自贡市2007-2010年鼠伤寒沙门菌感染的脉冲场凝胶电泳分析

目的 回顾性分析自贡市2007-2010年分离到的沙门菌菌株,评估分子分型技术在食源性传染病暴发识别和处置中的价值。 方法 对自贡市2007-2010年从食品和腹泻患者中分离的沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验,用 BioNumerics软件分析菌株之间的相似度。 结果 55株沙门菌中,来源于2007-2008年的10个腹泻患者粪便和2008年的15个皮蛋中的25株鼠伤寒沙门菌菌株PFGE带型相似度为100%,均为P9带型。 结论 感染鼠伤寒沙门菌的皮蛋是导致自贡市2007-2008年10名患者腹泻暴发的污染源,为快速准确识别食源性疾病暴发并及时溯源、控制,应在食品安全监测中普及PFGE等分子分型技术。     

DiversiLab系统单增李斯特氏菌分子分型评估

目的用DiversiLab系统(DVL)对单增李斯特菌进行分子分型,评估其分型能力。方法用DVL对食品中分离的24株单增李斯特菌进行分子分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果进行比较,探讨DVL的分群能力和分辨率。结果 DVL将24株单增李斯特菌分成9个群,菌株之间的相似度46.7%～99.7%,DVL的相似度明显高于PFGE;DVL将PFGE型别相同的单增李斯特菌分在同一个的群中,也将不同PFGE型别的单增李斯特菌分在不同的群,但同一群中的单增李斯特菌有不同的PFGE型。结论 DVL操作简便、快速,重复性好,但分辨率低于PFGE;对大量单增李斯特菌分型时,先用DVL筛选再用PFGE对分布在同一群中的单增李斯特菌进行分型,能快速明确单增李斯特菌之间的关系。     

2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的血清型、耐药性及分子分型分析

目的  了解分离于2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的主要血清型、耐药谱和分子分型特点。 方法  采用微量肉汤稀释法测定LM抗生素敏感性, 使用玻片凝集法和PCR方法确定其血清型, 利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型。 结果  191株LM对8种抗生素总体基本敏感, 四环素耐药率最高(15/191, 7.85%), 8种抗生素耐药性连续监测4年无差异(P=1.000);血清型1/2a占38.82%(66/170), 1/2b占18.82%(32/170), 1/2c占42.36%(72/170); SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030带型共占33.78%, 呈明显聚集性, 为优势带型; 优势ST型为ST9、ST8和ST121, 占81.18%(69/85), 临床常见ST3, ST7和ST87占8.23%(7/85), 未发现新ST型。 结论  2013-2016年分离于山东省的食源性LM菌株对所测定的大多数抗生素敏感, 但已经发现耐四环素和红霉素菌株; 优势血清型为1/2c和1/2a, 未发现易引起李斯特菌病暴发的4b血清型; SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030为山东省2013-2016年PFGE优势带型; 主要ST型为ST8、ST9和ST121, 临床常见的ST3、ST7和ST87型均从食品中分离到, 应予以重视。     

2009—2010年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的耐药性和分子分型研究

目的 了解山东省单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)耐药及分子分型特点,并探讨耐药表型与PFGE基因组型之间的关系.方法 从2009-2010年山东省6个城市的生畜禽肉、熟肉制品、水产品等食品中采集80株单增李斯特菌,采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性,采用PFGE进行分子分型,并对耐药谱与PFGE型别关系进行分析.结果 16.25％(13/80)的菌株存在耐药,其中,业胺培南的耐药率最高(12.50％,10/80),其次是四环素和强力霉素(3.75％,3/80;2.50％,2/80).耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主.A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ (27/34)的PFGE型别中.结论 2009-2010年山东省单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,单增李斯特菌的PFGE分型与其药敏分型无对应关系.     

