MK801对结肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

摘要： 目的 探究 N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型 1（NMDAR1）在结肠癌细胞 HT29 和 SW116 中的表达, 以及 NMDAR1 拮抗剂 MK801 对 HT-29 和 SW116 细胞生长抑制、 凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学法检测 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 细胞表面 NMDAR1 的表达; 应用噻唑蓝（MTT）比色法测定 62.5、 125.0、 250.0、 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对于 HT-29 和 SW116 细胞增殖作用的影响; 应用流式细胞术检测 2 000 μmol/L 的 MK801 对 HT29 和 SW116 细胞凋亡的影响; 应用细胞划痕实验检测 50 μmol/L MK801 对于结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 迁移能力的影响。结果 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 均表达 NMDAR1, 且主要表达于细胞质中; 各浓度的 MK801 对 HT-29 细胞, 以及浓度为 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对 SW116 细胞的生长抑制作用具有时 间效应关系, 24、 48 及 72 h 各 MK801 浓度组对 HT-29 和 SW116 细胞的抑制率随浓度升高整体呈增强趋势, 但抑制 率不呈明显的剂量效应关系; MK801 具有促进 HT-29 和 SW116 细胞凋亡的作用, 且主要表现诱导细胞早期凋亡; MK801 可抑制 HT-29 和 SW116 细胞迁移。结论 NMDAR1 在结肠癌细胞胞质中表达, 且 NMDAR1 拮抗剂 MK801 具有抑制肿瘤细胞生长、 迁移, 促进其早期凋亡的作用, 有望成为新一代抗肿瘤药物。     

红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究

目的 红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究。方法 体外培养人结肠癌 LoVo 细胞,在不同浓度(0.5、1.0、1.5 g·L-1)的红花多糖处理后,分别在干预24、48、72 h后采用 MTT 比色法测定红花多糖对LoVo细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI 双标法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平及检测Caspase-3活性,Western-blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况;应用Transwell细胞侵袭试验检测红花多糖对结肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响。结果 MTT 检测显示红花多糖能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞的生长、増殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜显示红花多糖能使结肠癌LoVo 细胞出现典型凋亡特征;流式细胞仪分析结果提示红花多糖具有调节人结肠癌LoVo细胞周期的功能。RT-PCR实验和Western-blot实验结果显示随着红花多糖浓度增加可促进LoVo细胞中Bax、Caspase-3 mRNA表达,并抑制 Bcl-2 mRNA表达。Transwell侵袭实验示随着红花多糖浓度增加,LoVo 细胞侵袭能力降低。结论 红花多糖能显著促进人结肠癌 LoVo 细胞凋亡,可使结肠癌LoVo 细胞增殖受到抑制,侵袭能力减弱,调节细胞周期,红花多糖的抗肿瘤的生物学效应可能与Bax、Bcl-2、Caspase-3 的信号通路有关。     

慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的 shRNA 沉默肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结肠癌 SW480 细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带 PRL-3 shRNA 的慢病毒载体转染结肠癌SW480 细胞,建立稳定沉默 PRL-3 的细胞株,real-time PCR 检测转染后 PRL-3 mRNA 的相对表达水平。采用 MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用 Transwell 侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果 稳定沉默 PRL-3 的细胞株构建成功,转染组 PRL-3mRNA 的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）,空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 shRNA 转染 SW480 细胞 72 h 后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染 120 h时最明显（P＜0.05）。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降（P＜0.05）。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加（P＜0.05）。结论 结肠癌 SW480 细胞转染 PRL-3 shRNA 可减少 PRL-3 的表达,有效抑制 SW480 细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3 可能成为治疗结肠癌的靶基因。     

