姜黄素对人胃腺癌细胞株BGC-823生长抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨姜黄素对人胃腺癌细胞BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用。方法MTT法检测不同浓度姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制作用,计算半数抑制浓度（IC₅₀）;将1.2μmol／L姜黄素作用于BGC-823细胞24、48、72h,用DAPI染色检测细胞凋亡;用RT-PCR、Western blotting法分别检测姜黄素对Bax、Bcl-2基因以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的影响。结果 不同浓度的姜黄素作用于BGC-823细胞0～72h后,细胞呈不同程度的抑制作用,随着药物浓度的增加,抑制率明显上升,作用48h的IC₅₀为1.2μmol／L。DAPI染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。RT-PCR、Western blotting结果显示1.2μmol/L姜黄素可以增加Bax表达、减少Bcl-2表达和激活caspase-3。结论 姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用,这可能与增加Bax表达、减少Bcl-2表达、激活caspase-3有关。     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

粉防己碱对人甲状腺癌细胞B-CPAP生长和凋亡的影响

目的:探讨中药粉防己碱(tetrandrine,Tet)对人甲状腺癌细胞B-CPAP生长和凋亡的影响及其作用机制.方法:以0、5、10、20 μg/ml Tet培养细胞24、48、72 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法测定Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、VEGF-C、MMP和Survivin蛋白的表达情况.结果:Tet呈时间和剂量依赖性地抑制B-CPAP细胞的生长(P＜0.05);流式细胞术检测显示Tet干预后,凋亡细胞比例显著增高,且呈剂量和时间依赖性;Western blot检测结果显示Bax、Cleaved、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2、VEGF-C、MMP、Survivin蛋白表达降低.结论:Tet可能通过激活线粒体凋亡通路促进B-CPAP细胞凋亡,抑制其生长.     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨阿帕替尼（Apatinib）是否通过包含氧化还原酶的WW结构域（WWOX）影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭。方法:噻唑蓝（MTT）比色法检测4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L Apatinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-1 24 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数。在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16 μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;16 μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量（P＜0.05）,明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量（P＜0.05）。过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数（P＜0.05）,提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率（P＜0.05）。抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用。结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin,Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系;采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响;采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达;TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218）,采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）;Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05）,Bax mRNA表达升高（均P<0.05）;Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05）,PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）;MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示,ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209,P=0.007;r=0.235,P=0.002）,与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326,P＜0.001;r=-0.453,P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

GNA对人宫颈癌细胞增殖抑制、凋亡、迁移及细胞周期分布的影响

目的:研究新藤黄酸（gambogic acid,GNA）对人宫颈癌细胞的增殖抑制、凋亡、迁移以及细胞周期分布的影响。方法:将人宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组,进行细胞培养后采用MTT法和流式细胞术检测细胞24 h、48 h和72 h时间段的增殖抑制和凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blot检测Bcl-2、Bax、E-cadherin和NF-κB蛋白相对表达量。结果:25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组对宫颈癌细胞的抑制增殖率在不同时间段均显著高于空白对照组,增殖抑制率随着浓度和时间的增加而升高（P＜0.05）;25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组宫颈癌细胞凋亡率在各时间段均显著高于空白对照组,凋亡率随着浓度和时间的增加而升高（P＜0.05）;25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组宫颈癌细胞的细胞迁移数量相比对照组均显著减少,细胞迁移数量随着浓度的增加而减少（P＜0.05）;GNA浓度越高,处于G0/G1期的细胞比例越高,处于G2/M和S期的细胞比例越低;25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组Bcl-2、NF-κB均低于空白对照组（P＜0.05）;25 μmol/L浓度组、50 μmol/L浓度组和100 μmol/L浓度组Bax、E-cadherin表达均高于空白对照组。结论:GNA能够促进宫颈癌细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和迁移能力,通过改变癌细胞的周期分布降低癌细胞的增长,其能力呈现浓度依赖性。     

