BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p影响NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡

目的:探讨BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:qRT-PCR检测BSN-AS2和miR-219a-5p在NSCLC组织和细胞系中的表达;原位杂交FISH检测BSN-AS2和miR-219a-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-219a-5p 靶向调控BSN-AS2;Transwell、CCK8和Tunel细胞凋亡分别检测BSN-AS2-miR-219a-5p轴对侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响;构建NSCLC裸鼠皮下移植瘤模型进行验证BSN-AS2-miR-219a-5p轴的调控作用。结果:BSN-AS2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-219a-5p为低表达,BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p;siBSN-AS2组抑制NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,且促进细胞凋亡,而In-miR-219a-5p组促进NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡,siBSN-AS2+In-miR-219a-5p组相比siBSN-AS2组促进了NCI-H520细胞侵袭、迁移和增殖,抑制细胞凋亡;BSN-AS2增加体内肿瘤细胞增殖和肿瘤生长,miR-219a-5p则能抑制。结论:BSN-AS2竞争性结合miR-219a-5p促进NSCLC细胞侵袭、迁移和增殖,且抑制凋亡,而干扰BSN-AS2-miR-219a-5p轴可能作为抗NSCLC的新靶点。     

微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9（MAP3K9）的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物（mimics组）和阴性对照（NC组），以未转染的MGC-803细胞为对照组；采用实时定量PCR（QPCR）检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率，MTT法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平，同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果 QPCR结果显示，对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368，与对照组和NC组比较，mimics组的miR-148a-3p水平升高（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞凋亡率为（15.2±1.6）％，高于对照组的（3.5±0.9％）％和NC组的（4.5±1.1）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和NC组比较，mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调，而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调（P＜0.05）；双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡，可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用，调控miR-148a-3p／MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。     

miR-19a-3p 靶向细胞黏附分子2 阻断AKT通路抑制肾癌细胞786-O 的增殖和迁移

[摘要] 目的：探讨肾癌组织高表达的miR-19a-3p 靶向调控细胞黏附分子2（cell adhesion molecule 2,CADM2）并通过AKT信号通路影响肾癌细胞增殖和迁移的机制。方法：收集2012 年4 月至2017 年11 月苏州大学附属第一医院肾内科收治的42 例资料完整的肾癌患者手术切除的肾癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测肾癌组织和786-O等4 种肾癌细胞系中miR-19a-3p 的表达水平,CCK-8、Transwell 和免疫荧光法检测miR-19a-3p 敲减对肾癌786-O 细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-19a-3p 与CADM2 的靶向关系。采用Wb 检测miR-19a-3p 通过CADM2 对AKT信号通路的调控作用。结果：miR-19a-3p 在肾癌组织及细胞系中均高表达（均P<0.01）。敲减miR-19a-3p 可显著抑制786-O 细胞增殖、迁移和上皮间质转化,且miR-19a-3p 靶向作用CADM2 并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）。敲减miR-19a-3p 通过靶向上调CADM2 并阻断AKT信号通路进而显著抑制786-O细胞增殖、迁移和上皮间质转化（均P<0.05 或P<0.01）,从而缓解肾癌发生发展。结论：肾癌组织中miR-19a-3p 高表达,敲减miR-19a-3p 可显著抑制肾癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,其机制可能是通过miR-19a-3p/CADM2/AKT分子轴起作用。     

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7 侵袭

目的：探究miR-130a-3p 通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：收集承德医学院附属医院2018 年1 月至10 月收治的22 例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-453）和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用qPCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p 的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics 组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752（MET小分子抑制剂）转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor 组,然后采用CCK-8 法和Transwell 实验分别检测MCF-7 细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7 细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p 与MET之间的靶向关系。结果：miR-130a-3p 在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p 可抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p 出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p 靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p 负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论：miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞EMT过程,进而抑制MCF-7 细胞侵袭转移。     

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷（salidroside，Sal）通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达；qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达；Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达；CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达，且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性（P＜0.05），并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力（P＜0.05），而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调（P＜0.05），Sal可抑制二者表达（P＜0.05）。与对照组比较，miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调（P＜0.05），miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制（P＜0.05），Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用（P＜0.05）。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达，Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响 NSCLC细胞的生物学行为，发挥抗癌作用。     

miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIAN...     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的机制研究

目的:研究miR-520a-3p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响,并探索潜在的分子机制。方法:收集2015年4月至2017年10月在我院乳腺外科确诊的45例乳腺癌标本,实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-520a-3p的表达水平。分析miR-520a-3p与乳腺癌化疗耐受和肿瘤生物学特征的相关性。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABCG2）mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测ABCG2的表达。转染miR-520a-3p mimic后,采用细胞毒性实验观察乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miR-520a-3p升高后,ABCG2 mRNA和蛋白的表达变化。进一步采用双荧光素酶活性实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低（P＜0.05）,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与高TNM分期（III期）和淋巴结转移相关（P＜0.05）。miR-520a-3p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降（P＜0.05）,而ABCG2的表达水平则明显升高（P均<0.05）。上调miR-520a-3p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强（P＜0.05）,而ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因结果则证实ABCG2是miR-520a-3p的靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转MCF-7/Doc对多西他赛的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。     