环氧合酶-2抑制剂对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:体外观察非甾体药物选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡影响。方法:采用噻唑蓝法观察NS-398对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,DNA梯状电泳检测凋亡的发生。Western印迹法检测K562细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶Caspa-se-3和COX-2的表达。结果:NS-398呈剂量依赖性的方式抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。并呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,一方面增高Go/G1期细胞比例,另一方面降低S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比差异具显著性(P<0.05)。NS-398干预的K562细胞Caspase-3的蛋白表达均显著升高,而COX-2的蛋白表达降低,并呈浓度依赖性。结论:体外NS-398能有效的发挥抗K562细胞白血病效应,对白血病细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,这可能与抑制COX-2表达及上调Caspase有关。     

darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂dar-bufelone对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。方法MTT法测定darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR法分析SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2 mRNA的表达;免疫细胞化学法检测胃癌SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2蛋白质的表达。结果dar-bufelone以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞增殖;1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone作用72 h后,细胞凋亡率分别为(30.3±2.1)%、(23.0±2.0)%和(15.0±1.5)%,均高于对照组(0.6±0.1)%(P<0.01);1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,5-LOX和COX-2 mRNA及其蛋白质表达均减少(P<0.05)。结论环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂darbufelone对人胃癌SGC-7901细胞株有抑制增殖、诱导凋亡的作用。     

木香内酯对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨木香内酯（micheliolide,MCL）对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及潜在机制。方法 通过腹腔注射致癌剂氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）和饮用致炎剂葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）构建AOM/DSS小鼠结肠癌模型,分别给予尾静脉注射2.5 mg·kg^-1顺铂、MCL 0,10,20,50 mg·kg^-1,连续30 d记录小鼠存活率。取肿瘤组织,称肿瘤质量。免疫组化检验小鼠肿瘤组织Ki67和胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达水平,Western blotting检测小鼠肿瘤组织PTEN蛋白表达量;结肠癌细胞系SW620分别用含10 µmol·L^-1顺铂、MCL 0,2.5,5,10 µmol·L^-1培养基培养,或转染siPTEN后在MCL 0和10 µmol·L^-1培养基培养。BrdU细胞增殖试验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞增殖抗原（Ki67、PCNA）、细胞凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax）及PTEN蛋白表达量。结果 与模型组相比,MCL增加小鼠生存率,减轻肿瘤质量,增加抑瘤率,上调PTEN蛋白表达,减少Ki67阳性细胞,增加caspase-3阳性细胞（P<0.05或P<0.01）;与对照组相比,MCL降低结肠癌细胞BrdU阳性细胞百分比,下调Ki67和PCNA的表达量,增加细胞凋亡率,下调Bcl-2的表达量,上调Bax、cleaved caspase-3和PTEN的表达（P<0.05或P<0.01）;抑制PTEN表达能逆转MCL对SW620细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论 MCL抑制结直肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这与上调PTEN表达有关。     

叶酸缺乏对人肺腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探讨叶酸缺乏对人肺腺癌细胞H1299细胞形态、增殖、凋亡及迁移的影响。方法将人肺癌细胞株H1299分别置于有、无叶酸培养基中(对照组与实验组)连续培养12 d;光学显微镜下观察叶酸对细胞形态变化的影响;采用平板克隆实验、划痕实验评价叶酸对H1299细胞增殖能力及迁移能力的影响;流式细胞术检测2组细胞周期及凋亡变化情况。结果叶酸缺乏可影响H1299细胞形态;与对照组比较,无叶酸培养6 d后H1299细胞增殖能力明显下降,迁移能力减弱,凋亡率显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于S期。结论叶酸缺乏可抑制人肺腺癌细胞株H1299的增殖及迁移能力,造成细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡及转录活化因子6通路的影响

