缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。     

氧化苦参碱下调ZNF580以抑制LTC-14细胞分泌细胞外基质的分子机制研究

目的 探讨氧化苦参碱（OM）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠胰腺星状细胞 LTC-14中细胞外 基质（ECM）分泌的影响及其分子机制。方法 取生长良好的 LTC-14细胞株,分为对照组（正常培养的 LTC-14细 胞）,TGF-β1组（10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1+OM组（1 g/L OM预处理 30 min,再加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1 + SiZNF850组（LTC-14细胞中瞬时转染 ShRNA-ZNF580质粒,24 h后加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）。实时定量 PCR、Western blot 检测细胞内 Smad2、Smad3、ZNF580、α-肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）的mRNA和蛋白表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ECM中 胶原蛋白-Ⅰ（Col-Ⅰ）、Col-Ⅲ、纤维连接蛋白（FN）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的分泌情 况。结果 TGF-β1诱导的 LTC-14细胞中 Smad2、Smad3、ZNF580和 α-SMA的 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜ 0.05）,MMP-2/TIMP1比值下降（P＜0.05）,且 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β的分泌水平升高（P＜0.05）;而用 OM预处理或沉默 ZNF580基因后,LTC-14细胞中 TGF-β1/Smads通路 Smad2、Smad3、α-SMA和 ZNF580的 mRNA和 蛋白表达水平均下调（P＜0.05）,MMP-2/TIMP1表达比值升高（P＜0.05）,细胞外基质 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β分泌水平均降低（P＜0.05）。结论 OM通过抑制胰腺星状细胞LTC-14中TGF-β1/Smads通路激活,下调ZNF580, 阻滞胰腺星状细胞的活化,使ECM分泌减少、降解增多,减轻胰腺纤维化。ZNF580可能是OM作用的分子靶点。     

miR-144通过TGF-β/Smad通路抑制前列腺癌细胞的增殖侵袭

摘要：目的:观察微小RNA（miR）-144对前列腺癌细胞增殖侵袭的影响及其对转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LNCaP、PC-3、SW1990人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-144的表达水平;以miR-144表达量最低的PC-3细胞和表达量最高的LNCaP细胞作为研究对象,转染miR-144 mimics-NC序列为NC组,转染miR-144 mimics序列为miR-144过表达（mimics）组,荧光显微镜观察转染情况; qRTPCR检测转染后miR-144的表达水平,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,生物信息学预测及荧光素酶报告基因检验miR-144的潜在靶基因,蛋白免疫吸附法（Western Blot）检测TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,LNCaP、PC-3、SW1990前列腺癌细胞中miR-144的表达水平均显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics转染后细胞转染效率均达到90%以上。与NC组比较,mimics组细胞中miR-144的相对表达水平显著升高,细胞的增殖活性和侵袭能力显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TGF-β-Wt+miR-144 mimics-NC共转染组比较,TGF-β-Wt+miR-144 mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。TGF-β转录本3’UTR区域具有miR-144的潜在靶点,miR-144潜在靶基因为TGF-β,在24～120 h,与miR-144 mimics-NC组相比,miR-144 mimics、miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著降低（P<0.05）;与miR-144 mimics组相比,miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较,mimics组细胞中p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平及TGF-β、TGF-βR蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论:miR-144可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。     

5-氟尿嘧啶激活 TGF-β1／Smad 通路治疗结肠癌的机制研究

目的：探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）通过激活转化生长因子β1／Smad（TGF -β1／Smad）通路治疗结肠癌的机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,氧化偶氮甲烷处理组（ AOM组）和AOM及5-Fu处理组（ AOM＋5-Fu组）,每组8只。通过实时定量PCR、免疫印迹及免疫组织化学方法观测5-Fu处理后结肠癌组织中TGF-β1及其Ⅱ型受体（ TGF-βRⅡ）和下游Smad基因家族成员Smad4表达的变化。结果与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1 mRNA、TGF-βRⅡmRNA和Smad4 mRNA的表达显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比,AOM＋5-Fu组TGF-β1 mRNA、TGF-βRII mRNA和Smad4 mRNA的表达显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4与β-actin的比值显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比, AOM＋5-Fu组处理后TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4与β-actin的比值显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。与对照组大鼠相比,AOM组大鼠TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的AOD值显著降低（ P ＜0．01）;与AOM组大鼠相比,AOM＋5-Fu组处理后TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的AOD值显著增加（ P ＜0．01）,但没有恢复到对照组水平。结论5-Fu能够提高结肠癌组织中TGF-β1,TGF-βRⅡ和Smad4的表达,激活了TGF-β1／Smad通路。     

