DIG—DNA探针检测弓形虫核酸

应用ＰＣＲ技术，对弓形虫Ｂ１基因的部分序列进行体外扩增，获得２０７ｂｐ的特异性核酸片段，并通过地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记作为探针，通过斑点杂交试验检测弓形虫核酸。实验表明，该探针能与ＲＨ、ＳＨ１、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＬ１株弓形虫核酸特异性杂交，最低检测量为２５ｐｇ纯化弓形虫核酸。在急性感染弓形虫的小鼠，该探针可于感染后第２天（２４ｈ后），从组织（肝、脾、及肾）中检测到弓形虫核酸，第３天（４８ｈ后）可从部分小鼠（１／５）外周血中检测到弓形虫核酸。表明该探针具有特异、敏感、快速、实用的特点，可望用于弓形虫病的早期诊断，适用于基层及流行病学调查。     

随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫株的研究

本文运用随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫株，获得较满意结果。实验根据Ｍ１３噬菌体已知部分核酸序列，自行设计并合成了３条引物，在一定条件下扩增ＲＨ，ＺＳ１、ＺＳ２、ＳＨ－１等４株弓形虫基因组ＤＮＡ，扩增产物经２％琼脂糖凝胶电泳分带。扩增带型显示４株受检的弓形虫株具有株间差异。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR）,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。     

组织学三联征和聚合酶链反应在弓形虫淋巴结炎病理诊断中的应用

目的 经典的组织学三联征诊断法和荧光原位杂交(PCR)法在提高石蜡包埋组织弓形虫淋巴结炎确诊率中的价值.方法 收集本院1999年4月至2009年9月诊断的46例符合组织学三联征形态改变的石蜡包埋淋巴结组织,采用半嵌套式PCR方法 对提取DNA进行弓形虫基因组的片段扩增;另选取30例组织中可见三联征中的二个或一个特征的病例作为对照.结果 组织学三联征组PCR阳性率为76.1%(35/46),对照组阳性率仅为10.0%(3/30,P<0.01);组织学三联征诊断弓形虫淋巴结炎的灵敏度为92.1%(35/38),特异度为71.1%(27/38);PCR法的阳性预测值为76.1%(35/46),阴性预测值为90.0%(27/30).结论 经典的组织学三联征对于诊断弓形虫淋巴结炎的特异性很强,但敏感性较低,且易漏诊部分非典型病例.在组织形态改变的基础上结合半嵌套式PCR对刚地弓形虫基因片段的检测可大大提高检出敏感性和准确性.     

组织学三联征和聚合酶链反应在弓形虫淋巴结炎病理诊断中的应用

目的 经典的组织学三联征诊断法和荧光原位杂交(PCR)法在提高石蜡包埋组织弓形虫淋巴结炎确诊率中的价值.方法 收集本院1999年4月至2009年9月诊断的46例符合组织学三联征形态改变的石蜡包埋淋巴结组织,采用半嵌套式PCR方法 对提取DNA进行弓形虫基因组的片段扩增;另选取30例组织中可见三联征中的二个或一个特征的病例作为对照.结果 组织学三联征组PCR阳性率为76.1%(35/46),对照组阳性率仅为10.0%(3/30,P<0.01);组织学三联征诊断弓形虫淋巴结炎的灵敏度为92.1%(35/38),特异度为71.1%(27/38);PCR法的阳性预测值为76.1%(35/46),阴性预测值为90.0%(27/30).结论 经典的组织学三联征对于诊断弓形虫淋巴结炎的特异性很强,但敏感性较低,且易漏诊部分非典型病例.在组织形态改变的基础上结合半嵌套式PCR对刚地弓形虫基因片段的检测可大大提高检出敏感性和准确性.     

