择4段序列分别设计合成短发卡状RNA（shRNA）,分别与pENTR^TM／U6质粒连接后转染Eca109食管癌细胞。采用Western blotting检测CHK1和CHK2蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,流式细胞仪检测5Cy照射后细胞周期变化,克隆法检测5Cy照射后细胞存活率。结果 CHK1和CHK2基因各成功建立4个序列的shRNA连接质粒,转染Eca109细胞后均使其蛋白表达降低。用抑制效果最好的CHKI和CHK2shRNA转染Eca109细胞后,其mRNA表达下降;在转染后72h,子一代细胞CHK1和CHK2蛋白仍明显降低,并使5Cy照射后1h的CHK2-T68磷酸化水平降低,而对CHK1-S345磷酸化水平无明显影响。CHK1 shRNA转染的Ecal09细胞在5Gy照射后12h时,明显减轻G2期阻滞程度;转染后72h和5Cy照射后12h,子一代Eca109细胞G2期阻滞仍明显低于单纯5Gy照射组;而CHK2shRNA转染不影响照射后C2期阻滞。CHK1和CHK2shRNA转染可降低5Gy照射后Eca109细胞存活率。结论 shRNA转染对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制效应至少可以持续3d,且可传递给子代细胞;CHK1 shRNA转染可以减轻Eca109细胞照射后G2期阻滞,增加放射敏感性。     

RNA干扰HIF-1α表达对白血病K562细胞高三尖杉酯碱敏感性的影响

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(1aypoxia-indueible factor-lα, HIF-1α)是细胞对缺氧应答的一个重要的转录因子,目前对缺氧条件下血液系统恶性肿瘤,尤其是白血病生物学改变的研究相对较少.本研究探讨应用RNA干扰技术抑制HIF-1α在慢性粒细胞白血病细胞系K562中的表达后,细胞对化疗药物高三尖杉酯碱(homoharringtonine, HHT)敏感性的变化.方法:利用shRNA表达载pSilencer 2.1-U6 hygro构建RNA干扰载体,在K562细胞中抑制HIF-1α的表达,潮霉素筛选获得阳性克隆.应用实时定量RT-PCR技术研究缺氧(1% O2分压)条件下,抑制HIF-1α的表达对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase, PGK)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,Glut-1)和P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)表达的影响.应用MTT比色法观察抑制HIF-1α表达后,K562细胞对HHT敏感性的变化.结果:转染后HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达均被抑制,缺氧条件下HIF-1α的靶基因VEGF、PGK、Glut-l、P-gp等表达明显下调.HIF-1α被干扰后的K562细胞对HHT的敏感性增加.结论:抑制K562细胞的HIF-1α表达可以抑制血管生成和糖代谢相关基因表达,并且增加对HHT的敏感性.     

芬太尼对食管鳞癌细胞株Eca109增殖及凋亡的影响

目的:探讨不同浓度的芬太尼对食管鳞癌细胞株Eca109增殖和凋亡的影响。方法:选用不同浓度的芬太尼（0.5、5、50、500ng/ml）干预细胞。采用四甲基偶氮唑蓝（MMT）法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V/PI 双染色法测定细胞凋亡。结果:各组芬太尼孵育Eca109细胞24h后,对细胞的增殖无明显影响;孵育48h后,与对照组相比,各浓度组均能显著抑制细胞的增殖（P＜0.05）,且呈浓度和时间依赖性。芬太尼孵育Eca109细胞48h,与对照组相比,各浓度组均能诱导早期凋亡和晚期凋亡,呈浓度依赖性（P＜0.05）。结论:芬太尼可抑制食管鳞癌细胞株Eca109的增殖并诱导凋亡。     

RNA干扰Nrf2表达对食管癌生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰核因子E2相关因子2（Nrf2） 对食管癌细胞生物学行为的影响。方法 建立RNA干扰下调Nrf2 表达的Eca-109食管癌细胞（Si-Nrf2）,并构建阴性对照组细胞（Si-control）。MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室实验及Western blotting法检测下调Nrf2表达对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移、细胞放射敏感性及相关蛋白表达的影响。结果 转染48h 后,Si-Nrf2细胞中Nrf2蛋白相对表达量为0.209±0.013,Si-control细胞中则为0.852±0.077,两者差异具有统计学意义（P＜0.05）。与Si-control细胞比较,下调Nrf2 表达水平后的Si-Nrf2细胞的增殖能力明显减弱、细胞凋亡增多、侵袭转移能力降低,放疗敏感性增高,血红素加氧酶（HO-1）、抗凋亡蛋白Bcl-2、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达量明显下调（P＜0.05）。结论 Nrf2可能通过调控HO-1、Bcl-2及MMP-9蛋白表达参与食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭转移及放疗敏感性这一生物学过程。     

