姜黄素通过激活ATRAP信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的探究姜黄素抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚相关病理机制。方法 MTT法和乳酸脱氢酶试剂盒检测姜黄素的心肌细胞毒性;200 nmol·L~(-1) AngⅡ孵育心肌细胞24 h诱导心肌肥厚;α-actinin染色观察心肌细胞形态大小;q PCR检测心肌肥大标记物ANF、BNP、β-MHC的m RNA水平;通过Western blot检测AngⅡ受体的抑制蛋白ATRAP的表达情况。结果姜黄素对心肌细胞无明显毒性;200 nmol·L~(-1)的AngⅡ刺激心肌细胞24 h显著诱导心肌细胞肥大;ANP、BNP、β-MHC的m RNA水平显著增高;AngⅡ受体的抑制蛋白ATRAP表达明显降低;姜黄素预作用细胞1 h显著抑制AngⅡ诱导的心肌肥大,逆转AngⅡ降低的ATRAP表达。结论姜黄素抑制AngⅡ诱导的心肌肥大可能与其激活ATRAP信号通路有关。     

miR-34a改变自噬通路AMPK/mTOR的活性在心肌细胞肥大中的作用

目的 研究 miR-34a 与自噬通路磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）在血管紧张素（Ang）Ⅱ 诱导的原代大鼠心肌细胞肥大中的作用。 方法 体外培养原代大鼠心肌细胞, 分成 3 组： 阴性对照慢病毒（NC）组、AngⅡ 刺激+阴性对照慢病毒（AngⅡ +NC）组、AngⅡ 刺激+miR-34a 过表达慢病毒（AngⅡ +miR-34a）组。激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化; 利用荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测 miR-34a、心房钠尿肽（ANP）和 β- 肌球蛋白重链（β-MHC）表达; 利用蛋白印迹（Western blot）测定 AMPK/mTOR 信号通路的活性变化。 结果 与 NC 组比较, AngⅡ +NC 组心肌细胞表面积明显增大（P＜ 0.05）; 与 AngⅡ +NC 组比较, AngⅡ +miR-34a 组心肌细胞表面积减少（P＜ 0.05）。 与 NC 组比较, AngⅡ +NC 组的 miR-34a 表达下调, ANP 和 β-MHC 表达上调（均 P＜ 0.05）; 而与 AngⅡ +NC 组比较, AngⅡ +miR-34a 组的 miR-34a 表达上调, ANP 和 β-MHC 表达下调（均 P＜ 0.05）。 与 NC 组比较, AngⅡ +NC 组 p-AMPK/AMPK 增加, p-mTOR/mTOR 减少（均 P＜ 0.05）; 与 AngⅡ +NC 组比较, AngⅡ +miR-34a 组 p-AMPK/AMPK 减少, p-mTOR/mTOR 增加（均 P＜ 0.05）。 结论 miR-34a 能抑制 AngⅡ 诱导的心肌细胞肥大, 其作用部分是通过改变 AMPK/mTOR 的活性来实现的。     

小鼠不同心肌肥厚模型标志性基因表达变化的比较

目的探索小鼠不同心肌肥厚模型间肥厚性标志基因心房利尿钠肽(ANP)、脑利尿钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)基因表达的差异。方法取C57BL/6小鼠,采用肾上腹主动脉缩窄(AAC)、动静脉瘘(AVF)和异丙肾上腺素(ISO)分别建立小鼠心肌肥厚模型。造模结束,称取各小鼠体重(BW)、心脏重量(HW)和左室重量(LVW),计算心脏重量指数(HW/BW)和左心室指数(LVW/BW);HE染色观察心肌病理组织形态学变化;免疫组织化学染色观察心肌组织ANP、BNP和β-MHC蛋白表达;采用Real-time PCR检测心肌ANP、BNP和β-MHC mRNA表达。结果与对照组比较,3种模型的HW/BW和LVW/BW升高,光镜下观察各模型小鼠心肌呈现不同程度的肥厚性变化,ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均不同程度增加;与AAC组比较,AVF和ISO组心肌组织ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均降低。结论 3种心肌肥厚模型造模成功,AAC模型心肌组织在同时表达肥厚性标志基因ANP、BNP和β-MHC时优于AVF和ISO。     

