褪黑素对PDGF诱导的肝星状细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨褪黑素对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞-T6(HSC-T6)JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将HSC-T6细胞分为6组:对照组、模型组、实验组(褪黑素1 nmol·L^-1、1μmol·L^-1、0.1 mmol·L^-1)、抑制剂组(AG490为JAK2/STAT3通路的抑制剂),MTT实验检测褪黑素对PDGF激活的HSC-T6细胞增殖的影响;免疫组化和Western blot检测褪黑素HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。结果与对照组比较,PDGF能明显激活HSC-T6细胞增殖,明显上调HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达;与模型组比较,褪黑素和抑制剂均可抑制PDGF激活的HSC-T6细胞增殖,显著下调p-JAK2、p-STAT3的表达。结论褪黑素可抑制PDGF诱导的HSC-T6的活化与增殖,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

JAK2/STAT3信号通路对大鼠脑缺血-再灌注后神经功能及凋亡蛋白的影响

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对大鼠脑缺血-再灌注后神经功能及凋亡蛋白的作用.方法 将72只SD大鼠随机均分为AG490组、模型组和假手术组.AG490组和模型组采用线栓法制备局灶性大脑中动脉阻塞模型,颈内动脉插线深度18～20mm,2h后拔出;假手术组颈内动脉插线深度控制在8～10 mm.AG490组腹腔注射JAK2特异性抑制剂AG490溶液4mL/kg,24 h后再腹腔注射AG490溶液4mL/kg.假手术组、模型组在相同时间点腹腔注射无菌生理盐水4 mL/kg.术后2h以及再灌注后6、12、24、72 h进行神经功能缺损评分,再灌注后6、12、24、72 h检测JAK2、STAT3、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 AG490组神经功能缺损评分在再灌注后24、72 h低于模型组(P＜0.01或P＜0.05).AG490组和模型组JAK2、STAT3、Bax、Bcl-2蛋白表达在再灌注后6、12、24、72 h均高于假手术组(P＜0.01),AG490组JAK2、STAT3、Bax蛋白表达低于模型组(P＜0.01),而AG490组Bcl-2蛋白表达高于模型组(P＜0.01).结论 大鼠脑缺血-再灌注后激活JAK2/STAT3信号通路,神经功能缺损严重,Bax、Bcl-2蛋白表达增加.AG490能抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,恢复缺损神经功能.     

JAK2/STAT3信号通路在胃癌发病机制中的作用及AG490干预研究

目的以重组人白介素-2(IL-2)作用于胃癌细胞系AGS,观察其对胃癌细胞生长增殖的影响;利用蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3(信号传导子与激活子3)的异常激活,研究JAK2/STAT3信号传导通路在胃癌发病中的作用。方法以重组人IL-2干预、四唑鎓盐(XTT)法检测胃癌细胞系AGS增殖活性;以特异性抑制剂AG490抑制JAK通路,XTT法检测细胞增殖活性,并检测干预前后JAK蛋白、STAT3蛋白、p-STAT3蛋白表达水平。结果重组人IL-2可呈浓度依赖性抑制AGS细胞增殖,JAK特异性抑制剂AG490可呈浓度依赖性抑制AGS细胞增殖,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),AG490可显著抑制JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结论 JAK2-STAT3信号传导通路可能参与了早期胃癌的生物学行为。     

枸杞多糖和AG490 联用对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响研究

目的　探讨枸杞多糖和AG490 联用对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响。方法　CCK8 实验检测5、10、20、40、80 mg/L枸杞多糖及6.25、12.5、25、50、100 μmol/L的AG490 作用于人宫颈癌HeLa 细胞24、48、72 h 后细胞的增殖情况,计算IC50 值;根据IC50 值选择最佳的枸杞多糖和AG490 作用浓度;将试验分为对照组、枸杞多糖组、AG490 组、枸杞多糖+AG490组,CCK8 试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 检测Cleaved Caspase 3、JAK2、STAT3、p-STAT3 蛋白表达。结果　枸杞多糖和AG490 均能显著抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性（P<0.01）,选择40 mg/L枸杞多糖和70 μmol/L AG490 进行后续研究;枸杞多糖组、AG490 组、枸杞多糖+AG490 组细胞抑制率、细胞凋亡率、Cleaved Caspase 3 蛋白表达均显著高于对照组,JAK2、p-STAT3 蛋白表达显著低于对照组（P<0.01）;枸杞多糖+AG490 组细胞抑制率、细胞凋亡率、Cleaved Caspase 3 蛋白表达显著高于枸杞多糖组和AG490 组,JAK2、p-STAT3 蛋白表达显著低于枸杞多糖组和AG490 组（P<0.01）。结论　枸杞多糖和AG490 均能抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖,促进细胞凋亡,二者联用对细胞增殖和凋亡的影响强于单独使用枸杞多糖和AG490。     