聚合酶链反应标记轮状病毒地高辛素探针的初步应用

目的为探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术标记的地高辛素（ＤＩＧ）探针的特异性和敏感性。方法用聚合酶链反应技术制备地高辛素标记的人类轮状病毒（ＨＲＶ）ｃＤＮＡ探针，经ｃＤＮＡ－ＲＮＡ斑点杂交。结果该探针具ＨＲＶ特异性，可检出１０ｐｇ的ＲＮＡ。应用该项技术检测了１２０份婴幼儿腹泻粪样标本，其阳性率为６５％，明显高于ＰＡＧＥ方法（４９．１％）的阳性率。结论ＰＣＲ方法直接制备地高辛素标记的ｃＤＮＡ探针方便、快速、特异性好、标记率高。     

组织学三联征和聚合酶链反应在弓形虫淋巴结炎病理诊断中的应用

目的 经典的组织学三联征诊断法和荧光原位杂交(PCR)法在提高石蜡包埋组织弓形虫淋巴结炎确诊率中的价值.方法 收集本院1999年4月至2009年9月诊断的46例符合组织学三联征形态改变的石蜡包埋淋巴结组织,采用半嵌套式PCR方法 对提取DNA进行弓形虫基因组的片段扩增;另选取30例组织中可见三联征中的二个或一个特征的病例作为对照.结果 组织学三联征组PCR阳性率为76.1%(35/46),对照组阳性率仅为10.0%(3/30,P<0.01);组织学三联征诊断弓形虫淋巴结炎的灵敏度为92.1%(35/38),特异度为71.1%(27/38);PCR法的阳性预测值为76.1%(35/46),阴性预测值为90.0%(27/30).结论 经典的组织学三联征对于诊断弓形虫淋巴结炎的特异性很强,但敏感性较低,且易漏诊部分非典型病例.在组织形态改变的基础上结合半嵌套式PCR对刚地弓形虫基因片段的检测可大大提高检出敏感性和准确性.     

多聚酶链反应检测恙虫病立克次体核酸

作者设计合成一对恙虫病立克次体ｓｔａ５８基因的ＤＮＡ引物，分别从恙虫病立克次体ｋａｒｐ、Ｇｉｌｌｉａｍ及ＣＭＹ株基因组中扩增出１ｋｂ片段，普氏及莫氏立克次体、西伯利亚立克次体和贝氏柯克斯体则不能，表明该引物为恙虫病立克次体种特异。以含ｓｔａ５８基因片段的重组质粒为模板作敏感性鉴定，表明ＰＣＲ可检测到１０ｐｇ的靶ＤＮＡ。用该引物作ＰＣＲ检测实验感染恙虫病立克次体的小鼠血、腹水及脾标本均获满意结果。     

聚合酶链反应快速诊断结核病的应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立了扩增结核杆菌特异重复序列ＩＳ６１１０部分基因的方法。对９种抗酸分枝杆菌、３种普通菌进行检测，结果仅人型结核杆菌、牛型结核杆菌及ＢＣＧ扩增出１２３ｂｐ特异性条带，ＰＣＲ产物经ＳａｌⅠ酶切后产生７０ｂｐ与５３ｂｐ两个片段。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性达１０ｆｇＤＮＡ或５个菌体。应用ＰＣＲ检测了１０９份结核临床标本，其总阳性率为７２．５％，明显高于抗酸染色涂片（２．８％）与细菌培养（９．２％）的阳性率（Ｐ＜０．００１）。ＰＣＲ的检出率也较ＥＬＩＳＡ法检测抗ＰＰＤ－ＩｇＧ的阳性率（６３．３％）为高，但尚无统计学差异（ｐ＞０．０５），但是ＥＬＩＳＡ检测抗体有１９．０％的假阳性。研究表明，ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的方法。     

套式PCR检测HBV与HCV垂直传播的比较研究

用套式ＰＣＲ法检测了２７例ＨＢｓＡｇ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＢＶ ＤＮＡ，阳性３例（１１．１％），同时检测了７例抗－ＨＣＶ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＣＶ ＲＮＡ及抗－ＨＣＶ，结果ＨＣＶ ＲＮＡ无１例阳性，抗－ＨＣＶ全部阳性，因此认为婴儿体内抗－ＨＣＶ是一种由母体被动获得的抗体，不能作为ＨＣＶ感染的客观指标。     