β-AR/PKA/CaMK Ⅱ信号通路在阿霉素诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的基于β肾上腺素受体信号通路探讨阿霉素诱导心衰发展过程中心肌细胞凋亡的分子生物学机制。方法SD大鼠70只,随机分为对照组(CON组,n=30)和阿霉素组(ADR组,n=40)。ADR组腹腔注射阿霉素,每次3 mg·kg~(-1),连续两周内每隔两天注射1次,共注射5次,累积总量为15 mg·kg~(-1)。于实验第2、4和6周分别观察实验大鼠一般状况和心功能,并取血清,ELISA法测定血清BNP和cTnT浓度。取心脏组织,HE、Masson和TUNEL染色观察病理形态学改变和凋亡,Western blot法检测β1-AR、β2-AR、PKA、CaMKⅡ等蛋白表达的变化。结果阿霉素注射完成后,ADR组EF和SV明显降低,血清BNP和cTn-T明显高于CON组,心脏明显萎缩,并伴随较轻心肌纤维化和凋亡,β1-AR、PKA、CaMKⅡ蛋白表达均降低。随着时间的延长,心脏收缩功能有所恢复,但BNP和cTn-T继续升高,心肌纤维化和凋亡严重,β1-AR表达进一步降低,β2-AR表达未见明显变化,PKA、CaMKⅡ表达逐渐升高。结论阿霉素诱导的心功能障碍、心肌重塑和凋亡动态改变过程可能与β-AR/PKA/Ca MKⅡ信号通路变化有关。     

穿心莲内酯对苯肾上腺素诱导的H9C2细胞肥大和氧化应激的作用及机制

摘 要 目的：探讨穿心莲内酯对苯肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞肥大和氧化应激的作用及机制。方法: 用苯肾上腺素和穿心莲内酯共同孵育H9C2心肌细胞24 h后采用细胞计数检测H9C2心肌细胞活性,采用α-Actin免疫荧光染色观察H9c2细胞表面积,RT-PCR检测H9c2细胞中心房利钠肽（ANP）、B型尿钠肽（BNP）和β 肌球蛋白重链（α-MHC）mRNA的表达水平,免疫印迹法（Western blot）检测H9c2细胞中氧化应激相关蛋白的表达情况。此外,用不同浓度穿心莲内酯和苯肾上腺素共同孵育H9C2心肌细胞24 h后,采用DCFH DA荧光探针检测活性氧簇（ROS）水平,实时定量PCR（RT-PCR）检测各组H9c2细胞中的GP91、NOX4、P67phox、SOD2、NQO1和Gpx的mRNA表达水平。 结果: 穿心莲内酯可以显著缓解苯肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,抑制肥大标志物ANP、BNP、β-MHC的mRNA表达水平。此外,穿心莲内酯以剂量依赖的方式抑制促氧化因子GP91、NOX4和P67phox的mRNA表达水平,促进抗氧化因子SOD2、NQO1和Gpx的mRNA表达水平。以上作用与苯肾上腺素组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,免疫印迹分析证实了穿心莲内酯主要通过活化细胞内Nrf2/HO-1信号通路拮抗苯肾上腺素诱导的氧化应激。 结论: 穿心莲内酯可缓解苯肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,并通过激活Nrf2/HO-1信号通路改善苯肾上腺素诱导的H9C2细胞氧化应激。     

β3肾上腺素能受体阻滞剂SR59230A对心力衰竭大鼠心功能及β3肾上腺素能受体表达的影响

目的：评价β3肾上腺素能受体（β3-AR）阻滞剂SR59230A（SR）对心力衰竭大鼠心功能及β3-AR表达的影响。方法：♂Wistar大鼠85只，取8只设立对照组，其余77只应用异丙基肾上腺素成功建立20只心力衰竭模型后随机分为安慰剂组和SR组，并分别腹腔注射生理盐水和SR，7周后检测超声心动图、血流动力学各指标及β3-AR蛋白表达水平。结果：与安慰剂组比较，SR组短轴缩短率、射血分数、左室收缩末压、左室压力最大上升及下降速率明显增加（P〈0．01或P〈0．05），而心率、左室舒张末压及β3-AR蛋白表达水平显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论：β3-AR阻滞剂SR能够改善心力衰竭大鼠心功能，该作用可能与其直接阻滞并下调β3-AR表达有关。     