目的探究利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及对转录活化因子 6(ATF6)通路的影响。方法按照利拉鲁肽浓度 0、10、100、1 000 nM培养人结肠癌 HCT116细胞 24、48、72 h,人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测作用后细胞中 21KD蛋白(Bax)半胱胺酸蛋白酶 ?3(Caspase?3)及 ATF6通路蛋白 ATF6 p50、CCAAT?增强子结合蛋白( C/EBP)同源蛋白( CHOP)的表达水平。结果、与对照组相比,利拉鲁肽各浓度间增殖率均有显著变化( P＜0.05)同一时间点随着利拉鲁肽浓度的增加, 0、10、100、1 000 nM各组细胞的增殖率分别为( 97.16±35.67)%、(81.69±33.37)%、(76.12,±30.23)%、(70.65±28.89)%;(86.17±33.98)%、(58.68±26.77)%、(39.74±10.67)%、(30.17±9.24)%;(83.82±31.19)%、(38.77±10.19)%、(22.98±6.78)%、(16.63±6.12)%,均呈下降趋势。同一浓度随着时间推移, 24、48、72 h各时间点细胞增殖率分别为( 97.16±35.67)%、(86.17±33.98)%、(83.82±31.19)%;(81.69±33.37)%、(58.68± 26.77)%、(38.77±10.19)%;(76.12±30.23)%、(39.74±10.67)%、(22.98±6.78)%;(70.65±28.89)%、(30.17±9.24)%、(16.63± 6.12)%。不同浓度利拉鲁肽作用于 HCT116细胞 72 h后, 10、100、1 000 nM浓度的利拉鲁肽组的 G2/M期细胞比例较 0 nM组显著减少( P＜0.05),且随着浓度的增加 G2/M期细胞呈现下降趋势。 0、10、100、1 000 nM利拉鲁肽作用下细胞凋亡率分别为(9.06±0.98)%、(10.45±1.12)%、(13.89±1.54)%、(56.08±14.33)%,依次升高( P＜0.05)。与 0 nM组比较, 10、100、1 000 nM浓度的利拉鲁肽组细胞的凋亡率依次显著升高( P＜0.05);与 10 nM组比较, 100、1 000 nM组凋亡率依次显著升高( P＜0.05);与 100 nM组比较, 1 000 nM组凋亡率显著升高( P＜0.05)。蛋白质印迹法结果显示, 10、100、1 000 nM利拉鲁肽作用后细胞中 Bax蛋白表达量分别为( 0.69±0.13)、(0.93±0.24)、(1.19±0.25)显著升高( P＜0.05)1 000 nM组 Bax蛋白表达量显著高于 10 nM组( P＜0.05),100、1 000 nM两组间差异无统计学意义( P＞005); Caspase?3蛋白表达量分别为( 0.26±0.06)、(0.76±0.15)、(1.15±0.16)依次显著升高(P＜0.05),100、1000 nM组Caspase?3蛋白表达量显著高于 10 nM组(P＜0.05),1 000 nM组Caspase?3蛋白表达量显著高于 100 nM组( P＜0.05); ATF6 p50蛋白表达量分别为( 0.69±0.11)、(0.96±0.09)、(1.20±0.08); CHOP蛋白表达量分别为( 0.27±0.06)、(0.79±0.08)、(0.99±0.09)均显著升高( P＜0.05)100、1 000 nM组 ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于 10 nM组( P＜0.05)1 000 nM组 ATF6 p50、 CHOP 蛋白表达量显著高于100 nM组( P＜0.05)。结论 利拉鲁肽对结肠癌 HCT116 细胞具有增殖抑制和凋亡促进作用,且呈时间?剂量的依赖性,其可能通过激活 ATF6通路发挥促凋亡作用。     

齐留通对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

[摘要]目的 探讨齐留通阻断5-脂氧合酶（5-LOX）代谢途径对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将胰腺癌细胞SW1990与不同浓度齐留通（浓度分别为40，30，20，10，5，3和1 μg·mL-1）共同孵育,以不加齐留通的细胞为对照组。采用MTT法检测作用不同时间后齐留通对SW1990细胞的抑制率；倒置显微镜观察齐留通浓度为20 μg·mL-1时细胞形态变化；将SW1990胰腺癌细胞与不同浓度齐留通（浓度分别为80，40，20，10和5 μg·mL-1）作用24 h，对照组加入等量培养基和溶媒，流式细胞仪(FCM)AnnexinⅤ/PI双染法检测各组SW1990细胞增殖指数， FCM检测细胞周期。结果 培养48 h后，40和30 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用明显强于对照组，且均差异有极显著性（均P<0.01）；培养72 h后，40，30和20 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌细胞的抑制较对照组显著增强（均P<0.01）。其他检测结果亦表明，齐留通可抑制SW1990细胞增殖，促进细胞凋亡，该作用呈浓度和时间依赖性。与对照组相比, 20 μg·mL-1齐留通作用18 h后G0/G1期细胞所占比例较对照组明显增高（P<0.01）,G2/M期、S期细胞所占比例降低。结论 齐留通能抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，使细胞DNA合成受抑制,产生G1期阻滞。     