用PCR技术产前诊断人巨细胞病毒感染

用ＥＬＩＳＡ法筛选早孕妇女血人巨细胞病毒ＩｇＭ（ＨＣＭＶ－ＩｇＭ），在孕１２￣２０周用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测其羊水中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，对胎儿巨细胞病毒感染作出产前诊断。在３８４例孕妇中，筛选出血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性２６例为实验组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为３４．６２％；从２５８例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阴性中选出２０例为对照组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为１０．０％，两组比较有显著性差异（     

原位PCR技术检测石蜡包埋肝组织中HBV DNA

采用原位PCR技术对22例石蜡包埋肝组织中HBV DNA进行检测,并与提取组织DNA PCR技术及原位杂交技术进行比较。结果表明,22例标本经原位PCR检测有9例为阳性;经提取组织DNA PCR检测有7例阳性,两者敏感性相近,符合率达80％;经原位杂交检测有4例阳性,其敏感性只及原位PCR的44％。提示原位PCR是项快速、敏感及特异性较高的检测技术。     

应用PCR技术检测恙螨体内恙虫病立克次体动态和经卵传递的研究

本文应用聚合酶链反应技术检测恙虫病立克次体实验感染的恙螨体内立克次体的动态变化，通过人工腹腔接种而感染的恙螨成虫，恙虫病立克次体至少能在其体内生存３６０天和经卵传递４代；通过未食幼虫叮咬病小鼠而感染的恙螨，经饱蚴、若蛹、若虫、成蛹和成虫阶段，恙虫病立克次体检测均呈阳性，至少能在成虫期体内生存２７０天和经卵传递１代。     

PCR－小卫星DNA指纹图在异基因造血干细胞移植植活指标监测中的应用

为了解异基因骨髓移植治疗某些遗传及恶性血液性疾病的植活监测指标，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增具有高度多态性的小卫星ＤＮＡ３３．１、３３．６位点，联合地高辛标记的位点特异性寡核苷酸探针杂交的方法，以小卫星ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，对６例异基因骨髓移植，１例脐血移植进行植活指标监测，６例获得供者源性细胞植活证据。结果显示：小卫星ＤＮＡ指纹图个体特异性强，可作为监测异基因造血干细胞移植植活的可靠格标，尤其是同血型，同性别，ＨＬＡ配型表型全相合的移植；该方法程序简单，操作方便，灵敏度高，可达０．５％，最早获得植入证据的时间是＋１５天，仅需模板ＤＮＡ１００ｎｇ；如果扩增位点增加，可提高个体识别能力。     

聚合酶链反应诊断新生儿轮状病毒无症状感染的研究

选用与Ａ组人类轮状病毒（ＨｕｍａｎＲｏｔａｖｉｒｕｓ，ＨＲＶ）编码ＶＰ７蛋白的第９（或８）基因片段中保守序列互补的两个引物，建立检测Ａ组ＨＲＶＲＮＡ的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，扩增产物片段约３４２ｂｐ。经检测３５例无腹泻症状新生儿１２９份粪便标本，并与聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）方法进行比较，结果前者检出ＨＲＶ核酸７７份（５９．６９％），而后者则检出４９份（３７．９８％），ＰＣＲ结果可能比较接近新生儿排泌轮状病毒的实际情况。     

多聚酶链式反应检测FMR－1基因突变

采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）结合银染或非同位素杂交的方法，对１５例脆性Ｘ染色体阳性的患者和携带者进行了检查。结果显示，该方法可以检出ＦＭＲ－１正常扩增带、前突变与完全突变，与细胞遗传学检查相比，ＰＣＲ检测更为快捷与准确。