TNF-α对原代培养大鼠心肌细胞β_3-AR表达的影响及意义

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对心脏β3-肾上腺素能受体(β3-AR)表达的影响及其在心衰治疗中的意义。方法培养生后2 d SD大鼠心肌细胞,取第4天的细胞加入含不同浓度TNF-α的培养液,检测不同时间作用下β3-AR mRNA及蛋白表达。结果心肌细胞受TNF-α刺激后,β3-AR mRNA及蛋白随着TNF-α作用时间的延长、作用浓度的增加,表达量增加,至作用浓度为1.6 ng/mL、作用时间为12 h达峰值。结论TNF-α作用下心肌β3-AR上调,且有时间及浓度依赖性,这可能是引起心衰的原因之一。     

黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及氧化应激

目的研究Sirt3在黄芪甲苷抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大和氧化应激中的作用。方法α-actinin染色检测心肌细胞大小;MitoSOX染色检测ROS;Real time PCR检测心肌肥大标记物ANP、BNP和β-MHC的mRNA水平;Western blot法检测心肌细胞肥大信号通路蛋白水平。结果100nmol·L-1血管紧张素Ⅱ处理心肌细胞48 h,心肌细胞面积与ANP、BNP、β-MHC mRNA水平显著增加,ROS水平及NOX-2、NOX-4表达显著增加,Sirt3表达显著降低;黄芪甲苷预处理心肌细胞1 h显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的上述效应。Sirt3-siRNA干预Sirt3蛋白水平,显著抑制黄芪甲苷的心肌肥厚抑制作用以及抗氧化作用,上调ROS水平,促进心肌肥大。结论黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大以及氧化应激。     

内源性孤啡肽通过调节β1肾上腺素能受体对大鼠缺血性心律失常的影响

目的 探讨内源性孤啡肽（N/OFQ）对大鼠缺血性心律失常的影响以及心肌细胞β1肾上腺素能受体（β1-AR）在其中的作用。方法 采用结扎左冠状动脉前降支（冠脉）的方法制备大鼠急性心肌缺血模型。将60只大鼠按随机数字表法分为3组，即假手术组（Sham组）、冠脉结扎组（CAO组）和孤啡肽受体拮抗剂（UFP-101）预处理组（U+CAO组），每组20只。3组大鼠分别在冠脉结扎后15 min和1 h 2个时间点各处死10只大鼠。记录心电数据，采用Western blot法分别检测心肌细胞膜以及全细胞β1-AR的表达，RT-qPCR法检测β1-AR mRNA的表达。结果 与Sham组比较，CAO组出现缺血性心律失常，且主要集中在冠脉结扎后15 min内，UFP-101预处理显著降低心律失常发生。15 min 时：与 Sham 组比较，CAO 组全细胞 β1-AR、β1-AR mRNA 表达下调，而细胞膜 β1-AR 上调（均 P＜0.05），U+CAO组全细胞β1-AR蛋白及其mRNA表达无统计学意义（均P＞0.05），而细胞膜β1-AR下调（P＜0.05）；与CAO组比较，U+CAO组全细胞β1-AR蛋白及mRNA表达上调，而细胞膜β1-AR下调（P＜0.05）。1 h时：与Sham组比较，CAO组和U+CAO组全细胞β1-AR蛋白及mRNA表达上调，而细胞膜β1-AR下调（均P＜0.05）。结论 内源性N/OFQ可上调心肌细胞膜β1-AR参与大鼠缺血性心律失常过程。     

黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ（UⅡ）诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子（TGF-β1）的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组：对照组、UⅡ组、UⅡ＋黄芪组。作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用。结论黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展。     