赖氨匹林对乳腺癌ERK信号通路活性及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨非选择性环氧合酶一2抑制剂赖氨匹林对体外培养的MDA—MB-231人乳腺癌细胞ERK信号转导通路活性以及Bcl-2、Bax家族蛋白表达的影响。方法：应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞凋亡率，免疫印迹技术检测赖氨匹林对乳腺癌细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）／磷酸化（p—ERK）、Bcl-2、Bax表达的影响。结果：与对照组相比，（1-10）mmol／L赖氨匹林作用24h、48h、72h明显抑制MDA—MB-231细胞生长，具有剂量、时间依赖性。（1、5和10）mmol／L赖氨匹林作用24h，细胞早期凋亡率分别为5．81％、10．52％、15．63％，对照组为0．27％。赖氨匹林可下调MDA—MB-231细胞P—ERK的表达水平，但不影响总ERK表达，同时上调Bcl-2的表达，下调Bax的表达。结论：赖氨匹林对MDA—MB-231细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，其作用机制与抑制乳腺癌ERK信号通路、影响Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的机制

目的研究N-来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;Hoechst 33342/PI核荧光双染色法检测细胞凋亡的改变;运用Western blot技术检测参与细胞凋亡相关基因的蛋白表达。结果20 μmol/L MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,48 h IC50值为126 μmol/L;20 μmol/L MVC可诱导MGC-803细胞凋亡;MVC作用后,增加了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了凋亡蛋白Bcl-2 的表达,提高了Caspase-3活性。结论MVC可通过Bcl-2介导的线粒体途径诱导MGC-803 细胞凋亡。     

姜黄素对人结肠癌细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨姜黄素对人结肠癌RKO细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK通路的影响。方法:MTT法检测细胞活力,Western blot检测p-Akt、Akt、p-ERK,ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:姜黄素作用人结肠癌RKO细胞,24h和48h的IC50值分别为51.69μg/ml和36.12μg/ml。选用50μg/ml的姜黄素分别作用24h和48h,RKO细胞凋亡百分比为26.79%和42.16%,与对照组相比有显著差异(P＜0.05)。进一步检测发现姜黄素（50μg/ml）显著下调了p-Akt 和p-ERK的表达,同时Bcl-2与Bax的比值显著下调。结论:姜黄素可能通过抑制PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值,从而抑制RKO细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

上调NRG1对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的:探讨神经调节蛋白1（neuregulin 1,NRG1）对甲状腺癌细胞系MDA-T32和B-CPAP增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:构建pCDNA3.1-NRG1过表达载体,脂质体法转染甲状腺癌细胞系MDA-T32和B-CPAP,qRT-PCR检查转染组与对照组NRG1基因表达,Western blotting法检测各组细胞NRG1蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin V／PI双染各组MDA-T32细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果: pCDNA3.1-NRG1成功转染MDA-T32和B-CPAP细胞,转染后qRT-PCR和Western blotting结果显示NRG1基因和蛋白表达水平上调。高表达NRG1能抑制MDA-T32和B-CPAP细胞的增殖。流式细胞术结果显示,NRG1诱导MDA-T32和B-CPAP细胞凋亡。Western blotting结果显示NRG1高表达可以促进MDA-T32和B-CPAP细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论: NRG1能够抑制甲状腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导凋亡。     

集缩素NCAPG表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制

目的:探讨集缩素NCAPG表达与甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和凋亡的关系及可能的调控机制。方法:利用siRNA-NCAPG下调B-CPAP细胞NCAPG的表达，分别采用qRT-PCR、Western blot法检测转染组与对照组的NCAPG基因及蛋白表达量。CCK-8法检测各组细胞的增殖能力，观察NCAPG对细胞增殖的影响。为探讨NCAPG对B-CPAP细胞凋亡的影响，利用流式细胞术检测各组细胞Annexin V／PI双染情况，利用Western blot法检测各组细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达。结果:转染siRNA-NCAPG的B-CPAP细胞成功下调NCAPG的基因及蛋白表达。NCAPG表达下降抑制B-CPAP细胞的增殖。流式细胞术结果显示，下调NCAPG表达可诱导B-CPAP细胞凋亡。Western blot结果表明，下调NCAPG表达促进B-CPAP细胞Caspase-3和Bax的表达，抑制Bcl-2的表达。结论:甲状腺癌细胞B-CPAP中NCAPG促进细胞增殖，抑制其表达后可通过调节线粒体通路诱导细胞凋亡。     