去甲斑蝥素对TGF—β1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2／3表达的影响

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株（HK－2）上皮细胞间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）以及信号蛋白Smad2／3的影响。方法体外培养HK2细胞,分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组（NCTD组）。对照组为无血清DMEM培养,TGG-β1组为TGF-β1 5ng·mL^-1诱导,NCTD组为不同浓度NCTD（0．5、1．0、2．5μg·mL^-1）与TGF-β1（5ng·mL^-1）共同作用,各组作用时间48h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮性钙黏附蛋白（Ecadherin）与Smad2、Smad3mRNA表达;采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2／3、p-Smad2／3蛋白质表达。结果与对照组相比,TGF-β1组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显上调（Pd0．05）,E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调（P〈0．05）;与TGF-β1组相比,NCTD干预组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显下调（P〈0．05）,而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调（P〈0．05）,且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Smad2、Smad3rnRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达上调（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,NCTD干预组Smad2、Smad3mRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达下调（P〈0．05）,具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与其下调信号蛋白Smad2／3的表达有关。     

川芎嗪对人肝星状细胞TGF-β1信号传导的影响

目的：探讨中药单体川芎嗪（TMP）对肝星状细胞（HSC）转化生长因子-β1（TGF-β1）信号传导的影响。通过检测TGF-β1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体、Smad 3及Smad 7 mRNA表达的变化,探讨川芎嗪抗肝纤维化作用的相关机制。方法：体外培养人肝星状细胞,RT-PCR法检测HSC中TGF-β1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体、Smad 3及Smad 7 mRNA表达。结果：与阴性对照组相比,TMP A、B、C各组均可显著降低TGF-β1 mRNA（P〈0.01）;TMP B、C组TβRⅠmRNA相对表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;TMP B、C浓度组的TβRⅡmRNA、Smad 3 mRNA表达量显著降低（P〈0.01）;TMP B、C组可显著升高Smad 7 mRNA表达量（P〈0.01）。结论：川芎嗪可降低HSC中TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体及Smad 3 mRNA表达,同时促进Smad7 mRNA表达,表明川芎嗪可抑制肝星状细胞的活化、增殖,这可能与阻断TGF-β/Smad通路的信号传导有关。     

玉夏胶囊对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察玉夏胶囊对自发性高血压（SHR）大鼠心肌纤维化的影响及可能机制。方法:SHR 28只,随机分为模型组（0.5%CMC-Na5 m L/kg）、玉夏胶囊高（0.6 g/kg）、中（0.3 g/kg）、低（0.15 g/kg）剂量组,每组7只。另设Wistar-Kyoto（WKY）正常对照组（0.5%CMC-Na 5 m L/kg）大鼠7只。每天灌胃一次,连续10周。VG染色观察心肌胶原纤维变化;检测心肌羟脯氨酸（Hyp）、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）含量;免疫组化法检测转化生长因子β₁（TGF-β₁）蛋白的表达;Western blot检测心肌Ⅰ型胶原纤维（Col Ⅰ）、Ⅲ型胶原纤维（Col Ⅲ）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达。结果:玉夏胶囊能减轻SHR心肌组织胶原纤维沉积,降低Hyp和Ang Ⅱ的含量,减少TGF-β₁、CTGF、Col Ⅰ和ColⅢ的蛋白表达。结论:玉夏胶囊可改善SHR的心肌纤维化,其机制可能与降低Ang Ⅱ含量,下调TGF-β₁和CTGF表达,减少Hyp、Col Ⅰ和Col Ⅲ产生有关。     