2例单增李斯特菌病人的病原学分析

目的了解2例感染的单增李斯特菌与本区食品中污染物的单增李斯特菌的生物学特性及分子流行病学相关性。方法对2株从病人血液中分离和本地区近5年(2007年-2011年)从食品中分离的57株单增李斯特菌,进行毒力基因检测、血清分型和PFGE分型。结果病人分离株和所有食源性分离株针对与单增李斯特菌致病相关的6对毒力因子(prf A、act A、iap、hly、plc B、inl A)PCR扩增结果全部为阳性;2株来自病人的菌株为1/2b血清型;2株来自病人菌株的PFGE图谱完全一致,且与1株从本区某超市采集的生牛肉中检出的菌株PFGE型别也完全一致,均为GX6A16.CN0012。结论母子感染的单增李斯特菌PFGE型别完全一致,提示为垂直传播;病人分离菌株和本地区食品中检出的李斯特菌均具有致病性。在本区食品中检出过与病人感染菌株PFGE型别完全一致的菌株。     

2011-2015年渭南市市售食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况监测与分析

目的 了解渭南市市售食品中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的污染状况,确定可能受污染的食品种类,为消除单增李斯特菌引发的食品安全隐患,保证居民饮食安全,有效预防食源性疾病的暴发提供科学依据。 方法 2011-2015年采集渭南市餐饮服务和流通环节销售的10类共739份食品样品,依据GB 4789.30-2010《单核细胞增生李斯特氏菌检验》对单增李斯特菌进行分离和鉴定。 结果 739份样品中共检出单增李斯特菌 22株,总检出率为2.98%;2015年单增李斯特菌的检出率最高(7.05%),其次为2013年(3.41%)和2011年(1.96%);不同种类食品中生畜禽肉中单增李斯特菌的检出率最高(17.31%),其次为冷冻挂浆鱼糜制品(5.00%)和熟肉制品(3.33%);不同采样场所中采自零售便利店的样品单增李斯特菌的检出率最高(9.33%),其次为超市(3.57%)和大中小型餐馆(3.08%);不同年份及不同种类食品中单增李斯特菌的检出率差异均有统计学意义(P<0.05);不同季度中第二季度食品单增李斯特菌检出率最高(3.49%)。 结论 2011-2015年渭南市多种食品及食品餐饮流通环节中单增李斯特菌的污染情况较为普遍,存在引发公共卫生问题的安全隐患,相关部门应加强对食品卫生的监督管理,预防食源性疾病的发生。     

十堰市26株单增李斯特菌同源性与耐药特征分析

目的 研究十堰市单增李斯特菌分离株的同源性和耐药性,为追溯传染源和临床用药提供参考依据。方法 对单增李斯特菌分离株进行PFGE分型,然后用E-test法对氨苄西林等13种抗生素进行耐药性分析。 结果 26株单增李斯特菌可分为13个PFGE亚型,相同PFGE型的菌株为同一来源。分别有45.15%和19.23%的菌株对磺胺嘧啶和环丙沙星耐药,对这2种抗生素均耐药的菌株有2株,为多重耐药菌株。结论 十堰市单增李斯特菌对一些抗生素存在较严重的耐药性,应加强对单增李斯特菌等食源性致病菌的监测,避免其污染水体而影响南水北调水源区水质。     

2021年长沙市食源性疾病沙门菌血清分型及PFGE分子分型分析

目的 了解长沙市食源性疾病沙门菌的血清分型和PFGE分子分型情况,为食源性疾病防控提供依据。 方法 按《食源性疾病监测工作手册》收集长沙市4所哨点医院食源性疾病病例粪便标本,从中分离沙门菌,并对沙门菌进行血清分型和凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE),通过Bionumerics 7.6 软件对电泳图谱进行分析。 结果 全年共监测528份标本,检出沙门菌50株,检出率为9.47%,阳性病例主要集中在5岁及以下年龄段,占74.00%(37/50),发病主要在夏秋5—9月,占全年的76.00%(38/50)。血清型共有12种,主要血清型是鼠伤寒沙门菌占60.00%(30/50),其次为斯坦利沙门菌4株占8.00%,肠炎沙门菌3株占6.00%。 50株沙门菌PFGE分型为41种带型,相似度为55.7％～100％,呈现多态性,主要分成两个簇,有8组相似度 100％ 的菌株,共17株(占34.00%,17/50),主要是鼠伤寒沙门菌;有10簇相似度90%以上的克隆系,包含32株沙门菌。 结论 长沙市2021年食源性疾病沙门菌感染的优势血清型是鼠伤寒沙门菌,沙门菌PFGE分子分型带型呈多态化,PFGE分型可识别共同感染来源的病例,可用于暴发疫情识别和控制。     