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1（musculin antisense RNA 1,MSC-AS1）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用LipofectamineTM2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高（P＜0.05）;MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关（P＜0.01）,并提示患者的预后不良（P＜0.01）;敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖（P＜0.05）。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。     

lncRNAXIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞的增殖及转移

[摘要] 目的：探究lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞增殖和转移及其分子机制。方法：收集2013年3 月至2018 年3 月在青岛市口腔医院就诊的OSCC患者47 例癌组织和癌旁组织标本,采用qPCR检测OSCC患者组织及细胞系中lncRNA XIST、miR-34a-5p、SIRT6 mRNA 的表达,WB检测OSCC 患者组织及细胞系中SIRT6、Ki67、pcDNA、cleaved-caspase3、cleaved-caspase8、E-cadherin、Vimentin 蛋白的表达,采用CCK-8 实验检测敲降lncRNA XIST对Cal-27 及Tca-8113 细胞增殖的影响,Transwell 小室法检测Cal-27 及Tca-8113 细胞迁移及侵袭;流式细胞术检测Cal-27 及Tca-8113 细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测lncRNA XIST与miR-34a-5p、miR-34a-5p 与SIRT6 靶向结合关系。结果：lncRNA XIST和SIRT6 在OSCC患者癌组织及细胞系中高表达（均P<0.05）,miR-34a-5p 则呈低表达（P<0.01）;敲降lncRNA XIST抑制OSCC细胞的增殖、迁移及侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;敲降lncRNA XIST 促进OSCC细胞中增殖及转移相关蛋白表达（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;lncRNA XIST 与miR-34a 靶向结合,miR-34a 与SIRT6 靶向结合;lncRNA XIST 通过靶向miR-34a-5p 上调SIRT6 表达（P<0.01）。结论：lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴能够调控OSCC细胞增殖及转移,为OSCC治疗提供潜在靶点。     

miR-199a-3p在乳腺癌中的表达及其作用

背景与目的：多种微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。miRNA可能是治疗乳腺癌的新靶点。该研究旨在探讨miR-199a-3p在乳腺癌中的表达水平,及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：运用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞和人乳腺细胞中miRNA-199a-3p的表达水平,miR-199a-3p mimic(或inhibitor)转染乳腺癌细胞MDA-MB-231过表达(或沉默)miR-199a-3p的表达后,通过MTT法检测细胞增殖能力,Hoechst染色法和caspase-3活力测试检测细胞凋亡情况。结果：相对癌旁正常组织和人正常乳腺细胞,miR-199a-3p在乳腺癌患者癌组织和人乳腺癌细胞中表达下调。在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p mimic过表达miR-199a-3p可抑制细胞增殖,促进其凋亡;在MDA-MB-231中转染miR-199a-3p inhibitor沉默miR-199a-3p可促进细胞增殖,抑制其凋亡。结论：miR-199a-3p在乳腺癌中表达下调,并通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡发挥抑癌作用。     

LncRNA SNHG20通过miR-520f-3p调控胆管癌细胞增殖和侵袭

目的 探讨lncRNA SNHG20和miR-520f-3p对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的作用机制.方法 收集2012年3月至2014年3月在哈尔滨医科大学附属第二医院手术切除的20例胆管癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织,利用脂质体转染技术分别将si-SNHG20、miR-520f-3p mimics和miR-52...     

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

[摘要] 目的：检测miR-133a-3p 在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法：收集河北医科大学第四医院普外科2012 年5 月至2013 年5 月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）法检测miR-133a-3p 在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆（35 例）的表达情况,分析miR-133a-3p 的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8 法检测过表达或沉默miR-133a-3p 对胃癌SGC7901 细胞增殖的影响。结果：miR-133a-3p 在胃癌组织中的表达明显降低（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度（T）、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.01）;在胃癌患者血浆中的表达明显升高（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.05）;与患者血清中CA199的表达水平正相关（P<0.01）。胃癌组织中miR-133a-3p 高表达组患者中位DFS 明显高于低表达组（20.8 vs 14.8 个月,P<0.05）。血浆中miR-133a-3p 的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组（14.4 vs 20.3 个月,P<0.05）。过表达miR-133a-3p 可明显抑制SGC7901 细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701 细胞的增殖能力（均P<0.05）。结论：miR-133a-3p 可明显抑制胃癌细胞SGC7901 的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。