FGF21对HepG2细胞TGF-β信号通路的影响

目的研究FGF21对TGF-β/Smads信号通路中相关蛋白和mRNA表达的影响。方法采用Western blot法检测HepG2 cells的TGF-1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的蛋白表达水平和采用Q-PCR方法检测HepG2 cells的TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的mRNA表达水平。结果在不同FGF21浓度下,TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7蛋白和mRNA表达水平不同(P<0.05)。结论 FGF21通过促进TGF-β信号通路中的信号分子或受体的表达,或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。     

氯沙坦抑制AngⅡ诱导的内皮单核细胞黏附涉及下调CXCR2受体表达

目的探讨氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的内皮单核细胞黏附的影响及可能分子机制。方法 AngⅡ(10-6mol.L-1)培养人脐静脉内皮细胞4 h或24 h,并加入不同浓度的氯沙坦(1、3、10μmol.L-1)预处理1 h。检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、内皮单核细胞黏附、上清液中白介素-8(interleukin-8,IL-8)水平、IL-8受体CXCR2 mRNA表达以及核转录因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活性。结果 AngⅡ(10-6mol.L-1)培养内皮细胞后显著增加细胞内ROS水平,上清液中IL-8水平,激活NF-κB,增加内皮单核细胞间黏附,上调IL-8受体CXCR2mRNA表达。氯沙坦呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的ROS水平的增加,抑制NF-κB的激活,减少IL-8的释放,下调CXCR2 mRNA表达,从而抑制内皮单核细胞黏附。结论氯沙坦可能通过抑制氧化应激-NF-κB-IL-8/CXCR2通路抑制AngⅡ诱导的内皮单核细胞黏附。     

TRV027在血管紧张素Ⅱ下调心肌细胞缝隙连接蛋白43表达中的作用

目的 探讨TRV027是否通过影响AngⅡ并激活β-arrestin蛋白,从而影响心肌细胞Cx43的表达。方法 通过培养大鼠心肌细胞（H9C2细胞）,将其分为四组：对照组（无药物干预）、AngⅡ组（1×10-5mol/L AngⅡ干预48h）、TRV027组（1×10-8mol/L TRV027干预24h）、AngⅡ+TRV027组（1×10-5mol/L AngⅡ干预24h后,1×10-8mol/L TRV027干预24h）。采用蛋白质印迹（WB）法检测Cx43和β-arrestin的蛋白表达水平,PCR法检测Cx43和β-arrestin的mRNA表达水平,免疫荧光法观察上述两种蛋白在细胞内的表达情况。应用ImageJ分析图像,SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 WB结果显示,与对照组相比,AngⅡ组H9C2细胞Cx43和β-arrestin的蛋白表达量明显降低（P<0.01）;与AngⅡ组相比,AngⅡ+TRV027组和TRV027组H9C2细胞Cx43和β-arrestin的蛋白表达量明显升高（P<0.01）。PCR结果显示,与对照组相比,AngⅡ组H9C2...     

KATP通道开放剂对气道平滑肌细胞增殖表达及SOCS3/5免疫失衡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道（KATP通道）开放剂对气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖过程的影响,以及细胞因子信号转导抑制蛋白3/5 （SOCS3/5）表达变化与转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌释放水平的关系.方法 体外构建增殖型ASMCs原代培养细胞模型,分为ASMCs组、AngⅡ.ASMCs组、淋巴细胞（L）组、ASMCs＋L组和AngⅡ.ASMCs＋L组.Real-time PCR检测细胞中SOCS3 mRNA及SOCS5 mRNA表达的差异;ELISA法检测上清液中TGF-β1的释放水平.观察KATP通道开放剂尼可地尔（NCR）干预的影响.结果 与ASMCs组比较,AngⅡ.ASMCs组TGF-β1的表达水平明显升高（P＜0.01）;NCR作用于细胞后各组ASMCs表达TGF-β1与格列本脲（GLI）比较明显减少（P＜0.05）.与ASMCs＋L组比较,AngⅡ·ASMCs＋L组SOCS3 mRNA表达增加,而SOCS5 mRNA表达减少（P＜0.05）.NCR可以下调SOCS3的表达,上调SOCS5的表达.结论 KATP通道开放可以通过抑制ASMCs增殖而调控TGF-β1分泌表达;SOCS3和SOCS5可能是哮喘气道重塑的特异性免疫治疗中的重要靶点.     