顺铂联合迷迭香酸抑制Huh7细胞增殖诱导凋亡

目的:探讨含铂抗癌药物顺铂（Cisplatin,CDDP）联合中药单体迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对人原发性肝癌Huh7细胞系增殖与凋亡的影响。方法:通过CCK-8细胞增殖实验检测并计算CDDP和RA治疗24 h、48 h、72 h后的IC50值,随后设置未经药物处理组（control组）、5 μg/mL CDDP处理组、200 μg/mL RA处理组以及5 μg/mL CDDP联合200 μg/mL RA处理组。采用流式细胞术检测control组、CDDP处理组、RA处理组以及联合用药组的细胞凋亡率分别为（7.28±0.56）%、（18.23±2.53）%、（26.44±1.99）%和（37.27±0.28）%。最后,利用免疫印迹试验(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3以及Procaspase-3凋亡相关蛋白的表达水平。结果:RA可增强CDDP对Huh7细胞增殖的抑制能力并呈现出浓度依赖性（P＜0.05）,在CDDP联合RA处理组中Huh7细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,CDDP联合RA作用后促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase-3的表达水平增加,而Bcl-2的表达水平下降（P＜0.05）。结论:RA能抑制Huh7细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

瑞戈非尼联合哌立福辛诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨瑞戈非尼联合哌立福辛(AKT抑制剂)对人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。 方法 不同浓度瑞戈非尼(1、5、10、15、20、25 μmol/L)处理肝癌细胞后,通过CCK-8检测其细胞存活率;再设置不同浓度瑞戈非尼(0、5、10、20 μmol/L)处理肝癌细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9的表达情况;设置哌立福辛组(10 μmol/L)、瑞戈非尼组(20 μmol/L)及双药联合组(哌立福辛10 μmol/L联合瑞戈非尼20 μmol/L),检测细胞凋亡及相关蛋白表达变化。 结果 从5 μmol/L浓度起,瑞戈非尼可剂量依赖性的抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05);Bcl-2及p-AKT表达下调,Bax、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9表达上调(P＜0.05);瑞戈非尼和哌立福辛双药联合应用后,细胞凋亡率、Bax表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2、p-AKT表达量下降程度均较单独应用哌立福辛及瑞戈非尼明显(P＜0.05)。 结论 瑞戈非尼通过增加p21、p27、Bax、caspase-8、caspase-9的表达,减少Bcl-2、p-AKT的表达,来诱导肝癌细胞凋亡,并且瑞戈非尼与哌立福辛双药联合应用后,明显增加肝癌细胞凋亡率,为药物治疗肝癌提供新的理论基础和思路。     

Celecoxib联合羟基喜树碱对缺氧诱导的人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celecoxib联合羟基喜树碱对缺氧诱导的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用三气培养箱在缺氧环境下培养人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。预实验筛选Celecoxib、羟基喜树碱最小有效终浓度,设24、48、72小时为干预时间并筛选最佳作用时间。分别以Celecoxib及羟基喜树碱单独实验筛选的最小有效浓度为联合组浓度;以Celecoxib单独实验筛选最佳作用时间为实验时间。倒置显微镜观察细胞形态学变化;应用四氮唑盐比色法(MTT法)监测细胞增殖活力;Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡;免疫细胞化学法（SP法）检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、COX-2的表达。结果:不同浓度Celecoxib及不同时间对SMMC-7721细胞表现出的生长抑制作用呈剂量依赖性及时间依赖性。Celecoxib（30 mg/L)单用在作用72 h时即可抑制SMMC-7721细胞的增殖。选72 h为作用时间,不同浓度羟基喜树碱对SMMC-7721细胞表现出的生长抑制作用呈剂量依赖性,浓度为0.625 μmol/L羟基喜树碱即可抑制SMMC-7721细胞的增殖。选用羟基喜树碱(0.625 μmol/L)与Celecoxib（30 mg/L)联合作用72 h时,联合抑制作用结果呈现协同作用(Q>1.15)。流式细胞仪检测分析,两种药物均可有效诱导 SMMC-7721细胞的凋亡,并且在上述浓度联合作用时具有协同效应。免疫细胞化学结果显示,Celecoxib（30 mg/L)组和联合用药组细胞质内棕黄色颗粒较对照组染色浅,表明Bcl-2和COX-2蛋白表达有所下降,而Bax蛋白表达在Celecoxib（30 mg/L)和联合用药组中黄色颗粒的阳性细胞较对照组增多,表明Bax蛋白表达有所上调;并且此变化与Celecoxib（30 mg/L)组比较联合用药组有协同作用(P<0.05)。结论:缺氧状态下Celecoxib与羟基喜树碱对SMMC-7721细胞株均有抑制增殖与促进凋亡作用,并且两者联合作用有协同作用;Celecoxib的作用机制除了抑制COX-2外,还可能与下调Bcl-2、上调Bax的表达有关。