冷冻饮品加工过程中单核细胞增生李斯特菌污染状况分析

目的了解湖南省冷冻饮品生产加工过程中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)污染状况,为食源性疾病预防和控制提供科学依据。方法采集湖南省2家冷冻饮品生产企业的生产加工各个环节的样品,包括食物样品75份(原料类、中间产品、终产品)和非食物样品279份(环境、仪器设备、人员、工具等),参照GB 4789.30-2010中方法进行单增李斯特菌检测,分离菌株采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型。结果两家企业共监测354份样品,检出28株单增李斯特菌,检出率为7.91%,均在非食品样品中检出(检出率10.04%),其中环境样品的检出率最高(16.07%),人员、仪器设备、工具检出率分别为6.35%、6.58%、10.00%;与车间前处理区(0.96%)、整箱包装区相比(4.44%),灌装区检出率较高(12.20%);O企业非食品样品的检出率(13.94%)高于P企业(4.39%)(χ~2=6.815,P=0.009)。PFGE结果显示,O企业分离的23株单增李斯特菌,分为4个型别,其中有82.6%的菌株为同一型别,P企业分离的5株单增李斯特菌,分为2个型别,其中有4株为同一型别。结论两家冷冻饮品企业在生产加工过程中均检出单增李斯特菌,主要存在于车间灌装区的地面与地面接触物中,两企业检出的单增李斯特菌均存在优势型别,提示应加强消毒与监督,预防单增李斯特菌对冷冻饮品污染的潜在风险。     

一起沙门菌爆发的菌株鉴定和分子溯源研究

目的1起沙门菌爆发的菌株鉴定和分子溯源研究。方法收集2007年上海市黄浦区1起食源性沙门菌爆发病例的菌株,使用3种不同产地沙门菌分型血清进行菌株比对鉴定,测试菌株耐药性并对部分菌株进行多位点基因序列分型(MLST)。通过Pluse Net China非伤寒沙门菌数据库聚类分析上海市与重庆市爆发菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱。结果发生在上海市黄浦区某工地爆发的1起食源性菌株,经血清学和MLST鉴定为汤卜逊沙门菌ST26型;菌株对6种抗生素(四环素、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、氯霉素、萘啶酸、磺胺异恶唑)的耐药率均为100%。2007年重庆市报告多起食源性爆发案例中的C群沙门菌,经鉴定亦为汤卜逊沙门菌ST26型,与上海市的菌株间存在高度遗传同源性。结论兰州生物制品研究所和泰国S&A的沙门菌分型血清的H因子“c”和“k”间存在交叉凝集。2007年上海市黄浦区发生的食源性爆发病例可能为输入性汤卜逊沙门菌ST26型的多重耐药克隆株引起。     

湖南省B群脑膜炎奈瑟菌的药物敏感性及PFGE分型特征分析

目的 了解湖南省B群脑膜炎奈瑟菌的病原生物学特征、药物敏感性以及PFGE分型特征。 方法 29株B群流脑菌株经生化和血清学鉴定后,对菌株进行药敏试验和脉冲场凝胶电泳分型。 结果 29株B群脑膜炎奈瑟菌菌株对米诺环素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南、利福平、氯霉素和阿奇霉素全部敏感,对青霉素和氨苄青霉素的敏感率为75.86%和86.21%, 对环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明耐药率较高,耐药率为34.48%、41.38%和96.55%;29株B群脑膜炎奈瑟菌的PFGE分型共分为22个带型,不同地区间分离株可见带型一致的情况。 结论 B群脑膜炎奈瑟菌对抗菌药物的敏感性与其它血清群基本一致,PFGE分子分型呈现高度多态性,健康人群携带者的带型与病人的带型呈现一定的遗传相关性,应持续开展监测,密切关注菌株的传播趋势。     

