微小RNA-21反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的探讨微小RNA-21（miR-21）反义寡核苷酸（miR-21ASO）对舌鳞癌细胞增殖和凋亡的调控作用。方法通过转染miR-21ASO，采用实时荧光定量RT—PCR（qRT—PCR）检测舌鳞癌细胞株SCC-15和CAL27中miR．21的表达变化，荧光素酶活性检测实验分析miR-21ASO在舌鳞癌细胞中的调控功能．并运用多种细胞增殖和凋亡检测方法以观察miR-21ASO对舌鳞癌细胞调控产生的系列效应。结果miR-21在两株舌鳞癌细胞SCC-15和CAL27中的表达显著高于在正常舌鳞状上皮细胞中的表达（P=0．037，0．015），转染miR-21ASO可显著抑制其表达（P=0．017，0．006），miR-21对荧光素酶活性的抑制率由50％显著减少到20％以下（P=0．002，0．003），SCC-15和CAL27细胞存活率比转染前明显降低（P=0．002，0．004），细胞克隆形成率比转染前明显降低（P=0．007，0．032）；流式细胞仪检测显示转染miR-21ASO后．SCC-15和CAL27细胞凋亡明显增加，激光共聚焦显微镜观察到线粒体细胞色素C释放较转染前增加。结论miR-21ASO对舌鳞癌细胞miR-21水平降低具有靶向特异性．转染miR-21ASO可有效抑制miR-21的促癌效应，利用反义核酸技术的高度特异性开展针对促癌microRNA分子的靶向治疗将可能为舌鳞癌的基因治疗开辟新的途径。     

曲古抑菌素A对舌鳞癌SCC-6细胞生物学行为的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对舌鳞癌细胞生物学行为的影响,探讨其体外抗癌活性。方法:不同浓度、时间梯度TSA处理人舌鳞癌SCC-6细胞后,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪定量检测细胞周期和凋亡变化;Transwell法测定细胞体外侵袭性改变。结果:①TSA对SCC-6细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;②随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞G1期的细胞数目逐渐减少,而S期和G2/M期的细胞数目增加,提示TSA将细胞周期抑制在S期和G2/M期,同时随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞的凋亡率与对照组相比明显增加(P<0.05),提示TSA能促进SCC-6细胞的凋亡;③经不同浓度TSA处理24 h后,SCC-6细胞穿透人工基质膜的细胞数随着TSA浓度上升而逐渐减小,提示TSA能显著抑制SCC-6细胞的侵袭性。结论:体外条件下,TSA能明显抑制SCC-6细胞的增殖和侵袭能力,诱导其凋亡。而其所介导的细胞凋亡很可能与S期和G2/M期细胞周期的阻滞有关。     

微小核糖核酸-21对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响

目的研究微小核糖核酸-21（miR-21）对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响。方法将2’O-Me修饰的正义和反义miR-21寡核苷酸序列通过脂质体转染技术转染到舌鳞状细胞癌细胞Tca8113及其高转移株内,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测转染后miR-21在细胞中的表达变化,通过甲基噻唑基四唑（MTT）法、流式细胞术、Annexin Ⅴ细胞早期凋亡检测、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期、细胞早期凋亡情况、细胞迁移及侵袭能力的变化。结果靶向miR-21的反义寡核苷酸可以有效地抑制Tca8113及其高转移株细胞的增殖,促进细胞凋亡,并抑制细胞的迁移和侵袭能力。结论细胞内转染反义miR-21寡核苷酸序列后,可以降低舌鳞状细胞癌细胞中miR-21的表达,并对舌鳞状细胞癌细胞的生物学行为产生影响。     

MTUS1／ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨过表达MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法检测人舌鳞癌系UM1、SCC鄄9、SCC鄄15、Tca8113细胞株中MTUS1的表达水平。应用含ATIP1片段的质粒转染舌鳞癌细胞,48 h后MTT检测舌鳞癌细胞的增殖能力;应用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测舌鳞癌细胞中MTUS1、p53、ERK1/2的表达情况。结果转染MTUS1/ATIP1后细胞的增殖明显受到抑制,其抑制率约为40％（t=0.023,P＜0.05）;高表达MTUS1/ATIP1可导致舌鳞癌细胞株G1期阻滞（G1期：t=0.032,G2期：t=0.036,S期：t=0.027,P＜0.05）并诱导细胞凋亡率的明显升高,差异具有统计学意义（t=0.005,P＜0.05）。 Western blot检测显示,转染MTUS1/ATIP1后ERK的表达升高,磷酸化的ERK表达下降,p53的表达升高。结论 MTUS1可抑制舌鳞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