小白菊内酯对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察小白菊内酯（PN）对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响并分析其可能机制。方法不同浓度PN作用于结肠癌HT-29细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Western Blot法检测核转录因子（NF）-B亚单位pso、环氧化酶（cox-2）蛋白表达的改变;ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）浓度。结果PN能诱导结肠癌细胞的凋亡,且随PN浓度的增加,结肠癌HT-29细胞的凋亡率增加;而NF-κB亚单位p50、COX-2蛋白表达减少,同时PGE2浓度降低。结论PN可诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,其机制可能与其能下调NF-κB、COX-2蛋白表达并减少PGE2生成有关。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

TRAP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过Oncomine数据库分析TRAP1在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达,Western blot检测TRAP1在结直肠癌组织及其配对癌旁黏膜组织、LOVO、HT29、HCT116、RKO、SW480、NCM460细胞中的表达及干扰TRAP1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT通路的影响,CCK-8检测TRAP1对结直肠癌细胞增殖的影响,平板克隆实验检测TRAP1对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测TRAP1对细胞周期及凋亡的影响。结果生物信息学分析显示TRAP1在结直肠癌中的表达高于正常肠黏膜组织,Western blot结果显示TRAP1在结直肠癌组织和细胞中蛋白表达水平均高于正常组织和细胞(P<0.05),干扰TRAP1的表达可以显著抑制SW480细胞的增殖及克隆形成能力(P<0.05),并且将细胞阻滞在G0/G1期,增加细胞凋亡(P<0.01),细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低,凋亡相关蛋白Cleaved-Casp...     

芍药苷对人上皮性卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其机制研究

目的 观察芍药苷（Paeoniflorin,PF）对人上皮性卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 培养人上皮性卵巢癌HO8910细胞,随机分为对照组、芍药苷低剂量组、芍药苷中剂量组、芍药苷高剂量组。芍药苷低、中、高剂量组分别在加入0.5、1与2 mg·mL^-1芍药苷的DMEM培养液中培养48 h。采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测HO8910细胞增殖抑制率;TUNEL染色法检测细胞凋亡率;细胞划痕实验检测HO8910细胞迁移率;免疫蛋白印迹技术（Western blot）分析核因子-κB（NF-κB) p56、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,芍药苷对HO8910细胞增殖、迁移率有明显的抑制作用并促进其凋亡（P<0.05）,这种作用呈现剂量依赖性;芍药苷处理组细胞内caspase-3表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,Bcl-2、核因子-κB p56表达水平较对照组明显降低（P<0.05）,且呈现剂量依赖性（P<0.05）。结论 芍药苷可明显抑制HO8910细胞的增殖,诱导其凋亡;其机制部分可能与阻断核因子-κB通路有关。     

四丁基丙二胺对人MG63骨髓瘤细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

目的分析新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutylpropanediamine,TBP)对人骨髓瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法 MTT法用于分析细胞增殖,流式细胞分析用于细胞周期和凋亡细胞鉴定,琼脂糖凝胶电泳用于分析DNA片段化,Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白的表达水平,Transwell技术用于分析细胞的迁移能力。结果TBP明显抑制MG63细胞的增殖和迁移能力,抑制效应呈时间和剂量依赖性。流式细胞分析发现,TBP干扰细胞周期,导致G1和G2期细胞比例升高,但S期细胞比例明显下降,同时凋亡细胞数量大幅增加。TBP处理后,细胞染色体DNA出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象,细胞质中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。结论 TBP具有抑制人骨髓瘤MG63细胞增殖的药理活性,其机制与抑制细胞周期和诱导细胞凋亡有关,提示TBP具有用于临床骨髓瘤治疗的潜在价值。     