东莞市科瓦利斯沙门菌耐药特征及分子分型研究

目的 分析东莞市科瓦利斯沙门菌的耐药特征及分子分型情况,了解该菌种的发展趋势,为开展食源性疾病防控工作提供实验依据。方法 实验菌株来源于2013—2017年东莞市4家食源性疾病监测哨点医院上送的33株科瓦利斯沙门菌,参照GB 4789.4—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对沙门菌进行分离培养、生化及血清学鉴定;采用微量肉汤稀释法（MIC）对菌株进行药物敏感性试验;并参照美国疾病预防控制中心公布的PulseNet PFGE分子分型标准化实验室操作进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）的分子分型。结果 2013—2017年东莞市科瓦利斯沙门菌的检出率为1.49%（33/2 211）。33株科瓦利斯沙门菌对四环素和氯霉素的耐药率最高,分别为81.82%和78.79%;对14种抗生素的耐药谱共有12种,其中以同时耐四环素、氯霉素的菌株最多,占54.5%;对3种及以上药物耐受的菌株有7株,占21.2%。33株科瓦利斯沙门菌共分成15个PFGE型,其中COVX01.DG006型8株、COVX01.DG011型5株。结论 2013—2017年东莞市科瓦利斯沙门菌检出率呈现增长趋势,散发病例呈聚集特征,菌株多重耐药率较低,今后仍需密切关注该菌种的感染情况和流行趋势。     

进口三文鱼单核细胞增生李斯特菌污染检测

目的对2003~2006年由北京口岸挪威进口的三文鱼进行单核细胞增生李斯特菌污染情况监控,并对分离的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型。方法采用美国食品药品管理局颁布的检测方法对单核细胞增生李斯特菌进行分离和血清分型。结果挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.2%~6.3%,在2003~2006年呈下降趋势;血清分型结果显示,分离自三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的血清型主要是1/2a、1/2b和4b型,分别占分离菌株的85%,6%和6%。结论首次对分离自挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型,所分离的菌株中97%是引起人类李斯特菌病的菌株。     

广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析

目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(ERIC-PCR)。结果 单增李斯特菌阳性率为15.89%(58/365),其中生畜肉类检出率最高,为25.38%(33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80%)和 1/2a(32.80%);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9~18条100~8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型。结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控。     

2007年-2009年山东省生肉中单增李斯特菌的耐药性及分子分型分析

目的:了解山东省生肉中单增李斯特菌的耐药及分子分型特点。方法:药敏实验采用微量肉汤稀释法对15种抗生素进行了耐药检测,分子分型采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法。结果:药敏实验显示14.08%的菌株产生耐药,其中对红霉素、左氧氟沙星、复方新诺明的耐药率较高(2.82%);71株菌用PFGE方法分为17个带型,以3型为主。结论:山东省生肉中单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,应加强菌株的耐药性监测;相同来源的单增李斯特菌来自不同的克隆株,但部分菌株有不同程度的相关性;耐药试验和PFGE分型可以相结合,以更好地预防和控制细菌性传染性疾病的发生。     