SHR大鼠肾组织AngⅡ和TGF-β/Smads水平变化与肾纤维化的关系及依那普利干预效果

摘要：目的 探讨依那普利对自发性高血压大鼠（SHR）肾组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和TGF-β/Smads通路相关因 子mRNA表达的影响。方法 20只雄性SHR随机分成模型组和依那普利组;另取雄性Wistar-Kyoto（WKY）大鼠10只 作为对照组。依那普利组给药剂量为1.05 mg/ （kg·d）,每日1次灌胃,持续10周,模型组和对照组灌胃等量生理盐水。 每2周监测1次血压,10周后处死动物并取材。使用脲酶法检测各组大鼠血尿素氮（BUN）水平,采用酶联免疫吸附测 定（ELISA）i法检测各组AngⅡ、血清胱抑素C（CysC）、尿微量白蛋白（mALB）水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理变 化,实时荧光定量PCR检测肾组织中AngⅡ、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）和Ⅳ型 胶原（CollagenⅣ）的mRNA相对表达量。结果 给药前（0周）,与对照组相比,模型组和依那普利组大鼠收缩压与舒张 压均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,依那普利组收缩压与舒张压差异无统计学意义（P＞0.05）;药物干预后,与模 型组比较,依那普利组的收缩压与舒张压均显著下降（P＜0.05）。与对照组比较,模型组AngⅡ、BUN、CysC和尿mALB 水平明显升高（P＜0.05）;肾组织出现大量蓝色胶原纤维沉积,同时AngⅡ、TGF-β1、Smad2、Smad3、CollagenⅠ和Collagen Ⅳ的mRNA相对表达量明显升高（P＜0.05）。与模型组相比,依那普利组肾组织胶原纤维沉积程度明显减轻,血清及肾 组织中上述指标均明显下降（P＜0.05）。结论 依那普利可对SHR起到稳定的降压作用,并通过降低AngⅡ的水平、抑 制TGF-β/Smads信号通路的表达,减轻肾纤维化,改善高血压导致的肾损伤。     

姜黄素衍生物对原代大鼠肝星状细胞作用的体外研究

目的：观察姜黄素衍生物（Curc-OEG）抑制原代肝星状细胞（HSC）增殖、活化以及诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法：采用IV型胶原酶、DNA酶消化SD雄性大鼠肝脏,percoll梯度离心得到纯化的肝星状细胞。细胞分离后1d分别加入0、6.25、12.5μg/mL的姜黄素衍生物,作用7d后用RT-PCR及Western blot检测细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2的mRNA水平和蛋白表达量。活化的肝星状细胞在第14天分别加入0、6.25、12.5、25、50、75μg/mL的姜黄素衍生物,作用24h后RT-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2的mRNA水平和纤维化相关基因TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA水平。结果：药物作用7d后,6.25μg/mL和12.5μg/mL浓度药物处理组与对照组相比,细胞数目分别减少了56%和86%。在12.5μg/mL浓度药物作用下,原代肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及Smad2的mRNA表达水平分别下调83%、85%及75%,蛋白表达水平分别下调94%、92%及73%（P〈0.05）。25μg/mL浓度药物作用24h后,细胞凋亡明显。在50μg/mL浓度药物作用下,活化的肝星状细胞Bax的mRNA表达水平上调约2.3倍,Bcl-2的mRNA表达水平下调约5.6倍;TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA表达水平分别下调90%、83%、74%、65%（P〈0.05）。结论：姜黄素衍生物可以明显抑制原代肝星状细胞的增殖和活化,促进活化的肝星状细胞凋亡及减少细胞外基质的沉积。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