甲氨喋呤对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的　观察甲氨喋呤 (MTX)对体外培养的血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法　体外培养兔胸主动脉血管平滑肌细胞 ,在培养基中加入不同浓度的MTX ,采用细胞计数及检测细胞周期的方法观察MTX对细胞增殖的影响 ,采用细胞刮片的方法观察MTX对细胞迁移的作用 ,采用检测DNA片断化的方法观察细胞凋亡现象。结果　①MTX在 2 5～ 10 0nmol·L-1的浓度范围内呈剂量依赖性地抑制VSMC增殖。② 2 5nmol·L-1及 5 0nmol·L-1MTX显著增加细胞周期中S期细胞的百分含量 ,减低G2 /M期细胞的百分含量 (P <0 0 5 ) ,10 0nmol·L-1MTX显著增加了G0 /G1期细胞的百分含量 (P <0 0 1)。③加入MTX的VSMC对血清刺激的迁移受到抑制。④ 10 0nmol·L-1及 2 0 0nmol·L-1的MTX作用于VSMC后 ,流式细胞仪检测亚二倍体的细胞数高于对照组 (P <0 0 1) ;DNA凝胶电泳可以见到梯形条带 ;TUNEL染色阳性细胞的百分数高于对照组 ,具有统计学差异 (P <0 0 1)。结论　甲氨喋呤能够抑制体外培养的血管平滑肌细胞增殖和迁移 ,并促进细胞凋亡。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物     

氯喹联合顺铂对结肠癌HCT116细胞的增殖和凋亡的影响

目的探讨氯喹(CQ)联合顺铂(DDP)对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT116细胞分组为16组:空白对照组(不加药物)、5个浓度(5,10,20,40,80μmol·L^-1)氯喹-1组至氯喹-5组,5个浓度(2,4,8,16,32μmol·L^-1)顺铂-1组至顺铂-5组和5个浓度(20μmol·L^-1氯喹+2,4,8,16,32μmol·L^-1顺铂)联合-1组至联合-5组,各组均培养24 h。用噻唑蓝法检测细胞的存活率,用PI单染流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡相关蛋白的表达水平(灰度值)。结果空白对照组、氯喹-1组至氯喹-5组、顺铂-1组至顺铂-5组和联合-1组至联合-5组于24 h的细胞存活率分别为(100.00±1.05)%,(99.65±1.98)%,(97.43±0.72)%,(83.88±0.51)%,(69.65±3.33)%,(51.87±0.49)%,(98.55±1.50)%,(92.33±0.50)%,(81.66±4.29)%,(70.41±0.50)%,(48.34±1.50)%,(78.61±4.37)%,(59.01±3.52)%,(37.23±0.57)%,(32.88±3.96)%和(21.09±2.57)%。空白对照组、氯喹-3组、顺铂-3组和联合-3组的细胞凋亡率分别为(1.63%±0.50%),(15.97%±1.40%),(24.83%±2.12%)和(47.23±4.29)%;这4组的Bcl-2相对表达量分别为1.11±0.01,0.92±0.03和0.73±0.08,0.46±0.07;这4组的Bax蛋白相对表达量分别为0.18±0.01,0.27±0.03,0.46±0.09和0.58±0.04。氯喹联合顺铂能显著减少抗凋亡Bcl-2蛋白的表达,并上调促凋亡Bax蛋白的表达。联合组与单用组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05);各给药组与空白对照组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氯喹可以增强顺铂对HCT116细胞的增殖抑制作用,同时可以增强顺铂诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax有关联。     

硫酸右旋糖苷对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

摘要： 目的 探讨硫酸右旋糖苷 （DS） 对人胃癌MGC-803细胞增殖、 集落形成和凋亡的影响及可能的机制。方法 培养人胃癌MGC-803细胞, 分为对照组 （PBS处理） 和实验组 （0.3%DS处理）; 应用EdU细胞增殖实验检测DS对胃癌MGC-803细胞增殖能力的影响; 平板克隆形成实验检测DS对胃癌MGC-803细胞集落形成能力的影响; AnnexinⅤ-PI双染流式检测细胞凋亡的变化; 蛋白质印迹法 （Western blot） 检测细胞不同时间点 （2、 8、 12、 24 h） EZH2、 Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果 EdU实验结果显示, 与对照组相比, DS明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖 （P＜0.01）。平板克隆形成实验结果表明, DS组集落形成能力较对照组显著降低 （P＜0.01）, AnnexinⅤ-PI双染流式结果显示, 实验组细胞凋亡率明显高于对照组 （P＜0.01）; Western blot结果表明, 实验组EZH2的表达较对照组明显下调 （P＜0.05）, Cleaved-caspase3的表达较对照组明显上调 （P＜0.05）。结论 DS能明显抑制人胃癌MGC-803 细胞增殖, 诱导凋亡, 其机制可能与抑制EZH2的表达有关。