RNA干扰HIF-1α增强人肺腺癌SPCA-1细胞放射敏感性的研究

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子1（HIF-1）增强人肺腺癌SPCA-1细胞的放射敏感性。方法构建干扰HIF-1α质粒pSUPER-HIF-1α，采用荧光定量RT-PCR、Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α的变化，用成克隆实验观察乏氧时RNA干扰HIF-1α对放射的增敏作用。结果在常氧和乏氧的状态下，RNA干扰HIF-1α引起mRNA的表达水平分别下降64％和76％；在乏氧的状态下，蛋白的表达下降。转染pSUPER-HIF-1α后的细胞存活曲线的D0值为2．5Gy，转染空白质粒细胞和空白对照细胞的D0值分别为5、0Gy和5、1Gy，增敏比为2．1。结论RNA干扰HIF-1α可以增加SPCA-1细胞对放射的敏感性。     

辣椒素联合5-Fu抑制食管鳞癌细胞的增殖及侵袭

目的 探讨辣椒素联合5-Fu对食管鳞癌Eca109和EC9706细胞增殖、耐药的影响.方法 将EC9706和Eca109细胞分为对照组、辣椒素组、5-Fu组和联合用药组,MTT法检测72 h后细胞的增殖情况及辣椒素联合应用不同浓度5-Fu对食管鳞癌细胞增殖的影响.结果 MTT实验表明,辣椒素与5-Fu联合应用可明显抑制Eca109和EC9706细胞的增殖,与单独使用辣椒素或5-Fu组相比,细胞存活率显著降低;对照组和辣椒素组细胞的存活率均随着5-Fu浓度的增加而下降,但在同一浓度,辣椒素与5-Fu联合应用可明显提高食管鳞癌细胞对化疗药的敏感性.结论 辣椒素与5-Fu联合应用,可以增强食管鳞癌细胞对化疗药的敏感性,因此辣椒素有望成为食管癌治疗中的辅助用药.     

人食管癌细胞缺氧培养条件下HIF-1α和VEGF表达的研究*

探讨人低分化食管鳞癌细胞系EC- 109、CaEs-17在缺氧条件下,缺氧诱导因子-1 α 及血管内皮生长因子随缺氧时间不同,在基因水平和蛋白水平上的表达。方法:1）体外培养人低分化食管鳞癌细胞系EC- 109、CaEs-17,利用免疫荧光染色方法观察细胞在缺氧培养条件下HIF-1 α 和VEGF蛋白表达情况。2）提取总RNA,逆转录为cDNA ,并进行实时PCR ,观察细胞在不同缺氧时间,hif- 1 α 及vegf 基因表达峰度及相互关系。结果:1）EC- 109、CaEs-17细胞在缺氧培养条件下HIF-1 α 、VEGF蛋白表达增加。2）EC- 109、CaEs-17细胞在缺氧培养条件下hif- 1 α 、vegf 基因表达上调。3）EC- 109、CaEs-17细胞在缺氧条件下vegf 表达峰度上调滞后于hif- 1 α 表达,自缺氧培养8h 起,hif- 1 α 基因表达峰度持续高于vegf 基因表达。结论:缺氧环境是诱导人食管癌细胞缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达上调的因素之一,vegf 基因表达滞后于hif- 1α基因表达。      

双反义腺病毒载体Ad—ODC—AdoMetDOas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究

目的：探讨双反义腺病毒载体（Ad—ODC—AdoMetDCas）对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法：应用M1Tr法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率，观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响；采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用，采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA（Ad—ODCas）和Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响，同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。结果：MTT法实验表明，Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P〈0．05）。以Ad—ODC—AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞，可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P〈0．05）。流式细胞术结果显示感染了Ad—ODC—AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G。期。HPLC结果显示，食管癌Eca109细胞感染Ad—ODC—AdoMetDCas后，细胞内3种多胺含量均明显降低（P〈0．05）。TUNEL标记检测结果显示，Ad—ODC—AdoMet—DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P〈0．05）。结论：Ad—ODC—AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长，促进细胞凋亡，为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据。