miRNA-21与JAK2-STAT3通路在心肌缺血后处理保护心肌中的相互影响*

【摘要】目的 观察miRNA-21在缺血后处理心肌保护机制中的作用,并探讨其与JAK2-STAT3通路在心肌缺血后处理保护心肌机制中的相互影响。方法 将健康雄性成年Wistar大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血后处理组（PostC组）、缺血后处理+miRNA-21抑制物处理组（PostC+antagomiR-21组）和缺血后处理+AG490组（PostC+AG490组）。原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡指数;Western blot法检测总STAT3（t-STAT3）及磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白水平;荧光实时定量（qRT）-PCR检测心肌组织miRNA-21表达水平。结果 与I/R组相比,PostC组再灌注后心肌细胞凋亡指数显著减少,miRNA-21表达水平及STAT3磷酸化水平显著上调。使用antagomiR-21可显著削弱PostC心肌保护作用。PostC+antagomiR-21组与PostC组相比,STAT3的磷酸化水平显著降低。PostC+AG490组与PostC组比较,STAT3的磷酸化水平及miRNA-21表达均显著降低。结论miRNA-21在PostC心肌保护机制中发挥调控作用。在后处理适应性机制中STAT3与miRNA-21可能存在某种回路调控机制。     

吴茱萸碱调控人结肠癌HCT-116细胞中JAK2/STAT3信号通路的机制研究

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对人结肠癌HCT-116细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响。方法EVO诱导人结肠癌HCT-116细胞2、4、6 h后,Hoechst法检测细胞核凋亡的形态学改变;6μmol·L-1的EVO作用于HCT-116细胞2、4和6 h,不同浓度的AG490作用于HCT-116细胞48 h,6μmol·L-1的EVO和50μmol·L-1的AG490分别诱导HCT-116细胞以及两药联合诱导HCT-116细胞6 h后,运用蛋白质印迹法检测各组细胞中JAK2、pJAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白表达量。结果镜下观察EVO诱导后的细胞核浓缩聚集,染色质边缘化,并出现染色质碎裂成块,形成凋亡小体等形态学改变。Western blot结果显示:EVO可以明显下调HCT-116细胞内p-STAT3的表达;AG490可以抑制JAK2/STAT3信号通路的激活;EVO对JAK2/STAT3信号通路中p-STAT3蛋白的表达抑制效果较AG490更明显,且两药联合应用后抑制效果进一步增强。结论EVO对人结肠癌HCT-116细胞的抗肿瘤活性有可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活来发挥的。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨通痹胶囊治疗类风湿关节炎的作用机制

目的观察通痹胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠JAK2/STAT3信号通路及相关炎性因子的影响。方法以弗氏完全佐剂制备大鼠AA模型,通痹胶囊(375、750、1500 mg·kg-~1)灌胃治疗,HE染色观察组织病理形态学变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清及滑膜中白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠滑膜组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的蛋白表达。结果与正常组相比,造模后大鼠血清及滑膜组织中IL-6、IFN-γ含量明显升高,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3相对表达显著增多(P<0.01);与模型组相比,通痹胶囊能够有效降低大鼠血清及滑膜组织中IL-6、IFN-γ的含量,并抑制滑膜组织中JAK2、STAT3蛋白磷酸化(P<0.01)。结论通痹胶囊具有明显的抗炎作用,其治疗类风湿关节炎作用机制之一可能为抑制JAK2/STAT3信号通路的激活。     

白细胞介素-12抗NK/T细胞淋巴瘤的活性及其机制研究

目的研究白细胞介素-12(IL-12)的抗NK/T细胞淋巴瘤活性及机制。方法培养NK/T细胞淋巴瘤的YTS细胞株并分为对照组、IL-12组、NC siRNA组、JAK2 siRNA组、空白质粒组、JAK2表达质粒组,用含有0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 ng·mL^-1 IL-12的培养基处理或转染NC siRNA、JAK2 siRNA、空白质粒、JAK2表达质粒,检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期及细胞中JAK2及STAT3的表达;选择C57小鼠并建立移植瘤模型,随机分为对照组及IL-12组后,测定移植瘤质量及JAK2、STAT3的表达。结果在YTS细胞中,IL-12以及JAK2 siRNA能够抑制细胞活力、细胞周期及细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达,诱导细胞凋亡(P<0.05);转染JAK2的表达质粒能够使20.0 ng·mL^-1的IL-12抑制细胞活力、细胞周期、细胞中p-JAK2、p-STAT3表达及诱导细胞凋亡的作用减弱;在移植瘤小鼠中,IL-12干预后,移植瘤质量及移植瘤中p-JAK2、p-STAT3的表达均明显下降(P<0.05)。结论IL-12具有抗NK/T细胞淋巴瘤的活性且其机制与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。     