MMP-9抑制剂对口腔鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 观察MMP-9抑制剂对人口腔鳞癌细胞系CAL27增殖和侵袭能力的影响。方法 选取人口腔鳞癌细胞系CAL27进行培养,用不同浓度的MMP-9抑制剂BB-94处理对数期CAL27细胞,通过RT-PCR检测BB-94在基因水平上对MMP-9的抑制效果。细胞免疫化学实验检测BB-94在蛋白水平上对MMP-9的抑制效果。MTT实验检测MMP-9抑制剂BB-94对人口腔鳞癌细胞增殖能力的影响。划痕实验检测MMP-9抑制剂BB-94对人口腔鳞癌细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测MMP-9抑制剂BB-94对人口腔鳞癌细胞侵袭能力的影响。结果 MMP-9抑制剂能有效抑制人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖、迁移和侵袭能力。结论 抑制MMP-9的表达可以抑制人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

抑癌基因Lkb1超表达载体构建及其在人舌鳞癌细胞SCC-15中的生物活性分析

目的:了解抑癌基因LKB1对人舌鳞癌细胞的影响,初步探讨其相关通路机制。方法:构建LKB1真核表达载体,通过脂质体转染人舌鳞癌细胞系(SCC-15),利用RT-PCR、Western blot 和流式细胞术来检测SCC-15中基因表达和细胞周期凋亡的变化。结果:LKB1在SCC-15细胞中mRNA水平上成功过表达约300倍,蛋白表达水平也显著上调;同时发现LKB1超表达对细胞周期起阻滞作用,并可上调p53、PTEN和TGF-β,同时下调VEGF的表达,差异均有统计学意义。结论:成功构建了LKB1真核表达载体,该基因在SCC-15细胞中超表达对细胞周期起阻滞作用,调控p53、PTEN、TGF-β和VEGF基因表达,可能参与调控p53和TGF-β等多种信号通路,为进一步研究 LKB1 基因在恶性舌鳞癌发病的机制和临床治疗的作用提供了重要实验依据。     

沉默RohA基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默RhoA基因从而探讨RhoA对舌癌细胞增殖和生长的影响及其作用机制。方法体外培养舌鳞状细胞癌SCC-4细胞,以小分子干扰RNA转染沉默RhoA基因的表达。实验分为3组：实验组（又分为实验1组和实验2组,脂质体分别转染对应序列1的RhoA-siRNA和序列2的RhoA-siRNA）、阴性对照组（脂质体转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应技术检测SCC-4细胞转染后RhoA mRNA的表达,Western blot检测RhoA、Cyclin D1、p21和p27蛋白的表达,四唑盐比色法检测舌癌细胞生长水平和倍增时间。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组舌癌细胞的RhoA基因及蛋白表达降低,p21、p27蛋白表达升高,Cyclin D1蛋白表达降低,细胞倍增时间延长,增殖能力降低（P<0.05）。结论 沉默RhoA基因可以抑制舌癌细胞的增殖和生长,RhoA基因通过调控细胞周期信号转导途径影响舌癌细胞的增殖,RhoA基因可以成为舌癌基因治疗的靶点。     

Stat3抑制剂Stattic抑制人舌鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:观察Stat3小分子抑制剂Stattic对人舌鳞癌细胞的增殖抑制作用.方法:用不同浓度Stattic处理人舌鳞癌细胞SCC-4与SCC-25,采用CCK-8试剂盒检测Stattic对两株细胞增殖的影响.采用Western Blot方法检测Stat3 Ser727,Stat3 Tyr705磷酸化水平以及Rictor...     

SCC-9舌鳞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定

目的:分离SCC-9细胞中CD44+的肿瘤细胞亚群,鉴定CD44+亚群细胞具有肿瘤干细胞的特性。方法:采用CD44免疫荧光抗体标记流式细胞术分选出CD44+的细胞亚群;检测各细胞亚群的细胞周期;检测CD133、Oct-4、BIM-1在CD44+和CD44-中的表达;检测各细胞亚群克隆形成率。结果:SCC-9细胞中CD44+的细胞亚群约占30%;CD44+的肿瘤细胞亚群70%处于G0/G1期;胚胎干细胞因子CD133、Oct-4、BIM-1在CD44+和CD44-的OSCCs中表达存在显著性差异(P<0.01);CD44+细胞亚群克隆形成率明显高于CD44-的细胞亚群。结论:在SCC-9舌鳞癌细胞系中CD44+细胞亚群具有肿瘤干细胞的特性。     

沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC9和SCC25中,采用qRTPCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果。通过CCK8实验检测沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响;运用Transwell法检测沉默calnexin对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果qRTPCR显示calnexin siRNA能够有效沉默calnexin的表达;Western blot实验进一步证实calnexin siRNA对calnexin的沉默效果。CCK8实验显示沉默calnexin表达的第4天,第5天能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);Transwell实验提示沉默calnexin的表达能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移(P<0.001)。结论沉默calnexin可抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

沉默Icmt基因对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制.方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,...     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对舌癌细胞株SCC-4细胞RECK基因甲基化水平及侵袭的影响