综合重症监护病房分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性和同源性分析

目的 对综合重症监护病房分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）耐药性和同源性进行分析,为临床抗菌治疗和监测提供参考。方法 收集2019年3月至2021年3月2家医院综合重症监护病房分离得到的260株CRKP菌（其中马鞍山某医院156株,苏州某医院104株）,并对CRKP菌株进行常规药敏试验、PCR扩增和测序检测耐药基因携带情况,利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术和多位点序列分型技术（MLST）对CRKP菌株进行同源性分析。结果 260株CRKP菌株对17种临床常用抗菌药物高度耐药,多重耐药率100%。马鞍山某医院的CRKP菌株主要携带碳青霉烯酶及超广谱β内酰胺酶（ESBLs）基因共5种耐药基因,bla_KPC-2型、bla_NDM-1型、bla_SHV型、bla_TEM型和bla_CTX-M-1型的携带率分别为84.62%、3.21%、70.51%、71.79%和80.77%。苏州某医院的CRKP菌株共携带bla_KPC-2型、bla_NDM-1型、bla_SHV型、bla_TEM型和bla_CTX-M-9型共5种耐药基因,携带率分别为74.04%、23.08%、80.77%、76.92%和27.88%。PFGE分型结果显示2家医院CRKP菌株均以A型和C型为主,但亚型和数量有差异。MLST分型分出ST11、ST76、ST16、ST437、ST379、ST751、ST395和ST307共8种序列型,马鞍山某医院主要为ST11型,占83.97%,而苏州某医院以ST11型（65.38%）和ST76型（27.88%）为主。结论 2家医院综合重症监护病房的CRKP菌株存在一定差别,但均以携带KPC-2碳青霉烯酶基因的ST11型为主,针对性加强重症监护病房清洁和院感监测,有利于控制多重耐药菌的传播和流行。     

一起罗米他沙门菌引起大学生食物中毒的病原学调查

目的 对某高校发生的一起食物中毒开展流行病学调查及病原学检索和溯源,探讨其中毒原因、传染源、传播途径。方法 对相关病例的流行病学特征进行调查,同时对腹泻病原进行检索,对病原菌进行生物学特征研究,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE) 技术进行分子流行病学溯源。结果 有流行病学相关病例15例,共分离出9株罗米他沙门氏菌(Salmonella romita,6,7:e,h:1,5),其中4株来自病例,1株来自从业人员,4株来自可疑食品西红柿汤汁。9株菌的生化表型、血清型及药敏试验结果一致,PFGE 条带聚类分析显示菌株属于同一克隆。结论 本起食物中毒由罗米他沙门菌引起,PFGE分型技术实现了对不同样品来源的罗米他沙门菌溯源。     

水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。     

北京市昌平区2010-2015年市售食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况分析

目的 了解北京市昌平区市售食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况,为政府部门有效监管提供技术支持。 方法 2010-2015年,在辖区内农贸市场、超市/便利店和餐饮单位抽取12类368件食品样品进行单核细胞增生李斯特菌检测。 结果 368件食品样品中检出单核细胞增生李斯特菌16株,总检出率为4.35%。其中,不同类别食品中生禽肉检出率最高(25.71%),其次是生畜肉(11.11%)和鲜冻水产品(6.67%);各季度样品中三季度样品检出率最高(7.41%),其次是二季度(4.11%),一、四季度样品未检出;农贸市场、超市/便利店和餐饮单位等不同销售场所样品检出率分别为4.85%、4.11%和4.20%。 结论 2010-2015年北京市昌平区市售生禽肉、生畜肉和鲜冻水产品存在单核细胞增生李斯特菌污染,且以三季度污染较为突出。     

广州市食品中蜡样芽胞杆菌生化分型和多位点测序分型分析

目的 了解广州市食品中蜡样芽胞杆菌的生化分型、多位点测序分型(multilocus sequence type,MLST)情况和优势序列型。方法 根据国标将79株食品来源蜡样芽孢杆菌进行生化分型,并根据PubMLST网站提供的蜡样芽胞杆菌MLST分型方案,扩增7个管家基因,经测序后,在PubMLST网站上比对获得菌株的序列型,利用eBURST V3和START2和MEGA6.0软件进行分析。结果 广州市食品中的蜡样芽胞杆菌优势序列型为ST26,占16.46%。结论 蜡样芽胞杆菌具有高度的遗传多样性。