雷公藤内酯醇减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞活化与抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路相关

目的通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性。方法以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模型。MFBs活化状态通过检测小鼠成纤维细胞中α-SMA(RT-PCR、Western blot方法)和ColⅠ(RT-PCR、ELISA方法)的表达,通路活性采用Western blot法检测p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平。ERK siRNA及Smad3 siRNA观察ERK、Smad3在MFBs活化中的地位。结果 TGF-β1激活p-ERK/p-Smad3(Ser208)及p-Smad3(Ser423),诱导成纤维细胞表达α-SMA,活化为MFBs,合成Col I明显增多;使用ERK siRNA及Smad3 siRNA确定了ERK及Smad3均参与α-SMA、ColⅠ的表达,其中ERK可能通过磷酸化Smad3连接区(Ser208)起相关作用。小鼠胸部照射可致肺组织中p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平上调,α-SMA表达增加,显示多量MFBs活化。TPL对体内和体外实验中ERK、Smad3(Ser208)、Smad3(Ser423)的磷酸化活化均有明显抑制作用,可明显下调α-SMA表达及ColⅠ合成,减少MFBs的活化。结论 TPL可通过抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,减少肺部照射后MFBs活化,从而抑制放射性肺纤维化进展。     

汉防己甲素对TGF-β1诱导L929细胞活化和分泌FN、α-SMA的影响

目的 研究汉防己甲素对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的L929细胞活化和分泌纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的作用.方法 体外培养L929细胞,分别以TGF-β1和汉防己甲素作用,观察细胞形态变化,测定FN及α-SMA mRNA、蛋白质表达水平.结果 TGF-β1诱导L929细胞72 h,能显著上调FN及α-SMA mRNA、蛋白质表达;加入汉防己甲素后能显著抑制FN和α-SMA的表达.结论 汉防己甲素能够抑制TGF-β1诱导L929细胞活化和分泌细胞外基质的作用.     

复方丹参滴丸对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子 β1/Smads信号通路表达的影响

目的 观察复方丹参滴丸(DSP)对糖尿病大鼠肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路表达的影响.方法 链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型,大鼠采用随机数字表法分为正常组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、复方丹参滴丸低剂量组(DSP低剂量组)、复方丹参滴丸高剂量组(DSP低剂量组).DSP低、高剂量组大鼠每天分别给予200、400 mg/kg的DSP与生理盐水混悬液灌胃治疗,每日1次.8周末,检测各组大鼠空腹血糖、血肌酐、尿素氮表达水平;荧光定量PCR法检测各组大鼠肾脏组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组大鼠肾脏组织TGF-β1的蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠尿中肾损伤分子-1(KIM-1)、骨桥蛋白(OPN)以及肾脏组织p-Smad2、p-Smad3、Smad7的浓度水平.结果 与NC组相比,DM组大鼠空腹血糖[(27.19±1.55)mmol/L比(5.94±1.15)mmol/L]、血肌酐[(39.25±2.18)μmol/L比(26.20±1.18)μmol/L]、尿素氮[(12.81±0.65)mmol/L比(6.25±0.41)mmol/L]、尿KIM-1[(67.90±1.69)ng/L比(17.85±1.14)ng/L]、OPN浓度[(58.74±1.34)ng/L比(15.40±1.01)ng/L]明显升高(P<0.05);肾脏TGF-β1的mRNA[(1.72±0.15)比(1.00±0.00)]和蛋白表达[(0.81±0.05)比(0.27±0.06)]明显升高(P<0.05);肾脏Smad2[(1.80±0.09)比(1.00±0.00)]、Smad3的mRNA表达[(1.90±0.07)比(1.00±0.00)]以及p-Smad2[(69.45±1.43)ng/L比(10.71±1.09)ng/L]、p-Smad3的浓度[(65.73±1.79)ng/L比(9.84±0.33)ng/L]均明显升高(P<0.05),而肾脏Smad7的mRNA表达[(0.52±0.05)比(1.00±0.00)]和浓度[(10.61±0.65)ng/L比(21.02±1.32)ng/L]均明显降低(P<0.05).与DM组相比,DSP低、高剂量组大鼠空腹血糖、血肌酐、尿素氮、尿KIM-1、尿OPN浓度明显降低(P<0.05),并抑制了肾脏TGF-β1/Smads信号通路的活性.结论 DSP可能通过抑制DM大鼠肾脏TGF-β1/Smads信号通路,从而延缓DM大鼠肾脏损伤.     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