Therapeutic effect of 7, 3'-dimethoxy hesperetin on adjuvant arthritis in rats through inhibiting JAK2-STAT3 signal pathway

In our previous study, we have demonstrated that 7, 3'-dimethoxy hesperetin (DMHP), an active derivative of hesperidin, showed pro-apoptotic effect on synoviocytes in vitro. The present study was to investigate the potential therapeutic effect of DMHP on adjuvant arthritis (AA) in rat and its possible mechanisms. Freund's complete adjuvant was used to induce AA in rats. DMHP were administered intragastrically once a day from days 12 to 21 after AA induction. Secondary paw swelling, arthritis index, and pathological assessments were observed. IL-6 production in serum and IL-6 mRNA expression in synovium was detected by ELISA and real-time RT-PCR respectively. The expression of mRNA (JAK2, STAT3) and protein (JAK2, p-JAK2, STAT3, p-STAT3) in synovium were determined. We found that DMHP significantly inhibited hind paw swelling and arthritis index, and ameliorated pathological changes of ankle joint in AA rats. DMHP suppressed the level of IL-6 in serum and the expression of IL-6 mRNA in synovium of AA rats in a dose-dependent manner. DMHP apparently decreased mRNA expression of JAK2 and STAT3 as well as protein expression of p-JAK2 and p-STAT3 in the synovium of the AA rats. Correlation analysis indicated that p-JAK2 or p-STAT3 protein expression was highly correlated with joint damage severity. In conclusion, DMHP has a powerful therapeutic effect on AA in rats and its mechanisms might be partly related to inhibiting excessive activation of JAK2-STAT3 pathway.     

TAK-242通过调控JAK2/STAT3通路抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤炎症反应

目的：探讨Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠心肌缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）炎症反应的分子机制。方法：选用48只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组（sham）、模型组（I_30min /R_24h）、给药组[I/R+TAK-242（3 mg·kg^-1）]、干预组[I/R+TAK-242+AG490（15 mg·kg^-1）]。再灌注24 h后心脏超声检测小鼠心功能,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理改变,WB检测心肌JAK2/STAT3磷酸化水平,ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度。结果：与sham组比较,I/R组小鼠左心室收缩期直径（LVIDs）延长（P<0.01）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）显著降低（P<0.001或P<0.01）,心梗面积明显增加并出现心肌炎性浸润,心肌p-JAK2/p-STAT3表达明显升高（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6、IL-10、TNF-α和HMGB1水平显著升高（P<0.001或P<0.01）。与I/R组比较,TAK-242给药组小鼠LVIDs缩短（P<0.05）,LVEF和LVFS显著升高（P<0.01或P<0.05）,心梗面积缩小（P<0.01）,心肌炎症浸润减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.01或P<0.05）,血清IL-6和TNF-α水平明显下降（P<0.001或P<0.01）,而IL-10和HMGB1浓度进一步升高（P<0.01）。与TAK-242给药组比较,AG490干预可显著加强TAK-242治疗作用,包括心肌收缩功能增强,心梗面积缩小及炎性浸润程度减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低（P<0.05）,血清IL-6、TNF-α浓度下降而IL-10、HMGB1浓度升高（P<0.01或P<0.05）。结论： Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠I/R炎症反应与JAK2/STAT3信号通路失活有关。     

非诺贝特预处理对肾缺血再灌注损伤小鼠的保护作用

目的 探讨非诺贝特(fenofibrate,FENO)预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型。24只C57BL/6小鼠,♂,随机分为3个组(n=8),分别为假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注损伤模型组(IRI组)和非诺贝特预处理组(FENO组)。Sham组、IRI组和FENO组经不同方法处理后,经PAS染色观察肾脏病理学形态学变化,Western blot检测JAK2和 STAT3,p-JAK2,p-STAT3,Caspase 3表达情况。结果 与Sham组相比,IRI组血清肌酐和血尿素氮水平明显升高,病理检查可见肾脏内肾小管上皮细胞肿胀坏死变多、蛋白管型形成明显,还可观察到炎症细胞浸润增加显著;Western blot显示p-JAK2和p-STAT3,蛋白表达量均明显增加,JAK2和STAT3表达无明显变化,但Caspase 3 表达显著减少。与IRI组相比,FENO组血清肌酐和血尿素氮量明显下降,肾小管上皮细胞肿胀坏死减轻,炎症细胞浸润变少、蛋白管型形成减少,p-JAK2和p-STAT3表达明显降低,Caspase 3表达增加,JAK2和STAT3表达无明显变化。结论 FENO预处理小鼠可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活从而减少肾小管上皮细胞凋亡,进而减轻肾缺血再灌注损伤。