维药异叶青兰总黄酮对去甲肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞肥大的影响

目的研究维药异叶青兰总黄酮(TFDH)对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大的作用,并探讨其作用机制。方法以原代培养的新生大鼠心肌细胞与TFDH 10,25和50μmol·L~(-1)孵育30 min后,加入NE 2μmol·L~(-1)共培养48 h。CCK-8法观察心肌细胞存活率;RT-PCR法检测心肌肥大基因心房利钠肽(ANP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的m RNA表达水平;激光共聚焦法检测心肌细胞的表面积和细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i);破碎细胞后酶促反应测定Ca~(2+)-ATP酶的活性;比色法测定一氧化氮(NO)浓度和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果与细胞对照组相比,NE 2μmol·L~(-1)刺激心肌细胞48 h,可使心肌细胞相对存活率由细胞对照组的(95±1)%下降至(78±5)%(P<0.05);细胞表面积由(178±29)μm~2显著增加至(274±38)μm~2(P<0.05);ANP和β-MHC m RNA相对表达水平显著上调,分别由细胞对照组的1.00±0.01和1.00±0.02升高至2.76±0.55和2.69±0.31(P<0.05);心肌细胞内[Ca~(2+)]_i显著升高,由细胞对照组的(1.00±0.12)升高至(1.52±0.41)μmol·L~(-1),Ca~(2+)-ATP酶的活性显著下调,由细胞对照组的(1.01±0.14)下降至(0.41±0.06)μmol·L~(-1)(P<0.05);NO浓度由细胞对照组的(1.50±0.14)下降至(1.12±0.05)μmol·L~(-1),NOS活性由细胞对照组的(0.86±0.06)下降至(0.52±0.10)μmol·L~(-1)(P<0.05)。给予TFDH 10~50μmol·L~(-1)能对抗NE引起的心肌细胞存活率下降和表面积增大,对NE引起的ANP和β-MHC m RNA表达增加也有一定抑制作用(P<0.05),同时对心肌细胞内[Ca~(2+)]_i升高、Ca~(2+)-ATP酶活性下降及NO浓度和NOS活性下降也具有一定的对抗作用(P<0.05)。结论TFDH能改善NE诱导的心肌细胞肥大,提高心肌细胞存活率,下调ANP和β-MHC m RNA的表达,减小心肌细胞表面积,其机制可能与促进NO释放、调节细胞内Ca~(2+)浓度和a~(2+)-ATP酶活性有关。     

四氢姜黄素对压力负荷引起的小鼠心肌肥厚的保护作用

目的 探究四氢姜黄素（THC）能否减轻压力负荷引起的成年小鼠病理性心肌肥厚。方法 24只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术（Sham）组、THC组、主动脉弓缩窄（TAC）组及TAC+THC组,每组6只。通过TAC术建立小鼠心肌肥厚模型,Sham组和THC组不结扎主动脉弓。TAC术后每日通过饮水摄入THC（120 mg/kg）。TAC术后4周检测小鼠心脏功能,分离心脏和肺脏计算心脏/体质量比和肺脏/体质量比,HE 染色计算心肌细胞平均横截面积,Masson 染色观察心脏组织胶原沉积程度,Western blotting 检测 α-肌球蛋白重链（α-MHC）、β-肌球蛋白重链（β- MHC）蛋白表达,实时定量PCR（real-time PCR）检测心房钠尿肽（ANP）mRNA表达情况。结果 TAC术后4周,小鼠发生病理性心肌肥厚,表现为心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达较Sham组小鼠明显增高,而左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和α-MHC表达较Sham组小鼠明显降低。与TAC组相比,THC处理可以明显缓解TAC引起的病理性心肌肥厚,改善心脏功能,提高α-MHC表达,降低心脏/体质量比、肺脏/体质量比、心肌细胞平均横截面积、心脏组织胶原沉积、β-MHC和ANP表达（均P＜ 0.05）。结论 THC能够有效减轻压力负荷引起的病理性心肌肥厚。     

β3肾上腺素能受体与心力衰竭的研究进展

早期关于β3肾上腺素能受体(B3-adrenergic receptors,B3-AR)的研究主要限于代谢性疾病,近来发现心脏β-AR激动表现为负性肌力作用,这与心力衰竭(heart failure,HF)的发生发展密切相关.本文就β-AR与HF的研究进展作以综述.     

β3肾上腺素能受体与心力衰竭的研究进展

早期关于β3肾上腺素能受体(B3-adrenergic receptors,B3-AR)的研究主要限于代谢性疾病,近来发现心脏β-AR激动表现为负性肌力作用,这与心力衰竭(heart failure,HF)的发生发展密切相关.本文就β-AR与HF的研究进展作以综述.     

β3肾上腺素能受体与心力衰竭的研究进展

早期关于β3肾上腺素能受体(B3-adrenergic receptors,B3-AR)的研究主要限于代谢性疾病,近来发现心脏β-AR激动表现为负性肌力作用,这与心力衰竭(heart failure,HF)的发生发展密切相关.本文就β-AR与HF的研究进展作以综述.     