目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷5-aza-2-deoxycytidine (5-aza-Dc) 对舌癌细胞株SCC-4中抑癌基因RECK基因甲基化水平及侵袭能力的影响。方法 用不同浓度的5-aza-Dc处理舌癌细胞株SCC-4,72 h后,以甲基化特异性PCR（MSP）检测SCC-4细胞RECK基因的甲基化状态,实时定量 PCR技术检测SCC-4细胞RECK基因mRNA的表达,Western 印迹检测蛋白质表达,Transwell体外侵袭实验检测侵袭能力。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 MSP检测未处理组细胞RECK基因呈高甲基化状态,经5-aza-dC处理后甲基化得到逆转。实时定量 PCR检测显示,不同浓度5-aza-dC处理SCC-4细胞72 h后, 相对mRNA表达随着药物浓度增加而增加(P<0.05)。Western 印记分析结果显示,不同浓度5-aza-dC组的RECK蛋白表达相对水平随药物浓度增加而增加,SCC-4细胞的侵袭力随药物浓度增加而降低。结论 5-aza-dC可逆转舌癌SCC-4细胞中RECK基因的高甲基化状态,并恢复RECK基因mRNA及蛋白的表达,降低其体外侵袭能力。     

体外RNA干扰RhoA基因对舌癌细胞侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113和SCC-4中RhoA基因的表达,探讨RhoA基因表达下调对舌癌细胞侵袭的影响。方法登录Genbank数据库确定人RhoA基因序列,针对RhoA的基因序列设计短链RNA,利用Lipofectamine2000介导法将RhoA-siRNA转染至舌癌Tca8113和SCC-4细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后的舌癌细胞中RhoA mRNA的表达,蛋白质印迹法检测RhoA、半乳糖凝集素-3（galectin-3）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果舌癌细胞转染RhoA-siRNA后,RhoA的基因和蛋白表达下降,galectin-3和MMP-9蛋白表达下降,细胞体外侵袭能力降低。结论RhoA-siRNA可以有效地抑制舌癌Tca8113和SCC-4细胞中RhoA的表达,通过降低galectin-3和MMP-9的表达从而降低细胞的侵袭能力。RhoA在舌癌的侵袭和转移中可能发挥重要的作用。     

miR-138靶向PLD2基因对口腔癌细胞增殖、迁移的影响

目的：探讨miR-138靶向PLD2基因抑制口腔癌细胞增殖、迁移的机制。方法：口腔癌细胞转染miR-138后,采用RT-PCR检测细胞中miR-138的表达水平,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞转染miR-138后细胞周期的分布,Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力;采用Western 免疫印迹实验检测胃癌细胞MMP-9、PLD2及Cyclin D1的表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-138与PLD2基因的靶向关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：口腔癌细胞转染miR-138后,miR-138相对表达水平为4.28±0.16,显著高于空白对照及miR-NC组（P<0.05）。荧光素酶报告基因实验发现,口腔癌细胞转染miR-138后,PLD2野生质粒荧光素酶相对活性低于其他组（P<0.05）,miR-138组的PLD2的mRNA表达水平低于空白对照及miR-NC 组（P<0.05）。口腔癌细胞转染miR-138后,miR-373组的口腔癌细胞的增殖能力低于空白对照及miR-NC组（P<0.05）。流式细胞术实验发现,miR-138组的G₀/G₁期比例为（64.39±6.49）%,显著高于空白对照组及miR-NC组（P<0.05）;miR-138组S期比例为（13.28±3.16）%,显著低于空白对照组及miR-NC组（P<0.05）;各组G₂/M期比例差异无统计学意义（P>0.05）。Transwell实验发现,口腔癌细胞转染miR-138后,迁移细胞数量为138.46±24.37,显著低于空白对照组及miR-NC组（P<0.05）。Western免疫印迹实验发现,miR-138组MMP-9的相对水平为0.14±0.04、Vimentin的相对水平为0.17±0.02、Cyclin D1的相对水平为0.15±0.03,均显著低于空白对照组及miR-NC组（P<0.05）。结论：miR-138可靶向调控PLD2基因表达,对口腔癌的增殖、迁移能力产生抑制作用。     

小分子RNA干扰沉默Tiam1基因对舌鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨小分子RNA干扰(siRNA)沉默Tiam1基因对舌鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响。方法:培养人舌癌细胞SCC-4,随机分为siRNA-Tiam1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot法检测不同转染组细胞中Tiam1基因和蛋白表达,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况,利用流式细胞术检测不同转染组细胞凋亡情况,Transwell法检测不同转染组细胞迁移和侵袭能力。结果:siRNA-Tiam1组细胞中Tiam1基因和蛋白相对表达量均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);MTT实验结果显示,与siRNA-对照序列组和空白对照组相比,siRNA-Tiam1组细胞24 h、48 h、72 h和96 h时A值均降低(P<0.05);流式细胞检测结果显示,siRNA-Tiam1组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-Tiam1组迁移细胞数和侵袭细胞数均低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:特异性沉默Tiam1基因可有效抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖能力,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力。