染料木素保护血管紧张素Ⅱ致高血压小鼠心脏纤维化

目的：探讨染料木素在血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）诱导的高血压小鼠心脏纤维化中的作用。方法30只雄性C57BL／6J小鼠随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋染料木素组,每组10例。 AngⅡ组以1500 ng· kg－1· min－1连续泵入4．32μg／μl AngⅡ7 d,AngⅡ＋染料木素组在AngⅡ泵入前5 d开始皮下注射染料木素0．1μmol／kg,持续至AngⅡ泵入结束,对照组以乙酸代替AngⅡ泵入。心脏超声检测3组小鼠心功能的改变,病理染色检测心脏纤维化程度,实时定量PCR检测collagen Ⅰα、collagenⅢ、MMP-9、TGF-β1的mRNA表达量的变化,Western Blot检测3组小鼠心脏自噬的改变。结果染料木素可明显改善心功能,减轻Ang Ⅱ诱导的心脏纤维化程度,Ang Ⅱ＋染料木素组LVEF和LVFS与AngⅡ组相比增加,且舒张期E峰运动速率升高（ P ＜0．05）,实时定量PCR检测显示AngⅡ＋染料木素组collagen Ⅰα、collagen Ⅲ、MMP-9、TGF-β1的mRNA表达量较AngⅡ组显著降低（ P ＜0．05）,Western－blot检测结果显示,AngⅡ处理能增加心脏自噬标志物LC3的蛋白表达（ P ＜0．05）,而染料木素可显著减轻ISO导致的LC3Ⅱ表达量的增加（ P ＜0．05）。结论染料木素能减轻AngⅡ诱导的心脏纤维化,其主要是通过降低AngⅡ诱导的心脏自噬而发挥作用的。     

大麻素受体2激动剂AM1241对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖、活化及凋亡的影响

目的 探究大麻素受体2激动剂AM1241对转化生长因子（TGF）-β1诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增 殖、活化与凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养HSC-T6,采用CCK-8法检测AM1241对空白对照组（空白培 养基）、阴性对照组（未加药品）、TGF-β1 组（5 μg/L TGF-β1）及 20、40、80、160 μmol/L AM1241 组（5 μg/L TGF-β1+ 20、40、80、160 μmol/L AM1241）HSC-T6增殖的影响,计算半数抑制浓度（IC50）。采用流式细胞术检测阴性对照组、 TGF-β1组、30 μmol/L AM1241组、60 μmol/L AM1241组HSC-T6凋亡情况;采用Western blot检测阴性对照组、TGF- β1 组、27 μmol/L AM1241 组 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、凋亡相关蛋白 Bax、 cleaved caspase-3、JNK及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。结果 与TGF-β1组比较,AM1241可 抑制HSC-T6增殖能力,且呈剂量依赖性（P＜0.05）。AM1241的IC50为27 μmol/L。30、60 μmol/L AM1241组HSC-T6 凋亡率较TGF-β1组明显上升,且60 μmol/L AM1241组高于30 μmol/L AM1241组（P＜0.05）。27 μmol/L AM1241组 α-SMA 和 bFGF 蛋白表达水平较 TGF-β1 组降低,Bax、cleaved caspase-3、p-JNK 蛋白表达水平较 TGF-β1 组升高 （P＜0.05）。结论 大麻素受体2激动剂AM1241能抑制TGF-β1诱导的HSC-T6的增殖与活化,并促进其凋亡,其作 用机制可能与JNK通路有关。