西红花酸在AngⅡ诱导的大鼠肺成纤维细胞中的作用

目的:通过观察西红花酸(CRT)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肺成纤维细胞(LFB)增殖及转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ERK1/2和P-ERK1/2基因蛋白水平的影响,探讨其抗肺纤维化的作用机制.方法:酶消化法提取原代LFB,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR法相对定量检测TGF-β1和COL-Ⅰ mRNA表达,Western Blot法检测α-SMA、ERK1/2和P-ERK1/2蛋白的表达.结果:10-7、10-6 mol· L-1西红花酸可显著减少AngⅡ诱导的LFB细胞增殖,降低TGF-β1和COL-Ⅰ mRNA的表达,降低α-SMA和P-ERK1/2的蛋白表达.结论:西红花酸可显著减少AngⅡ诱导的LFB细胞增殖,并呈剂量依赖关系,其作用机制可能与调节TGF-β1-ERK1/2信号通路有关.     

阿托伐他汀对体外心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨阿托伐他汀体外抑制心肌肥厚的药理作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥厚模型,以不同浓度的阿托伐他汀作用于心肌细胞,用软件分析测量心肌细胞表面积,3H-亮氨酸参入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素(ANP),脑钠素(BNP)和特异分布于心脏的丝氨酸蛋白酶(Corin)的表达变化。结果AngⅡ可成功诱导体外培养的新生大鼠心室肌细胞肥大,表现为心肌细胞面积和3H-亮氨酸的参入增加,ANP、BNP、Corin表达升高等特征性改变,从而分析阿托伐他汀对心肌肥厚的作用。阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性,而作为溶剂的DM-SO对肥大的心肌细胞差异无显著性。结论阿托伐他汀抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,预示其具有降脂以外的其他重要药理作用。     

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。     

TGF-β对 AngⅡ调节人成纤维细胞 Toll 样受体2表达中的影响

目的：研究生长转化因子β（ transforming growth factor beta ,TGF-β）在血管紧张素Ⅱ（ AngiotensinⅡ,AngⅡ）对体外培养的人成纤维细胞（HT-1080）toll样受体2（toll like receptor 2,TLR2）调控中的作用。方法取处于对数生长期的成纤维细胞,分为5组：空白对照组、阴性对照组,AngⅡ刺激组、TGF-β刺激组、TGF-β抑制剂Decorin＋AngⅡ共刺激组。给药后采用实时定量PCR检测各组细胞内TLR2基因的表达量,并对各组结果进行统计分析。结果AngⅡ作用组中TLR2的表达量高于空白对照组（ P ＜0．05）;TGF-β组中低浓度（0．1、0．01μg/L）促进细胞内TLR2的表达,且表达量高于空白对照组,高浓度（1．0、10μg/L）抑制TLR2的表达,且表达量低于空白对照组（ P ＜0．05）;TGF-β抑制剂Decorin和AngⅡ联合作用组中TLR2的表达量高于空白对照组,且最高表达量高于其他各组（ P ＜0．05）。结论 AngⅡ能够上调HT-1080中TLR2的表达量;TGF-β高浓度时抑制HT-1080中TLR2表达量,低浓度时促进TLR2的表达;在TGF-β低浓度时可与AngⅡ协同促进HT-1080中TLR2的表达。     

基于报告基因检测的β3肾上腺素受体激动剂筛选模型的建立与应用

目的：建立基于双荧光素酶报告基因检测的β3肾上腺素受体（β3-AR）激动剂筛选模型,并用于β3-AR激动剂的筛选。方法：应用免疫细胞化学法鉴定β3-AR在β3-CHO细胞上的稳定表达,并将pCRE-luc质粒与pRL-TK质粒共同瞬时转染β3-CHO细胞,建立一种基于双荧光素酶报告基因检测的β3-AR激动剂筛选模型。通过检测报告基因萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性的比值,来间接反映配体对β3-AR的激动活性。并以β-AR激动剂异丙肾上腺素刺激对模型的有效性进行验证,在此基础上以此模型对20种新化合物的β3-AR激动活性进行筛选。结果：β3-CHO细胞经免疫细胞化学法鉴定有特异性受体蛋白表达。通过将两个报告基因质粒转染该细胞后,与加入溶剂对照相比,加入异丙肾上腺素可显著促进荧光素酶报告基因的表达,表明该模型有效、可靠。以此模型从20个化合物中初筛出8个活性较强的β3-AR激动剂。结论：本研究建立了基于双荧光素酶报告基因检测的β3-AR激动剂筛选模型,并以此模型筛选发现了几个活性较强的β3-AR激动剂。